转印到膜上的蛋白质检测实验_印度墨汁染色
实验材料蛋白质试剂、试剂盒PBSTween印度墨汁仪器、耗材摇床实验步骤1. 将转印膜置于塑料容器中，在旋转摇床中于37℃用Tween 20溶液洗涤3次，每次30 min，然后再于室温用Tween 20溶液洗2次，每次30 min。2. 用印度墨汁溶液染膜3 h或过夜。 3. 在Tween 20溶液中洗膜2次，脱色至在灰色的背景下显现出黑色的蛋白条带，晾干。......阅读全文
Southern转膜方法
Southern转膜方法（毛细管虹吸印迹法、电转移法与真空转移法）将凝胶中的DNA进行碱变性并将pH值恢复至中性后，即可将凝胶中的DNA片段转移到固相支持物上。用于转膜的固相支持物有多种，包括硝酸纤维素滤膜(NCM)、尼龙膜、化学活性膜和滤纸等，Southern转膜时可根据需要选择不同的固相支持物用
电泳、转膜概述
转膜是把DNA 从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物（一般是尼龙膜）上固定，是进行各种后续研究（如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究）的前提。实验目的：掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤实验原理：1．转膜的方式：向上的毛细管转移向下的毛细管转移同时向两张膜
Western转膜步骤
下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。I. 所需材料：•Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）•电泳后的迷你胶
关于新型隐球菌墨汁染色的基本信息介绍
新型隐球菌性脑膜炎（Cryptococcal meningitis，CM）是由新型隐球菌感染脑膜（或脑实质）引起的中枢神经系统感染性疾病，也是中枢神经系统最为常见的真菌感染。多发生于机体免疫力低下、应用免疫抑制剂、应用抗生素导致菌群失调等情况。新型隐球菌性脑膜炎临床表现多样化，和病毒性脑膜炎、结
关于新型隐球菌墨汁染色的注意事项介绍
1、新型隐球菌墨汁染色— 脑脊液离体后在常温放置24小时甚至30小时均可找到，因为新型隐球菌无自溶酶，不会出现自溶和破坏。 2、新型隐球菌墨汁染色— 必须经离心后取沉淀物染色，否则在菌量少时易漏检。 3、新型隐球菌墨汁染色— 脑脊液与墨汁染液二者合适的比例至关重要，应掌握在1: 0.5～0.
蛋白质染色实验——考马斯亮蓝染色
蛋白质染色可用于（1）蛋白质的观测（2）蛋白质含量的测定。实验方法原理1. 凝胶中蛋白质的定位可用考马斯亮蓝染料染色或银染色。前者简便且快捷，而银染法具有相当高的灵敏度，能用于检出更少量的蛋白质。2. 蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法：定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反，假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触，假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪：湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法：定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反，假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触，假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪：湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法：定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反，假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触，假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪：湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
western－blot转膜的原理
电场力作用条件下，带电粒子（PAGE胶中的蛋白）会发生定向迁移；蛋白大小如果超过膜孔径（0.22μm or 0.45μm），不会透过膜；WB用的膜具有蛋白吸附作用；
转膜时甲醇的作用
转膜 将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如 NC 膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白转移，所
什么是western印迹技术
蛋白质经单向电泳后分离后被转移到硝酸纤维滤膜上，然后用放射性或酶标记的特异抗体来检测相应抗原的存在。蛋白质印迹技术是1975年Southern建立了Southern印迹法后，人们用类似的方法对蛋白质进行印迹分析，称为Western印迹法。Western印迹法是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
western转膜放置问题
1. 定义转膜时与胶接触的一面为“正”2. 封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反3. 假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触4. 假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的
小分子转膜时间
小分子的话就不要过夜转,采取100V一小时应该就可以了,注意降温。知识补充蛋白的分子量 是理论的分子量 其实还可能有一些修饰的 比如乙酰化 糖基化等那么要考虑分子量的问题 其次 你买的抗体怎么样？特异性 效价 亲和力等 是否适合做WB？ 再次 你可以用预染的蛋白marker试一试 确定你的目的蛋白没
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤
实验概要本实验介绍了蛋白质印迹与探测(Western Blot)实验原理、方法与步骤。实验原理Western Blot（蛋白质印迹或免疫印迹）技术，以蛋白质为检测对象，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或N
蛋白质的电转
实验概要很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物，如重氮化纤维素膜（DPT，DBM)、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等，但用的最多的还是硝酸纤维素膜(NC膜)，该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合，结合能力约为80μg/cm2。与其它膜相比，NC膜具有不要预先活化，对转移物质生物活性影响不大，能应用多种染
杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别
1. *纤维素膜*纤维素膜是蛋白印迹广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以
膜上胰岛素受体数量的测定实验
胰岛素可高亲和性地与其受体结合（KD~109mol/L)，这一能力使我们能估测出甚至是相当粗制的制备物中的胰岛素受体数。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒结合缓冲液[125I] 胰岛素 (受体级)牛血清白蛋白猪胰岛素实验步骤材料牛血清白蛋白（BSA，1%)猪胰岛素〔17
膜上胰岛素受体数量的测定实验
试剂、试剂盒 结合缓冲液 [125I] 胰岛素 (受体级) 牛血清白蛋白猪胰岛素实验步骤 材料牛血清白蛋白（BSA，1%)猪胰岛素〔17.5/umol/L(0.1 mg/ml) 于 0.001mol/LHC1 中〕（如 Sigma Chemical Co.13505)[125I] 胰岛素 (受体级)
膜上胰岛素受体数量的测定实验
膜上胰岛素受体数量的测定实验 试剂、试剂盒 结合缓冲液 [125I] 胰岛素 (受体级)
蛋白质染色实验——银染法
实验材料蛋白质试剂、试剂盒脱色液戊二醛硝酸银洗印显影液仪器、耗材培养箱摇床实验步骤1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以5倍体积的固定液覆盖，在旋转摇床中缓慢摇动30 min 以上。 2. 倾去固定液，加5倍凝胶体积的脱色液，缓慢摇动60 min 以上。 3. 倾去脱色液，加5倍凝胶体积的10
蛋白质凝胶染色法实验
实验步骤 总蛋白质的检测 1. 总蛋白质色度法染色 简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群，使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度，那么银
蛋白质凝胶染色法实验
实验步骤总蛋白质的检测1. 总蛋白质色度法染色简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群，使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度，那么银染法是可选择的色度方法。如果需要对切下的蛋白质进行质谱分析，则首选不会引入共价蛋白
北京市场黑芝麻浸泡后成“墨汁”－疑被染色
两种黑芝麻浸泡后，水的颜色对比明显。左侧为明光寺农副产品综合批发市场购买的。 海淀区明光寺农副产品综合批发市场一摊点销售的黑芝麻，在水中泡十多分钟后变成“墨汁”，昨天，购买这些黑芝麻的消费者怀疑黑芝麻被染色。市农业局12316热线工作人员建议不要食用。 黑芝麻水洗后发白 昨日，家住海淀区的
RNA的电泳，转膜和杂交
实验原理：基本同 Southern Blotting，但因RNA 是单链分子，必须消除局部区域形成的二级结构，在电场中泳动的距离才能反映它本身的大小，因而需使用变性胶进行电泳；另应特别注意防止RNA 的降解。实验材料：经检测质量好的 RNA实验步骤：1．制胶：Agarose 1%-1.2% ， 1×