亲和柱的制备实验_配基固相化技术
实验方法原理溴化氰活化的琼脂糖凝胶用于配体固相化是实验室最常用的固相化技术之一。其原理是溴化氰活化的介质与配体主要的氮基反应形成异脲键。但是这样偶联的亲和柱多次重复使用时，将会有少量配体脱落，所以反复使用的亲和柱应考虑选择其他活化的介质。异脲键的形成伴有荷电基团的增加，将会影响离子交换作用。为了克服这一影响要在纯化时采用至少 0.1 mol／L 的缓冲盐液。该固相化方法简便廉价，并可广泛用于蛋白质、核酸和凝素。实验材料溴化氰活化的琼脂糖凝胶试剂、试剂盒盐酸偶联缓冲液阻断缓冲液仪器、耗材玻璃漏斗玻璃棒真空泵实验步骤1. 取 2 g 溴化氰活化的琼脂糖凝胶加入玻璃漏斗内 1 mmol/L 盐酸中，用玻棒轻轻搅动 20 min直至介质完全溶胀。静置待混悬的介质沉降后，用真空泵吸去液体。1 g 干凝胶可以获得 3.5 ml 溶胀胶；2. 用 200 ml 1 mmol/L 盐酸洗介质，共3次，每次洗后吸去液体；3. 用偶联缓冲液（0.1......阅读全文
亲和柱的制备实验_配基固相化技术
实验方法原理溴化氰活化的琼脂糖凝胶用于配体固相化是实验室最常用的固相化技术之一。其原理是溴化氰活化的介质与配体主要的氮基反应形成异脲键。但是这样偶联的亲和柱多次重复使用时，将会有少量配体脱落，所以反复使用的亲和柱应考虑选择其他活化的介质。异脲键的形成伴有荷电基团的增加，将会影响离子交换作用。为了克服
亲和柱的制备实验
配基固相化技术 实验方法原理 溴化氰活化的琼脂糖凝胶用于配体固相化是实验室最常用的固相化技术之一。其原理是溴化氰活化的介质与配体主要的氮基反应形成异脲键。但是
亲和柱的制备实验
实验方法原理 溴化氰活化的琼脂糖凝胶用于配体固相化是实验室最常用的固相化技术之一。其原理是溴化氰活化的介质与配体主要的氮基反应形成异脲键。但是这样偶联的亲和柱多次重复使用时，将会有少量配体脱落，所以反复使用的亲和柱应考虑选择其他活化的介质。异脲键的形成伴有荷电基团的增加，将会影响离子交换作用。为了克
亲和色谱法原理
在生物体内，许多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等，都具有这种特性。生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力，根据生物分子间亲和吸附和解离的原理，建立起来的色谱法称亲色谱法。亲和色谱
亲和色谱法的基本原理
亲和色谱法是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。首先将载体在碱性条件下用溴化氰(CNBr)活化,再用化学方法将能与生物分子进行可逆性结合的物质(称为配基结合到某种活化固相载体上此过程称为偶联反应。将偶联反应得到的亲和吸附剂装入层析柱中而形成亲和柱,溶液样品通过亲和柱时,生物大分子和亲和
固相萃取技术固相萃取技术简要过程
固相萃取技术简要过程1.一个样品包括分离物和干扰物通过吸附剂；2.吸附剂选择性的保留分离物和一些干扰物，其他干扰物通过吸附剂；3.用适当的溶剂淋洗吸附剂，使先前保留的干扰物选择性的淋洗掉，分离物保留在吸附剂床上；4.纯化、浓缩的分离物从吸附剂上淋洗下来。
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
方案1 双向凝胶电泳鼠肝蛋白质提取物的制备实验 方案2 双向凝胶电泳真核生物细胞裂解物的制备实验 方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备实验 方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验 方案5 第一向：蛋白质的等电聚焦电泳实验
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验实验方法原理可用乙醇沉淀人类脑脊液以浓缩其中的蛋白质和除去盐分，否则这些物质会干扰第一向 IEF。实验材料人类脑脊液试剂、试剂盒乙醇NaOH增溶溶液β-巯基乙醇仪器、耗材离心管冷冻离心机超声波仪实验步骤1.在室温下解冻脑脊液样品。当样品解冻后，旋紧试管盖，
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
实验方法原理 肝与其他动物组织一样，可制备用作双向电泳的材料。离心之后，溶于合适的溶液中即可。不需要浓缩蛋白质或去除干扰物质等额外步骤。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采碱去垢剂ASB-14，它们配合使用可最大量地溶解蛋白质。实验材料 鼠肝试剂、试剂盒 二硫苏糖醇（DTT)抽提溶液苯甲基硫酰
免疫亲和色谱法－技术的应用
1)免疫萃取(innunoextraction)IAC 技术最简单的应用就是单纯作为样品的预处理手段,即制备免疫亲和柱,也称为离线(off-line)IAC。现在市场上已有克伦特罗、黄曲霉毒素等多种免疫亲和柱出售,使用效果非常好。2)IAC 联用技术IAC 联用技术也可称为在线 IAC。将 IAC
实验室分析方法气相色谱固相萃取技术固相萃取法
固相萃取的操作原理是将液态或溶解后的固态样品倒入活化过的SPE柱，然后利用抽空或加压使样品进入SPE柱的固定相。利用固定相和样品组分间的相互作用实现对目标组分的富集和对样品基质的去除。为提高处理效率，可以采用SPE歧管真空装置同时处理多个样品。一般地，SPE在分离步骤中保留感兴趣的组分和类似的其他组
固相萃取技术
固相萃取（Solid Phase Extraction）就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。固相萃取作为样品前处理技术，在实验室中得到了越来越广泛的应用。
固相萃取技术
萃取售后及服务所占比重 固相萃取(SPE)技术已商品化二十多年，至今仍在发现更多的应用领域。这项技术的发展似乎可归功于供应商可在特定领域提供应用支持，尤其是在临床科学、制药、毒理学、杀虫剂以及残留物分析领域。 SPE市场可以分为三种产品类型：自动化系统、非自动化系统和相关的
固相萃取技术
液液分配（LLE）有许多局限性，例如需要大量不互溶溶剂；样品处理步骤复杂；样品回收率和精密度不理想；处理过程中乳液的形成，和溶剂蒸发时产生的样品损失等等。固相萃取（SPE）主要用于样品分析前的净化或浓缩富集。与传统的液-液萃取相比，由于其采用了高效、高选择性的固定相，能显著减少溶剂用量，简化样品预处
色谱分析技术（高压液相色谱、亲和色谱法和吸...（二）
二、易出现的问题（一）涡流扩散（Eddy diffusion）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流
新型功能化固相萃取材料的制备及其的富集分离应用
信息技术的广泛应用以及数学、物理学、生命科学和材料科学等学科的新成就的不断引入,极大地丰富了分析化学的内容,现代分析化学不仅仅是测定物质的化学组成和含量的分析方法及其有关的科学,还成为化学信息的科学,成为生物化学、物理化学、环境化学交叉的科学。工业生产的发展和人口的持续增长给环境带来了巨大的压力,生
亲和色谱法简介
一、基本理论（一）原理：在生物体内，许多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等，都具有这种特性。生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力，根据生物分子间亲和吸附和解离的原理，建立
亲和色谱法（affinity－chromatograph）
一、基本理论（一）原理：在生物体内，许多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等，都具有这种特性。生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力，根据生物分子间亲和吸附和解离的原理，建立起来的色
亲和色谱法
一、基本理论（一）原理 在生物体内，许多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等，都具有这种特性。生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力，根据生物分子间亲和吸附和解离的原理，建立起来的
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验3
方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备实验 实验方法原理 细菌裂解液含大量核酸，在进行双向凝胶电泳之前，需先对核酸进行处理。可通过超声波处理包含脲和 CHAPS 的细菌提取液。当脲存在时，核酸酶（Benzonase) 是有活性的，但是其活性依赖于 Mg2+。核酸酶处理后加入 ED
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验10
方案11 银氨染色 实验方法原理 银染聚丙烯酰胺凝胶首先由 Switzer 等引进（1979)，已迅速成为一种最普遍使用的高灵敏度蛋白质染色方法。因存在背景高、重复性不好及银镜等问题，多年来对此方法的改进较多。目前，Rabilloud 等（1994b）在文献中发现 100 多种不同
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验14
方案14 双向凝胶的槽式转移实验 实验材料 包含蛋白质样品的凝胶 试剂、试剂盒 转移缓冲液 仪器、耗材 印迹纸硝化纤维素薄膜或 PVDF 膜电源电泳转移设备 实验步骤 1.测量 SDS-PAGE 凝胶的尺寸，将转移膜剪成与凝胶相适应的尺寸。 槽
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验16
方案16 用丽春红 S 染色膜上的蛋白质 实验材料 转膜的蛋白质 试剂、试剂盒 丽春红乙酸 实验步骤 1.用丽春红 S 染液浸没转移后的膜，轻摇 5 min。 2.弃去染液，用水清洗膜，重复几次，直到蛋白质条带变得清晰。 不要重复使用染料，因为这可能使结
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验17
方案17 用考马斯亮蓝 R250 染色膜上的蛋白质 实验材料 转膜的蛋白质 试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 R250甲醇乙酸 实验步骤 1.将转移后的膜浸在考马斯亮蓝染液中，轻摇 5min 。 2.弃去染液，在摇床上用含乙酸的甲醇进行脱色。不要重复使用染液，因为
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验18
方案18 用印度墨水染色膜上的蛋白质 实验材料 转膜蛋白 试剂、试剂盒 印度墨水PBS吐温-20溶液 实验步骤 1.将膜浸人吐温-20 溶液中，轻摇 10 min。 2.弃去吐温-20 溶液。 3.重复步骤1与2三次。 4.将膜转人印度墨水中，轻摇染色
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验1
方案1 双向凝胶电泳鼠肝蛋白质提取物的制备实验实验方法原理肝与其他动物组织一样，可制备用作双向电泳的材料。离心之后，溶于合适的溶液中即可。不需要浓缩蛋白质或去除干扰物质等额外步骤。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采碱去垢剂ASB-14，它们配合使用可最大量地溶解蛋白质。实验材料鼠肝试剂、试剂
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验15
方案15 双向凝胶的半干印迹实验实验方法原理当 “ 三明治”结构中的滤纸浸透缓冲液时，半干印迹转移设备能将蛋白质从凝胶转移到膜上。和槽式印迹转移设备相比，半干印迹只用较少的缓冲液；因为电极板靠得很近，故转移时只要求较低的电压。实验材料含有蛋白质样品的凝胶试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材印迹纸支持性纤
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验6
方案6 垂直 SDS 平板凝胶的制备：均一凝胶的灌制实验实验方法原理蛋白质通过 IEF 进行分离之后，可进行第二向电泳，即 SDS-PAGE。本方案详细介绍了灌制均一 SDS-PAGE 凝胶的方法。均一凝胶（具完全相同的%T和％c) 对特殊分子量范围的蛋白质有较好的分离效果，因其灌制方法简单而被普遍
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验13
方案13 用 GelCode 磷蛋白染色试剂盒对磷蛋白进行染色实验实验材料含蛋白质样品的凝胶试剂、试剂盒乙酸钼酸铵溶液含硝酸的钼酸铵溶液甲基绿溶液NaOH磺基水杨酸溶液含氯化钙的磺基水杨酸溶液仪器、耗材带有盖子的玻璃或塑料平皿烘箱往复式或定轨式摇床实验步骤1.将凝胶放入盛有 50 ml 水的平皿中，
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验19
方案19 用胶体金染色膜上的蛋白质实验材料转膜蛋白试剂、试剂盒胶体金染液PBS (PH 7. 2)吐温-20溶液实验步骤1.将膜浸入吐温-20 溶液中，37°C，轻摇 45 min。2.室温下，用吐温-20 溶液洗膜，轻摇 5 min。3.弃去洗液，多次重复步骤①和②。4.室温下在胶体金染液中染膜