蛋白质胰蛋白酶磷酸肽图谱制定实验_从纤维平板上
验材料烧结的聚乙烯片TLC 平板（已分离过磷酸肽并经过放射自显影的）试剂、试剂盒电泳缓冲液仪器、耗材玻璃棒1000 μl（蓝色）移液器吸头单边剃刀刀片实验步骤实验材料、试剂、仪器耗材详见「其他」。1. 用锋利的刀片小心地切去蓝色吸头领圈的部分，细的吸口端也裁去约 3 mm。2. 用玻璃棒将一烧结的聚乙烯片从蓝色吸头的广口端塞入，直到与吸头内部紧密接合。 用直径与聚乙烯片相同的玻璃棒有助于保持圆片的平直，即与吸头的纵轴垂直。不要将圆片塞得 过深，因为这会导致吸头胀大并破损。烧结圆片可以在吸头截面上形成一个屏障以截留从平板上 刮下的纤维素。因此，圆片必须牢固地塞在吸头中以抵抗来自真空管的吸力。3. 测试圆片在吸头中的摆放情况：在吸头的广口端连接一段管子，管子的另一端接在真空管上。使用较强的真空并用手指堵住吸头的细口端，检査确保烧结圆片固定 不动。4. 将 TLC 平板，纤维素面朝上，放在光盒上。将放射自显影胶片直接放在纤维素层上，仔......阅读全文
蛋白质胰蛋白酶磷酸肽图谱制定实验_从纤维平板上
验材料烧结的聚乙烯片TLC 平板（已分离过磷酸肽并经过放射自显影的）试剂、试剂盒电泳缓冲液仪器、耗材玻璃棒1000 μl（蓝色）移液器吸头单边剃刀刀片实验步骤实验材料、试剂、仪器耗材详见「其他」。1. 用锋利的刀片小心地切去蓝色吸头领圈的部分，细的吸口端也裁去约 3 mm。2. 用玻璃棒将一烧结的聚
蛋白质胰蛋白酶磷酸肽图谱制定实验
基本方案 备择方案 固相蛋白消化 辅助方案 从纤维平板上 实验方法原理实验材料 含 32P 标记的蛋白质的样品 试剂、试剂盒
蛋白质胰蛋白酶磷酸肽图谱制定实验
实验方法原理 实验材料 含 32P 标记的蛋白质的样品试剂、试剂盒 荧光墨水／染料碳酸氢铵2-巯基乙醇SDS载体蛋白（溶于去离子水中）三氯乙酸（TCA）乙醇过氧化氢甲酸TPCK-处理的胰蛋白酶（溶于去离子水／ HCl ）电泳缓冲液绿色标记染料层析缓冲液仪器、耗材 单边剃刀刀片／手术刀片闪烁计数器1
蛋白质胰蛋白酶磷酸肽图谱制定实验1
实验材料含 32P 标记的蛋白质的样品试剂、试剂盒荧光墨水／染料碳酸氢铵2-巯基乙醇SDS载体蛋白（溶于去离子水中）三氯乙酸（TCA）乙醇过氧化氢甲酸TPCK-处理的胰蛋白酶（溶于去离子水／ HCl ）电泳缓冲液绿色标记染料层析缓冲液仪器、耗材单边剃刀刀片／手术刀片闪烁计数器1.7 ml 微量离心管
蛋白质胰蛋白酶磷酸肽图谱制定实验——固相蛋白消化
试剂、试剂盒甲醇PVP-360（溶于乙酸）50 mmol L 碳酸氢铵pH 8.0仪器、耗材PVDF 膜／硝酸纤维素膜保鲜膜／聚酯薄膜实验步骤1. 用 SDS-PAGE 凝胶电泳分离 32P 标记的样品，用标准的湿式或半干式蛋白质转移方法将蛋白质转移到 PVDF 或硝酸纤维素膜上。2. 将膜晾干并用
蛋白质印迹实验——从SDS凝胶上转移蛋白质
蛋白质印迹（protein blotting ) 也称为电泳转移（electropheretic transfer)，即把从电泳或层析分离的蛋白转移到固定基质上的过程。固定基质通常是一些纸或膜。最通常的蛋白质印迹是将从聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离的蛋白质分子转移到硝化纤维素膜上。本实验来源「蛋白质电泳实
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
2D-PP 分离磷酸肽 RP-HPLC 分离磷酸肽 高分辨凝胶电泳分离磷酸肽 IMAC 分离／富集磷酸肽 实验方法原理
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——2DPP－分离磷酸肽
实验方法原理即使纳喷 MS/MS 技术已经成功用于直接分析蛋白酶解产生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建议在质谱分析前作一些分离：(1) 磷酸肽在蛋白酶切产物中通常只占少数因此容易淹没在低率度离子产生的总背景中，肽分离技术可浓缩分析物，因此会提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性标记并具有相同比活
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理 即使纳喷 MS/MS 技术已经成功用于直接分析蛋白酶解产生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建议在质谱分析前作一些分离：(1) 磷酸肽在蛋白酶切产物中通常只占少数因此容易淹没在低率度离子产生的总背景中，肽分离技术可浓缩分析物，因此会提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性标记并具有相同比
蛋白质印迹实验——从琼脂糖凝胶上转移蛋白质
试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤1. 溶液配置不连续缓冲系统阳极缓冲液Ⅰ：0.3 mol/L Tris，pH 10.4。阳极缓冲液Ⅱ：25 mmol/L Tris，pH 10.4。阴极缓冲液：40 mmol/L 6-氨基-n-己酸，pH 7.6。2. 转移单元的组成SDS 凝胶转移单元的
蛋白质印迹实验——从等电聚焦凝胶上转移蛋白
试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤1. 溶液配置不连续缓冲系统阳极缓冲液Ⅰ：0.3 mol/L Tris，pH 10.4。阳极缓冲液Ⅱ：0.1 mol/L Tris，pH 10.4。阴极缓冲液：0.1 mol/L 精氨酸，0.01% ( W/V）SDS，pH 10.5。SDS 的存在有利于
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串联质谱对磷酸
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶 试剂、试剂盒二硫苏糖醇 碘代乙酰
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
实验方法原理 实验材料 融合后的候选杂交瘤细胞系BSA 交联的同种磷酸肽BSA 交联的同种非磷酸肽BSA 交联的非同种磷酸酪氨酸肽BSA 交联的同源磷酸肽试剂、试剂盒 筛选稀释液阴性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫前血清）阳性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫后血清）仪器、耗材 HT 培养基96
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 融合后的候选杂交瘤细胞系 BSA 交联
二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验
实验方法原理 实验材料 洗脱的磷酸肽试剂、试剂盒 消化酶消化缓冲液2-巯基乙醇合适 pH 的电泳缓冲仪器、耗材 适合于酶消化的温度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 维素）实验步骤 1. 在微量离心管中用 50 μl 合适的缓冲液溶解洗脱下的磷酸肽，短暂离心在管底收集所有的溶液。
二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 洗脱的磷酸肽
固体培养基上细菌培养实验_平板划线法
实验方法原理通过平板划线法分离单菌落试剂、试剂盒培养液仪器、耗材平板接种环牙签实验步骤1. 用接种环或无菌牙签将接种菌体从琼脂平板的一侧开始划线。2. 重新消毒接种环或用新的无菌牙签，从第一划线处将样品划线至平板的其余部分，重复划线至少一次。3. 于37 °C培养直至长出单菌落。如果要从很多的
固体培养基上细菌培养实验_铺平板法
实验方法原理通过铺平板分离单个菌落实验材料培养物仪器、耗材平板涂布棒培养箱实验步骤1. 吸取0.05~1 ml培养物至一只干的平板上。2. 用涂布棒作圆周运动将培养液涂布均匀，或用涂布棒的边缘在平板的表面画光栅图案（一系列平行线），然后转动平板并与已涂布的平行线成直角重复涂布。3. 于37 °
光导纤维技术从理论上可实现时空穿梭
一件所谓的“时空斗篷”，通过“删除”时间通道就能掩盖或篡改历史真实事件？ 这听起来像科幻小说的情节，但据英国《每日邮报》和《每日电讯报》11月17日报道，英国伦敦大学帝国理工学院科学家提出，利用传统的光导纤维技术打造一件“时空斗篷”，就能颠覆人类的认知，实现时空穿梭之梦，从而在理论上让“编
二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验
实验材料洗脱的磷酸肽试剂、试剂盒消化酶消化缓冲液2-巯基乙醇合适 pH 的电泳缓冲仪器、耗材适合于酶消化的温度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 维素）实验步骤1. 在微量离心管中用 50 μl 合适的缓冲液溶解洗脱下的磷酸肽，短暂离心在管底收集所有的溶液。取 1 μl 肽溶液滴
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
实验材料融合后的候选杂交瘤细胞系BSA 交联的同种磷酸肽BSA 交联的同种非磷酸肽BSA 交联的非同种磷酸酪氨酸肽BSA 交联的同源磷酸肽试剂、试剂盒筛选稀释液阴性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫前血清）阳性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫后血清）仪器、耗材HT 培养基96 孔聚苯乙烯组织培养板
血琼脂平板上溶血分类
（1）α溶血：菌落周围血培养基变为绿色环状；红细胞外形完整无缺。（2）β溶血：红细胞的溶解在菌落周围形成一个完全清晰透明的环。（3）γ溶血：菌落周围的培养基没有变化；红细胞没有溶解或无缺损。（4）双环：在菌落周围完全溶解的晕圈外有一个部分溶血的第二圆圈。
在ASMS上推出净化磷酸肽的离心柱
一种可替代C18树脂的更有效的净化磷酸肽的离心柱 在ASMS 2010上被推出 赛默飞世尔科技在ASMS 2010上推出了一种可代替C18树脂，更有效地净化磷酸肽的离心柱。 ROCKFORD, Ill（2010年5月24日）——服务科学全球领先的赛默飞世尔科技，今天推出了T
琼脂平板上的细菌数怎么定量
检测水中细菌总数可以用平板计数琼脂培养基的。一般来说，营养琼脂（NA）、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）和平板计数琼脂（PCA）都是用作嗜温性细菌的培养基，3者成分大同小异，通常情况下可以互相替代。当然如果是按照标准来做检测的话，尽量还是用与检测标准上相同的培养基。PCA配方：胰酪蛋白胨 5.0g 酵母浸
盘基网柄菌的培养方法实验——细菌平板上的培养
实验材料盘基网柄菌稀释物试剂、试剂盒肉汤Sorensen's 磷酸缓冲液实验步骤1. 用任何营养丰富肉汤制备大肠杆菌 B/r 或产气克雷伯杆菌的过夜培养物。2. 用营养肉汤或 1X Sorensen's 磷酸缓冲液对盘基网柄菌进行一系列稀释，使其细胞密度为 500 个细胞/ml，以便
血平板制备实验
实验方法原理肉汤琼脂中加羊血或兔血均可。用血量为5-7%。在血平板上除了可以观察菌落的形态外，还可判断溶血情况，菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血。菌落周围成绿色为α-溶血。溶血情况可以显微镜下用低倍镜观察。实验步骤成分：牛肉浸出液： 1000 ml蛋白胨：
巧克力平板制备实验
实验方法原理主要是蛋白胨和牛肉粉用来提供细菌生长所需的碳源、氮源、氨基酸以及维生素。氯化钠维持培养基中的渗透压，琼脂用做凝固剂。脱纤维羊血提供氯化血红素和辅酶I，为嗜血杆菌属的生长提供特殊营养。巧克力平板培养基还能够培养其他细菌，主要的原因是血液中有V、X因子，这两种因子是位于红细胞中的，一般细菌不
巧克力平板制备实验
实验方法原理 巧克力平板应用羊血或免血制备。因其中含有Ⅹ和Ⅴ因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好，凡疑有这些菌种存在的标本，均须接种巧克力平板。血液标本培养，增苗后有细苗生长，若移种巧克力平板上，有利于分离到更多的细菌。实验步骤 成分：牛肉浸出液： 1000 ml蛋白胨：