抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
实验方法原理 实验材料 融合后的候选杂交瘤细胞系BSA 交联的同种磷酸肽BSA 交联的同种非磷酸肽BSA 交联的非同种磷酸酪氨酸肽BSA 交联的同源磷酸肽试剂、试剂盒 筛选稀释液阴性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫前血清）阳性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫后血清）仪器、耗材 HT 培养基96 孔聚苯乙烯组织培养板网格标记的纸片实验步骤 1. 将融合后的杂交瘤细胞以低密度（最好是每三个孔有一个细胞）接种到多个 96 孔聚苯乙烯组织培养板中，培养于 HT 培养基中。约 2 周后用 96 格-网格纸片记录克隆数以检查并鉴定出所有的单克隆杂交瘤细胞培养孔。在含有一个克隆的孔下做上标记以便于鉴别。2. 采用无菌技术从每个潜在的候选孔中吸取部分上清（如从 200 μl 培养液中吸取 100 μl 转移到另一 96 孔聚苯乙烯板（「筛选平板」）中。记录初始培养板的编号和孔的位置以及相应的筛选平板的平板编号和孔的位置（如在代表筛选......阅读全文
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
实验方法原理 实验材料 融合后的候选杂交瘤细胞系BSA 交联的同种磷酸肽BSA 交联的同种非磷酸肽BSA 交联的非同种磷酸酪氨酸肽BSA 交联的同源磷酸肽试剂、试剂盒 筛选稀释液阴性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫前血清）阳性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫后血清）仪器、耗材 HT 培养基96
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 融合后的候选杂交瘤细胞系 BSA 交联
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
实验材料融合后的候选杂交瘤细胞系BSA 交联的同种磷酸肽BSA 交联的同种非磷酸肽BSA 交联的非同种磷酸酪氨酸肽BSA 交联的同源磷酸肽试剂、试剂盒筛选稀释液阴性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫前血清）阳性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫后血清）仪器、耗材HT 培养基96 孔聚苯乙烯组织培养板
抗磷酸肽的多克隆抗体制备实验
实验材料用磷酸肽-BSA 交联物免疫过的兔的粗制血清试剂、试剂盒PBS／叠氮化物MgCl2仪器、耗材分光光度计透析袋填装有 BSA-琼脂糖亲和介质的柱子填装有磷酸酪氨酸亲和介质的柱子填装有同种非磷酸肽亲和介质的柱子填装有同源的磷酸肽亲和介质的柱子填装有阳性-筛选的磷酸肽亲和介质的柱子实验步骤1. 将
抗磷酸肽的多克隆抗体制备实验
实验方法原理 实验材料 用磷酸肽-BSA 交联物免疫过的兔的粗制血清试剂、试剂盒 PBS／叠氮化物MgCl2仪器、耗材 分光光度计透析袋填装有 BSA-琼脂糖亲和介质的柱子填装有磷酸酪氨酸亲和介质的柱子填装有同种非磷酸肽亲和介质的柱子填装有同源的磷酸肽亲和介质的柱子填装有阳性-筛选的磷酸肽亲和介质的
抗海藻糖酶单克隆抗体的制备
通过腹腔注射加佐剂的重组蛋白或合成的多肽来免疫8周龄的雌性小鼠BALB/c，第一次免疫问隔两周后，每周连续注射3-4次。最后一次注射后3-4天杀死小鼠，用改良的Kohler和Milstein方法将脾细胞与B细胞瘤株P3-X63-Ag8融合。细胞融合产生8种杂交瘤克隆株：KM2275、KM2276、K
单克隆抗体的制备实验
单克隆抗体的制备实验可以用于：（1）将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交， 获得既能产生抗体， 又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体；（2）该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo
单克隆抗体上清制备实验——大量制备
实验材料目的杂交瘤试剂、试剂盒完全 DMEM-10 培养液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）仪器、耗材250 ml 无菌锥形离心管转瓶培养装置850 cm2 旋转培养瓶175 cm2 组织培养瓶实验步骤1. 重复基本方案 1 步骤 1，并按 1:10 分传到终体积为 1
单克隆抗体上清的制备实验
实验材料 杂交瘤试剂、试剂盒 完全培养基仪器、耗材 培养箱转子离心机实验步骤 1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm2组织培养瓶中，置37 ℃CO2培养箱中，直至生长旺盛适于分传。2. 按1：10的比例将细胞分传到一个新的175 cm2的培养瓶中，加入完全DMEM-10
单克隆抗体的腹水制备实验
实验材料 杂交瘤细胞试剂、试剂盒 完全DMEM-10HEPES丙酮酸钠PBS仪器、耗材 注射针头离心管转子离心机实验步骤 1. 用20G或22G的注射针，小鼠腹膜内注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接种细胞。 2. 在175 cm2培养瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸钠培
单克隆抗体的腹水制备实验
实验材料杂交瘤细胞试剂、试剂盒完全DMEM-10HEPES丙酮酸钠PBS仪器、耗材注射针头离心管转子离心机实验步骤1. 用20G或22G的注射针，小鼠腹膜内注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接种细胞。 2. 在175 cm2培养瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸钠培养液，进
单克隆抗体上清制备实验
实验方法原理 实验材料 目的杂交瘤试剂、试剂盒 完全 DMEM-10 培养液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）仪器、耗材 50 ml 无菌锥形离心管175 cm2 组织培养瓶实验步骤 1. 将杂交瘤置于一个盛有完全 DMEM-10 培养基的 175 cm2 组织培养瓶中
单克隆抗体上清制备实验
与多克隆抗血清相比，采用单克隆抗体（MAb）的最主要的优势就是有可能得到大量的特异性单克隆抗体可供应用。MAb 制剂通常包括杂交瘤上清、由接种了杂交瘤的小鼠制备的腹水，以及纯化的 MAb。杂交瘤上清容易制备，特别是用于制备大量不同的 MAb , 但其中 MAb 的浓度则相对较低。为得到纯化的制剂，可
单克隆抗体腹水制备实验
实验方法原理 高滴度的单克隆抗体的制备可以通过在小鼠的腹腔内接种能产生 MAb 的杂交瘤细胞，从而产生腹水来获得。腹水可收集几次，经热灭活、滴定后储存。实验材料 裸鼠（6～8 周龄 无特定病原体／注射了鼠鼠杂交瘤细胞的同系宿主）目的杂交瘤试剂、试剂盒 完全DMEM-10培养液（含10mmol／L H
单克隆抗体上清的制备实验1
实验材料杂交瘤试剂、试剂盒完全培养基仪器、耗材培养箱转子离心机实验步骤1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm2组织培养瓶中，置37 ℃CO2培养箱中，直至生长旺盛适于分传。2. 按1：10的比例将细胞分传到一个新的175 cm2的培养瓶中，加入完全DMEM-10培养液到
单克隆抗体上清的制备实验2
实验材料抗体试剂、试剂盒PBS仪器、耗材离心机离心管实验步骤1. 同备择方案1中大规模制备MAb上清的步骤1~4，但等细胞长到合适的密度时就应收获细胞，或者是在细胞生长的平台期收获。 2. 将细胞倒入无菌的250 ml 锥形离心管中，于4℃ 250 g 离心15 min，弃上清。 3. 置细胞
抗肽抗体的制备实验
提高免疫原性肽的抗血清，是最简单的方法，获得非隔离的蛋白质的抗体，例如，对来自DNA序列信息的推定蛋白质序列。 这种方法也是有用的，当隔离的抗原是困难或费时，或当抗原是一个大的蛋白家族的成员。实验步骤： 将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠
单克隆抗体上清的制备实验——单抗上清大量制备
实验材料抗体试剂、试剂盒DMEM-10乙醇仪器、耗材离心机培养瓶转子实验步骤1. 重复基本方案1步骤1，按1：10分传到终体积100 ml 的完全DMEM-10/HEPES中。 2. 准备传代细胞时，应将175 cm2培养瓶中的内容物（100 ml）转移到—个850 cm2旋转培养瓶中，另加15
抗肽抗体的制备实验1
实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中，置于一个2 ml 的玻璃试管，加50 μl MBS/DMF溶液，于室温下温和搅拌30 min。 2. 加
抗肽抗体的制备实验2
实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 将10 mg 的血蓝蛋白溶于2 ml pH10的硼酸缓冲液中，置于15 ml 的玻璃试管中，温和振摇。2. 加10 μmol 的合成肽。3. 缓慢加入1 ml 的0.3%戊二醛溶液，于室温
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握），然后对理想的杂交瘤细胞加
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛
单克隆抗体的制备
实验方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握），然后对理想的杂交瘤细胞加以扩增、冷冻和
单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处死小
单克隆抗体的制备（一）
材料1. 免疫原一旦作出制备单克隆抗体的决定后，首先要考虑的问题是使用何种免疫原(第2章）。免疫原(或抗原）可以有多种：全细胞、细胞提取物、纯化蛋白、融合蛋白、多肽、糖 类 、脂类或 D N A 等 。此外，制备单克隆抗体时不需要很纯或单一特异性的抗原，因为在单克隆抗体筛选的过程时，每个克隆
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大，它不仅被广泛应用于生化和免疫检测，而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。 动物免疫 取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原（20 μg/只），第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化，0.2 mL/只
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备步骤
过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞
单克隆抗体的制备原理
单克隆抗体技术原理如下：由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交