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基本方案 实验方法原理 实验材料 融合后的候选杂交瘤细胞系 BSA 交联的同种磷酸肽 BSA 交联的同种非磷酸肽 BSA 交联的非同种磷酸酪氨酸肽 BSA 交联的同源磷酸肽 试剂、试剂盒 筛选稀释液 阴性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫前血清） 阳性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫后血清） 仪器......阅读全文
（四）染色原理及步骤 1．基本原理 酶标抗体与荧光色素标记抗体的染色相同，亦分直接法和间接法。直接法是将酶直接标记在每一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。间接法所用的第一抗体是对组织细胞内某种抗原的特异性抗体（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而绝大数单克隆
（一）一般光学显微镜术应用一般光学显微镜（简称光镜）观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块，先用固定剂（fixative）固定（fixation），使组织中的蛋白质迅速凝固，防止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等，一般常将几种固定剂配制成混
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被
实验概要体细胞移植胚胎制备完成后，若用制滴菌素A(TSA)处理一下，其胚胎制备效率会显著增加。本次试验中以小鼠早期SCNT胚胎为研究对象，检测了TSA在体细胞核重编程方面的影响；检测方面包括：染色体重排、组蛋白修饰、DNA复制和转录活性恢复。实验步骤1. 卵母细胞收集B6D2F1雌鼠注射5 IU马绒
单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。单克隆抗体制备过程有以下几个步骤，下面讲简要介绍。1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠
（8）荧光显示： ①生物素标记DNA探针的荧光显示。 1）应用PBS含5%无脂干奶（5μl每张盖片），也可用1%牛血清白蛋白（BSA）-PBS覆盖孵育5min室温，以封闭非特异性结合部位。 2）移除多余液体，加抗生素-FITC（5μg/ml在PBS含5%奶粉或1%BSA，5μl/cm2）。在湿
ELISA原理 ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性，对标本进行检测；由于结合与固体承载物（一般为塑胶孔盘）上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计 其结合 机制後，配合酵素显色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同，ELI
一、 实验准备1． 标本制备：2． zui小化非特异性结合： 二、凋亡1．凋亡的检测方法：网站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、细胞因子1．激活的细胞因子2．CBA 四、血小板
在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制
免疫印迹western实验中内参基因的选择和注意事项 Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。 虽然，顺利的时候Western blot做
Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然，顺利的时候Western blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、
Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然，顺利的时候Western blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现
要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――
1、食品安全问题主要有害污染物:（1）农药,化肥:有机磷,有机氯，硝酸盐（2）兽药：兴奋剂，镇静剂，抗生素（3）重金属离子：镉，铅，汞，铬，砷，钼（4）生物毒素：黄曲霉毒素，呕吐毒素，肉毒素（5）致病菌：大肠杆菌，沙门氏菌，葡萄球菌。 2、快速检测：包括样品制备在内，能够在短时间内出据检测
酶联免疫检测技术的应用 真菌毒素的检测：黄曲霉毒素 B 1 、 M 1 以及 T-2 毒素，脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素 DON ），二乙酰草镰刀菌烯醇（ DAS ），玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素 A （ OA ）。 农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类，例如杀暝松（ FN ）、甲
快速检测技术广泛用于食品安全快速检测，临床检验、检验检疫、毒品检验等公共领域。食品安全快速检测是指对食品利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式。 1、食品安全问题主要有害污染物 （1）农药,化肥:有机磷,有机氯，硝酸盐
实验步骤基 本 方 案 1 多克隆抗磷酸肽抗体的制备材料B S A -琼 脂 糖 亲 和 基 质（Sigma) 填 装（如辅助方案 2 ) 于柱床体积IOml的层析柱磷酸化酪氨酸亲和基质层析柱（IOml 柱床体积；见辅助方案3)磷酸肽-B S A 偶联物免疫家兔的粗制血清PB S /叠氮钠.•含有0
相关专题western blot实验western blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然，顺利的时候western blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦
3.1.3 包被用抗原 用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中
随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力，已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量的酶(
免疫酶细胞化学免疫酶细胞化学是免疫细胞化学（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手段，检测某种物质（抗原/抗体）在组织细胞内存在部位的一门新技术：即预先将抗体与酶连结，再使其与组织内特异抗原反应，经细胞化学染色
随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力，已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法，
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
不标记抗体法通过系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。用于（1）抗体观察（2）免疫学研究。实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。
用于流式细胞仪检测的常用荧光素有FITC、TRITC、Cy3、Cy5，PE和PI，在以上各种荧光染料中，PE荧光最强，适用于弱表达抗原；FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广。 1．直接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液(浓度约l×l06个/m1)，直接加