转印到膜上的蛋白质检测实验_印度墨汁染色
实验材料蛋白质试剂、试剂盒PBSTween印度墨汁仪器、耗材摇床实验步骤1. 将转印膜置于塑料容器中,在旋转摇床中于37℃用Tween 20溶液洗涤3次,每次30 min,然后再于室温用Tween 20溶液洗2次,每次30 min。2. 用印度墨汁溶液染膜3 h或过夜。 3. 在Tween 20溶液中洗膜2次,脱色至在灰色的背景下显现出黑色的蛋白条带,晾干。......阅读全文
转印到膜上的蛋白质检测实验_印度墨汁染色
实验材料蛋白质试剂、试剂盒PBSTween印度墨汁仪器、耗材摇床实验步骤1. 将转印膜置于塑料容器中,在旋转摇床中于37℃用Tween 20溶液洗涤3次,每次30 min,然后再于室温用Tween 20溶液洗2次,每次30 min。2. 用印度墨汁溶液染膜3 h或过夜。 3. 在Tween 2
转印到膜上的蛋白质检测实验_金染色
实验材料蛋白质试剂、试剂盒金染料溶液仪器、耗材摇床实验步骤1. 如”印度墨汁染色“之第1步操作洗涤转印膜。 2. 在AuroDye胶体金染料溶液中染色3 h,或连续摇动过夜。3. 用水冲冼膜,晾干。
转印到膜上的蛋白质检测实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 PBSTween印度墨汁仪器、耗材 摇床实验步骤 1. 将转印膜置于塑料容器中,在旋转摇床中于37℃用Tween 20溶液洗涤3次,每次30 min,然后再于室温用Tween 20溶液洗2次,每次30 min。2. 用印度墨汁溶液染膜3 h或过夜。 3. 在Twe
PVDF膜上蛋白的可逆染色
实验材料 蛋白试剂、试剂盒 AmidoBlackisopropanolaceticacid考马斯亮蓝methanolPonceau S in TCAEtOHHACNa2S2O3AgO3Na2CO3MeOHAgNO3甲醛仪器、耗材 PVDF膜实验步骤 Western 杂交时,为确认蛋白是否转至 PVD
PVDF膜上蛋白的可逆染色
实验方法原理 丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时也可以与蛋白质的非极性区相结合,从而形成红色的条带。 实验材料 蛋白
PVDF膜上蛋白的可逆染色
PVDF膜上蛋白的可逆染色可以用于:Western杂交时,确认蛋白是否转至PVDF膜上。实验方法原理丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时也可以与蛋白质的非极性区相结合,从而形成红色的条带。实验材料蛋白试剂、试剂盒AmidoBlackisopropanolaceticacid考马斯亮蓝
PVDF膜上蛋白的可逆染色
PVDF膜上蛋白的可逆染色 Western杂交时,为确认蛋白是否转至PVDF膜上,可用下列方法对膜上蛋白进行可逆性染色。1. 氨基黑染色染液:0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropanol (v/v) and 10% acetic acid.染色:将PV
墨汁吞噬实验
实验原理 血液中的中性粒细胞及单核细胞对细菌、异物等具有吞噬作用。在一定量的肝素抗凝血中,加入一定量的墨汁,经37℃温育4小时,涂片染色后,在显微镜下观察吞噬细胞对墨汁的吞噬情况,并计算吞噬率及吞噬指数,从而协助急性白血病的诊断与鉴别。 三、实验方法 材料: 1.肝素抗凝剂配成6U/ml水溶
非标记蛋白质的磷酸化作用分析实验——化学发光法
实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒钒酸钠封阻液TNTNATris·Cl叠氮钠印度墨汁染色液TBS仪器、耗材吸水纸水浴锅实验步骤1. 如基本方案步骤1所述,用SDS-聚丙烯醜胺凝胶电泳分离样品,使用含100 μmol/l 钒酸钠的转移液将蛋白质转印至硝酸纤维素滤膜上。 2. 在塑料容器内,膜与不含叠氮
方案14-电印迹膜上的蛋白质消化实验
实验材料含有电泳分离的目标蛋白质的凝胶试剂、试剂盒乙酸胺黑(Amido Black)10B染料(0.1%)的水溶液 乙酸 甲醇消化缓冲液NaOH丽春红S染料PVP-40仪器、耗材电印记装置小离心管硝酸纤维膜或 PVDF 膜RP-HPLC 层析柱实验步骤一、电印迹和染蛋白1.将蛋白质电印迹到硝酸纤维膜
免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质
实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1. 制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2. 电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3
免疫印迹与免疫检测
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 转移缓冲液仪器、耗材 摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤 1. 制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2. 电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 m
蛋白质的电转实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质的电转实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材 电转移槽电泳仪实验步骤 1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3. 按下列过程安装转移装置,将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中,在塑料支架上放一块海绵。4.
蛋白质的电转实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材电转移槽电泳仪实验步骤1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3. 按下列过程安装转移装置,将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中,在塑料支架上放一块海绵。4. 将3块
蛋白质的电转实验
很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物,如重氮化纤维素膜(DPT,DBM)、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等,但用的最多的还是硝酸纤维素膜(NC膜),该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合,结合能力约为80 μg/cm2。实验方法基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒 转移缓冲液 甲醇 电极缓冲液
转膜实验原理与操作步骤
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定,是进行各种后续研究(如 RFLP 分析,阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。 实验目的: 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理: 1. 转膜的方式: 向上的毛细管
非标记蛋白质的磷酸化作用分析实验
免疫印迹分析 化学发光法 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒
非标记蛋白质的磷酸化作用分析实验——免疫印迹分析
鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时,通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳,可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒钒酸钠封阻液TNTNATris·Cl叠氮钠印度墨汁染色液TBS仪器、耗材吸水纸水浴锅实验步骤1.
电泳、转膜
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定,是进行各种后续研究(如RFLP分析,阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。实验目的:掌握Southern blotting的原理及操作步骤。实验原理:1. 转膜的方式: 向上的毛细管转移 向下的毛细管转移 同时向
蛋白质染色实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 聚丙烯酰胺凝胶固定液染色液脱色液仪器、耗材 滤纸培养箱实验步骤 1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以3~5倍体积的固定液覆盖,在旋转摇床中缓慢揺动2 h。 2. 倾去固定液,以考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶,并缓慢摇动4 h。3. 倾去染色液,用约50 ml 固定液冲
蛋白质染色实验
考马斯亮蓝染色 银染法 非氨盐银染法 快速银染法 实验方法原理 1. 凝胶中蛋白质的定位可用考马斯亮蓝染料染色或银染色。前者简便
简述新型隐球菌墨汁染色的临床意义
1、新型隐球菌墨汁染色的临床意义: 新型隐球菌墨汁染色可用于新型隐球菌性脑炎的诊断,将脑脊液标本进行墨汁染色镜检找到隐球菌是诊断新型隐球菌性脑炎的金标准。另外,新型隐球菌墨汁染色还可用于新型隐球菌性脑炎与病毒性脑膜炎、结核性脑膜炎等其他中枢神经系统感染的鉴别诊断。 2、新型隐球菌墨汁染色的正
PVDF膜上蛋白的可逆染色的几种方法
1. 氨基黑染色 染液:0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropanol (v/v) and 10% Acetic acid. 染色:将PVDF膜置于染液中染色数钟,ddH2O 脱色。 2. 考马氏亮蓝染色 染液:0.1% Coomassie Brilliant Blu
磷酸氨基酸分析实验
鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时,通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳,可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。实验方法酸水解法磷酸化蛋白质 印度墨汁 HCl 磷酸氨基酸混合物 电泳缓冲液 茚三酮 PVDF膜 烘箱 离心机 离心管 纤维素薄
通过四步轻松解决转印带来的麻烦
在之前的一篇文章中,我谈到了弯曲条带,这是一个常见由于凝胶铸造和跑胶所引起的问题。 然而,虽然转印似乎是一个更简单的过程,但也很容易出错。 下面我将介绍几个有用的建议,让您无时无刻地检测到您的蛋白。 没有条带,意味着什么? 不幸的是,第一次你可能会认为你的转印没有起作用,当你在在暗室
四步轻松解决转印带来的麻烦
在之前的一篇文章中,我谈到了弯曲条带,这是一个常见由于凝胶铸造和跑胶所引起的问题。 然而,虽然转印似乎是一个更简单的过程,但也很容易出错。 下面我将介绍几个有用的建议,让您无时无刻地检测到您的蛋白。没有条带,意味着什么?不幸的是,第一次你可能会认为你的转印没有起作用,当你在在暗室里成像时,没有条带(
固相化-pH-梯度双向凝胶电泳实验18
方案18 用印度墨水染色膜上的蛋白质实验材料转膜蛋白试剂、试剂盒印度墨水PBS吐温-20溶液实验步骤1.将膜浸人吐温-20 溶液中,轻摇 10 min。2.弃去吐温-20 溶液。3.重复步骤1与2三次。4.将膜转人印度墨水中,轻摇染色 2~18 h。5.弃去染液,用吐温-20 溶液洗膜,轻摇 5 m
关于新型隐球菌墨汁染色的基本信息介绍
新型隐球菌性脑膜炎(Cryptococcal meningitis,CM)是由新型隐球菌感染脑膜(或脑实质)引起的中枢神经系统感染性疾病,也是中枢神经系统最为常见的真菌感染。多发生于机体免疫力低下、应用免疫抑制剂、应用抗生素导致菌群失调等情况。新型隐球菌性脑膜炎临床表现多样化,和病毒性脑膜炎、结
关于新型隐球菌墨汁染色的注意事项介绍
1、新型隐球菌墨汁染色— 脑脊液离体后在常温放置24小时甚至30小时均可找到,因为新型隐球菌无自溶酶,不会出现自溶和破坏。 2、新型隐球菌墨汁染色— 必须经离心后取沉淀物染色,否则在菌量少时易漏检。 3、新型隐球菌墨汁染色— 脑脊液与墨汁染液二者合适的比例至关重要,应掌握在1: 0.5~0.