方案6MALDIMS确定酪氨酸磷酸化位点实验
实验材料在聚丙烯酰胺凝胶中的放射性标记的目标磷酸化蛋白试剂、试剂盒乙腈基质溶液NH4HCO3三氯乙酸KH2P04仪器、耗材超声仪离心干燥器HPLC柱HPLC 系统MALDI 板试管UV 检测器死体积T-分流器实验步骤一、SDS-PAGE 分离的 Gab-I 蛋白的消化1.把通过自显影确定的含有磷酸化蛋白的条带切下来。2.将凝胶切成 1mm2 的条带，把它们放到检测管中。用特定的不含 Na+、K+的试管消化，否则 Na+、K+的化合物会在 MS 中出现。3.用消化缓冲液 A 洗凝胶条，37°C，lOmin。4.用消化缓冲液 B 洗凝胶条，37°C，lOmin。5.重复③、④步两次以上。6.室温下加乙腈使凝胶条带脱水，直到胶条变白（约 3 min)。7.加蛋白酶溶液，37°C，20 min，使凝胶膨胀。酶解温度取决于所用的蛋白酶（例如，Glu-C 需要在 25°C，而胰蛋白酶需要在 37°C)。8.在凝胶块上加消化缓冲液 A 防止其......阅读全文
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——IMAC－分离/富集磷酸肽
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤磷酸肽分析的常见困难是由磷酸化的低化学计量值导致的，样品中相同序列肽段的磷酸肽的含量要比非磷酸化肽段含量少得多，这种情况下即使 32p标记的 2D-PP 上的点，经全蛋白质水解及 HPLC 组分收集，已经确定磷酸肽存在，用质谱技术也难以鉴定磷酸肽。数据依赖的
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——RPHPLC－分离磷酸肽
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤反相 HPLC 分段收集磷酸肽重现性好，简单，且不需要特殊装备。在 RP-HPLC 中，磷酸肽根据其疏水性被分离。分离后收集的组分经 Cerenkov计数检测。对 Cerenkov计数和时间作图，显示具放射性活性的组分的计数。纯化的磷酸肽用 MS 分析；可用不
方案7－位点特异性蛋白质DNA－光交联法实验
实验材料DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性内切酶A 和 B单链 DNA 结合蛋白单链 DNA 模板T4 DNA 连接酶T4 DNA 聚合酶T4 多聚核苷酸激酶T7 DNA 聚合酶上游引物试剂、试剂盒10 X 退火缓冲液ATP对叠氮化苯甲酰甲溴生物素-11-dATP生物素-11-dCTP生物
想检测磷酸化的蛋白，这个磷酸的位点，怎么选择
每个蛋白质磷酸化的位点各异，有的不止有一个磷酸化位点，有的在不同位点磷酸化以后获得的功能也会不同。楼主要选择的，大概是检测时所用的抗体能够识别哪个磷酸化位点的epitope。如果有相关文献表示某个磷酸化位点同楼主所感兴趣的该蛋白功能相关的话，可以据此选择。如果这些信息仍然未知，楼主只好使用较为常见的
想检测磷酸化的蛋白，这个磷酸的位点，怎么选择
每个蛋白质磷酸化的位点各异，有的不止有一个磷酸化位点，有的在不同位点磷酸化以后获得的功能也会不同。楼主要选择的，大概是检测时所用的抗体能够识别哪个磷酸化位点的epitope。如果有相关文献表示某个磷酸化位点同楼主所感兴趣的该蛋白功能相关的话，可以据此选择。如果这些信息仍然未知，楼主只好使用较为常见的
基因插入位点和模式实验
实验材料dCTP 试剂、试剂盒乙醇 次氯酸钠
基因插入位点和模式实验
实验材料dCTP试剂、试剂盒乙醇次氯酸钠β-葡萄糖醛酸酶基因活性测定液溴化乙锭仪器、耗材培养室MS 培养基实验步骤一、转基因插入位点的数目第一代（ T0）转基因植株外源基因的插入位点数目，一般都是通过遗传方法进行鉴定。虽然遗传分析可以在任何世代进行，但是一般选择转基因植株自交，或与野生型测交后得到的
研究确定IgA肾病－30个独立显著的风险位点
IgA肾病（IgAN）是一种常见的原发性肾小球疾病，由IgA免疫球蛋白在肾小球异常沉积而得名。美国哥伦比亚大学研究团队通过全基因组关联分析，揭示IgAN的致病信号通路和潜在药物靶点。该研究成果于近日发表在《Nature Genetics》杂志上，题为：Genome-wide associatio
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——2DPP－分离磷酸肽
实验方法原理即使纳喷 MS/MS 技术已经成功用于直接分析蛋白酶解产生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建议在质谱分析前作一些分离：(1) 磷酸肽在蛋白酶切产物中通常只占少数因此容易淹没在低率度离子产生的总背景中，肽分离技术可浓缩分析物，因此会提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性标记并具有相同比活
张江国家实验室方案初步确定
日前举行的上海科技、知识产权工作情况通报会透露，张江国家实验室的建设方案已初步形成。图片来源网络 此前，市科委等部门酝酿形成了“1+6”方案，即依托张江综合性国家科学中心的多个大科学设施，瞄准6个科技领域。 经过多次探讨，张江国家实验室的建设方案已聚焦为“1+2+1”。第一个“1”指的是大
基本方案2－确定甲基化特异性－PCR－产物中－CpG－位点的甲基化
实验材料甲基化特异性PCR (MSP) 产物试剂、试剂盒适合的限制性内切核酸酶和缓冲液牛血清白蛋白糖苷配糖基1 X 甲酰胺上样缓冲液乙醇实验步骤1.在 1.5 ml 管中加入 10ul MSP 产物。加入 15ul 10 X 限制性内切核酸酶和缓冲液，需要的话加 BSA，加水至 150ul。加入 1
基因插入位点和模式实验（一）
实验材料 dCTP试剂、试剂盒 乙醇次氯酸钠β-葡萄糖醛酸酶基因活性测定液溴化乙锭仪器、耗材 培养室MS 培养基实验步骤 一、转基因插入位点的数目第一代（ T0）转基因植株外源基因的插入位点数目，一般都是通过遗传方法进行鉴定。虽然遗传分析可以在任何世代进行，但是一般选择转基因植株自交，或与野
基因插入位点和模式实验（二）
3. 跨世代 Southern 分析Southern 分析一般用于鉴定各个转基因插入位点的排列形式（见 3 .2 节中“ Southern分析” ）。当然，通过对不同世代转基因植株杂交检测结果的比较，它也可以用于转基因插入位点数的测定。例如，根 据 T。代和自交所得到凡代植株的 Sout
酪氨酸磷酸化相关蛋白western－blot条带
1.首先裂解液中应该有去污剂之类的如SDS、NP-40等2.为了防止蛋白降解，还要加入蛋白酶抑制剂之类的PMSF以及胰蛋白酶抑制剂等3.为了防止磷酸化蛋白的去磷酸化，还要加入磷酸酶抑制剂之类的如氟化钠、钒酸钠之类等
剪接位点
中文名称剪接位点英文名称splicing site;splice site定 义剪接体可识别的RNA前体中内含子和外显子连接边界的序列和接头位点。根据位置不同可以分为供体和接纳体剪接位点。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），基因表达与调控（二级学科）
识别位点
中文名称识别位点英文名称recognition site定 义限制性内切酶特异结合的核苷酸序列。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞遗传（二级学科）
方案4－离线－microIMAC－富集磷酸化蛋白实验
实验材料来自目标磷酸化蛋白的多肽试剂、试剂盒乙酸铵EDTA氯化铁仪器、耗材接口和组合件氮压缩气体IMAC树脂聚酷亚胺涂层熔融石英毛细管压力管聚四氟乙烯管实验步骤一、IMAC 微柱的构建制备二、磷酸化多肽的富集展开
我国专家团队成功筛查出6个肺癌风险基因位点
日前，南京医科大学公共卫生学院院长沈洪兵教授领衔的研究团队，在对8000余名肺癌患者和9000余名健康人的基因组进行分析比较后，成功筛查出6个肺癌风险基因位点，其中4个位点是首次报道的中国人群肺癌易感位点。该研究结果7月初发表在国际顶尖学术期刊《自然・遗传》上。 据介绍，该研究是第
开发出酪氨酸磷酸化监测新方法
近日，中科院大连化学物理研究所研究员卿光焱团队开发了一种无标记、通用、实时、高通量监测酪氨酸磷酸化的新方法。该研究为激酶抑制剂筛选、癌症靶向药物研发提供了新的方法。相关研究成果发表在中国化学会旗舰期刊CCS Chemistry上。 蛋白在各种激酶的催化下发生磷酸化反应，蛋白磷酸化异常与许多疾病
进入位点
中文名称进入位点英文名称entry site定 义特指氨酰tRNA进入核糖体的部位。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
加帽位点
中文名称加帽位点英文名称cap site定 义mRNA中加帽结构的部位，该位点在前体mRNA的5'端。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
方案2分析之前或之后对磷酸化多肽进行碱性磷酸酶处理
实验材料磷酸化多肽样品在溶液中保存试剂、试剂盒乙腈碱性磷酸酶甲酸MALDI 基质三氯乙酸仪器、耗材台式离心机去盐树脂MALDI 靶板质谱仪塑料盒加样吸头注射器实验步骤方法 A: 在 MALDI-MS 分析之前在溶液中去磷酸化的方法1.根据方案 1 中的附加方案，准备两个 nanoscale 去盐柱子
燃烧效率点如何确定
KANE燃烧效率分析仪测量烟气中O，NO，NO，SO，CO 温度压力（同时测4个气体组分）内置高性能电化学传感器，抗交叉干扰能力强手持式，内置电池驱动数据存储，无线打印选配一体式加热除水采样器 燃烧效率分析 在所有燃烧装置，无论是熔铸炉、还是挤压棒炉，目的都是把燃料转换成热能再用于
父子关系的分子分析实验——PCR－分析多态位点实验
实验材料待检个体的全血样本试剂、试剂盒细胞休克溶液核裂解缓冲液SDS蛋白酶 K饱和NaCl溶液乙醇TE 缓冲液微型琼脂糖凝胶标准 DNA 浓度溶液溴化乙锭仪器、耗材Vacutainer 管孵育仪实验步骤尽管基于 Southern 的 RFLP 检测是一种很有效的、近乎艺术级的确定生物学关系的手段，但
实验室6位玻璃蒸馏装置选购指南
智能一体化蒸馏仪需要的玻璃器皿是蒸馏管，操作便捷，易于使用蒸馏而得的氨收集于捕集管内，无需使用任何冷却器或冷却水管。样品溶液在蒸馏管中沸腾后，释放氨，经抽真空后到达捕集管内。捕集管底部装有一个疏水性多孔隔膜，允许氨通过，阻止水汽进入；同时防止蒸馏所得样品逆流入蒸馏管。蒸馏自动停止锁定功能，采用先进的
生物物理所神经细胞凋亡研究获得新发现
6月29日，《神经科学杂志》（The Journal of Neuroscience）发表了中科院生物物理研究所脑与认知国家重点实验室袁增强研究组有关c-Abl-MST1信号通路介导的氧化压力条件下的神经细胞凋亡的最新研究成果。该项工作由博士研究生肖磊等在袁增强研究员的指导下完成
什么是活性位点
者一般用在大分子化学中，活性位点指的是可以发生化学反应的集团。活性位点少，发生有效碰撞的机率就少，也就是说反应比较单一，容易被控制
nut－位点的定义
中文名称nut 位点英文名称nut site定 义噬菌体基因组中抗终止因子N蛋白的识别位点。N蛋白对nut位点的识别和随之发生的相互作用，使RNA聚合酶能忽略终止信号而持续通过终止子。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
方案6－用溴化氰切割－MetX－键实验
实验材料冻干的蛋白质试剂、试剂盒溴化氢甲酸β-巯基乙醇NH4HCO3次氯酸钠溶液仪器、耗材通风厨浓缩器小离心管氮气实验步骤一、还原1.将蛋白质溶解在 0.2mol/L 碳酸氢铵中，终浓度为 10~20mg/mL。2.加人β-巯基乙醇，其浓度在 1%~5% 之间（体积分数）。3.在溶液上方吹扫氮气以置
识别特异性酪氨酸磷酸化多肽抗体的制备
实验步骤基 本 方 案 1 多克隆抗磷酸肽抗体的制备材料B S A -琼 脂 糖 亲 和 基 质（Sigma) 填 装（如辅助方案 2 ) 于柱床体积IOml的层析柱磷酸化酪氨酸亲和基质层析柱（IOml 柱床体积；见辅助方案3)磷酸肽-B S A 偶联物免疫家兔的粗制血清PB S /叠氮钠.•含有0