蛋白酶的测定实验——偶氮酪蛋白测定法
实验方法原理酪蛋白的敏感性鉴定可以通过这个实验得到很大程度的改善。含氮的基团与酪蛋白的共价键被蛋白水解时切断,用 TCA 上清液测定它们的颜色变化。实验材料蛋白酶溶液试剂、试剂盒磷酸钾偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白)三氯乙酸仪器、耗材分光光度计实验步骤0.5 ml 偶氮酪蛋白溶液0.2 ml 蛋白酶溶液25℃ 时培养 30 min 后,加 0.2 ml 10% 三氯乙酸停止反应,离心 5 min。于 340 nm 处测上清液的吸收值,1U 是指 1 h 内,能使吸收值变化 1 的酶量。注意事项其他试剂:0.1 mol/L 磷酸钾,pH 8.00.2% 偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白)溶于 0.1 mol/L 磷酸钾溶液,pH 8.010% 三氯乙酸(TCA,质量浓度)展......阅读全文
馏程测定法
馏程系指一种液体照下述方法蒸馏,校正到标准压力[101.3kPa(760mmHg)]下,自开始馏出第5滴算起,至供试品仅剩3~4ml或一定比例的容积馏出时的温度范围。某些液体药品具有一定的馏程,测定馏程可以区别或检查药品的纯杂程度。用国产19标准磨口蒸馏装置一套。A为蒸馏瓶;B为冷凝管,馏程在130
熔点测定法
依照待测物质的性质不同,测定法分为下列3种。各品种项下未注明时,均系指第一法。折叠第一法测定易粉碎的固体药品取供试品适量,研成细粉,除另有规定外,应按照各药品项下干燥失重的条件进行干燥。若该药品为不检查干燥失重、熔点范围低限在135℃以上、受热不分解的供试品,可采用105℃干燥;熔点在135℃以下或
余氯测定法
沉淀滴定法(氯离子的测定)1、所用试剂氯化钠标准溶液:(1毫升=1毫克Cl¯):取基准试剂或优级纯氯化3—4克至于瓷坩埚中,于高温炉升温至500℃灼烧10分钟,然后在干燥器内内冷却至室温;准确称取1.649克氯化钠,现用少量蒸馏水溶解,再用蒸馏水稀释至1000毫升。硝酸银标准溶液(1毫升=1毫克Cl
测定尿胰蛋白酶有哪些意义?
(1)胰蛋白酶原的分子量比较小(25kd),很容易由肾小球滤出,但是肾小管对胰蛋白酶原-2的回吸收低于胰蛋白酶原-1,尿中前者的浓度较大。(2)在急性胰腺炎时尿中胰蛋白酶原-2的浓度明显升高。有报道急性胰腺炎时尿胰蛋白酶原-2的特异性为95%,敏感性为94%,说明其优于淀粉酶,是一个比较敏感而特异的
氰化高铁血红蛋白测定法操作
一、器具和试剂 采血工具,分光光度计,HiCN转化液。二、步骤 准备:打开分光光度计预热(预热时间由仪器类型决定),取5ml HiCN转化液与试管中;采血:一般为采用皮肤采血法,采血20μl后立即溶于含有转化液的试管中,充分震荡混匀,静置5分钟;测定:使用分光光度计测定混合液的吸光度A;计算:根据公
蛋白质含量测定法双缩脲法
本法系依据蛋白质分子中含有的两个以上肽键在碱性溶液中与Cu2+形成紫红色络合物,在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比,以蛋白质对照品溶液作标准曲线,采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。 本法快速、灵敏度低,测定范围通常可达1~10mg。本法干扰测定的物质主要有硫酸铵、三羟甲基氨基甲烷缓冲液
什么是蛋白酶?及蛋白酶的用途
蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称。按其降解多肽的方式分成内肽酶和端肽酶两类。前者可把大分子量的多肽链从中间切断,形成分子量较小的朊和胨;后者又可分为羧肽酶和氨肽酶,它们分别从多肽的游离羧基末端或游离氨基末端逐一将肽链水解生成氨基酸。
尿胰蛋白酶的测定的临床意义
(1)胰蛋白酶原的分子量比较小(25kd),很容易由肾小球滤出,但是肾小管对胰蛋白酶原-2的回吸收低于胰蛋白酶原-1,尿中前者的浓度较大。 (2)在急性胰腺炎时尿中胰蛋白酶原-2的浓度明显升高。 有报道急性胰腺炎时尿胰蛋白酶原-2的特异性为95%,敏感性为94%,说明其优于淀粉酶,是一个比较
胰蛋白酶的制备及活力的测定(1)
实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中,在Ca2+的存在下,被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开,失去一段六肽,分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶原的分子量约为24000,其等电点约为pH8.9,胰蛋白酶的分子量与其酶原接
胰蛋白酶的制备及活力的测定(2)
三、仪器食品加工机和高速分散器;研钵;大玻璃漏斗;布氏漏斗;抽滤瓶;纱布;恒温水浴;紫外分光光度计;秒表;pH试纸。操作方法一、猪胰蛋白酶制备(一)猪胰蛋白酶原的提取猪胰脏1.0Kg(新鲜的或杀后立即冷藏的),除去脂肪和结缔组织后,绞碎。加入2倍体积预冷的乙酸酸化水(pH2.5)于10~15℃搅拌提
胰蛋白酶的制备及活力的测定2
(9)0.8 mol/L pH9.0硼酸缓冲液:取20ml 0.8 mol/L硼酸溶液,加80ml 0.2 mol/L四硼酸钠溶液,混合后,用pH计检查校正。(10)0.4 mol/L pH9.0硼酸缓冲液(用0.8 mol/L稀释1倍即可);(11)0.2 mol/L pH8.0硼酸缓冲液:取70
胰蛋白酶的制备及活力的测定1
目的要求1.学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。2.了解酶的活性与比活性的概念。实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中,在Ca2+的存在下,被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开,失去一段六肽,分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。胰
中性蛋白酶测试盒实验原理
中性蛋白酶测试盒实验原理 测定意义:NP在一定的温度和中性pH条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点,中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。 测定原理:中性条件下,NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特
细胞周期测定实验——流式细胞仪测定法
实验方法原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
纺织品-禁用偶氮染料的测定
范围本标准规定了纺织产品中可分解出禁用芳香胺(见附录A)的偶氮染料的检测方法。2 规范性引用文件下列文件中的条款可通过GB/T 18414的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注明日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究
纺织品-禁用偶氮染料的测定
纺织品 禁用偶氮染料的测定1 范围本标准规定了纺织产品中可分解出禁用芳香胺(见附录A)的偶氮染料的检测方法。2 规范性引用文件下列文件中的条款可通过GB/T 18414的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注明日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,
关于酪蛋白多肽的生产工艺介绍
牛乳通常指母牛正常分娩后分泌挤得的乳汁,因营养齐全,蛋白质丰富而受到欢迎。然而牛乳蛋白理化特性又不同于人乳蛋白,服用后遇酸易凝固,不易被婴幼儿消化吸收,此外部分牛乳蛋白对人体有过敏不良后果。已有生产工艺,通过将牛乳蛋白彻底酶解为多肽和氨基酸以解决这一问题。但是近来科学发现牛乳中的乳球蛋白、乳白蛋
酪蛋白胶粒的亚胶粒模型基本介绍
酪蛋白结构的亚胶粒模型于1967年由Morr提出,这一模型的主要观点是: ①酪蛋白胶粒是由许多亚胶粒(sub-micelle)构成的,胶体磷酸钙(colloidal calcium phosphate,CCP)对亚胶粒和胶粒的形成起关键作用; ②构成酪蛋白胶粒的亚胶粒有两类,一类为不含κ-c
关于酪蛋白多肽的基本信息介绍
酪蛋白多肽是一种新型的短肽,拥有发明专利技术,从牛乳酪蛋白中提炼酶解出来的小分子蛋白多肽,可以针对人体免疫细胞(如淋巴细胞专一抗体、T细胞、B细胞等)完成激活、修复、再生、提升活性的全过程,激发自身免疫系统的主动性,从根本上恢复和加固自身免疫系统。
关于β酪蛋白的主要功能介绍
β-酪蛋白是人乳中的主要蛋白质,是一种磷酸化蛋白。蛋白质的磷酸化区域可与钙离子结合,并且磷酸化程度越高结合钙离子能力越强。据推测,人乳β-酪蛋白的磷酸化位点以及数量与酪蛋白和钙离子结合数量等相关,也影响其他二价离子如锌的吸收。在消化过程中,磷酸化的β-酪蛋白被降解成多种具有生物活性的肽段,并能够
关于αs1酪蛋白的定义介绍
αs1-酪蛋白是牛乳蛋白中的主要成分,它是一种高度磷酸化蛋白,多数情况下每个 αs1-酪蛋白上有 8 个磷酸基团存在,还有少数的含有 9 个磷酸基团。它的氨基酸序列已经确定或者通过其他哺乳纲动物的 DNA 序列推断出。 所有的 αs1-酪蛋白都有复杂的磷酸化作用位点,其中第 100-110 位
关于酪蛋白胶粒的基本信息介绍
在牛乳中,95%的酪蛋白以胶粒(caseinmicelle)形式存在,其直径约为40~300nm。酪蛋白胶束是几种含磷蛋白质交联形成的复合体,酪蛋白含有4种蛋白组分:αs1-酪蛋白(αs1-casein)、αs2-酪蛋白(αs2-casein)、β-酪蛋白(β-casein)、κ-酪蛋白(κ-c
牛乳中制备酪蛋白的原理和方法
酪蛋白定义:牛奶中的主要蛋白质,由α、β、γ和κ酪蛋白组成,其氨基酸组成和电泳行为有所不同。营养价值较高,经酸化或凝乳酶处理后沉淀。α和β酪蛋白有较多的丝氨酸被磷酸化,形成钙结合位点。原理牛乳和羊乳中含丰富的蛋白质,其中主要是酪蛋白。酪蛋白在羊乳罩中约占总蛋白量3/4,牛乳中约占总蛋白量的5/6。酪
胃蛋白酶测定的临床意义是什么
胃蛋白酶分泌减少见于胃癌、萎缩性胃炎、慢性胃炎。胃扩张、慢性十二指肠炎、恶性贫血以及甲状腺功能减退等。 结果偏低可能疾病: 慢性胃炎
注射用胰蛋白酶的含量测定方法
照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定。供试品溶液取本品5支,分别加适量0.001mol/L盐酸溶液溶解,并全量转移至同一100ml量瓶中,用上述盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,精密量取适量,用上述盐酸溶液定量稀释制成每1ml中约含50~60单位的溶液。底物溶液与测定法见胰蛋白酶效价测定项下。
甲氧基测定法的测定方法
取干燥的供试品(相当于甲氧基10mg),精密称定,置烧瓶中,加熔融的苯酚2.5ml与氢碘酸5ml,连接上述装置;另在两个接受容器内,分别加入10%醋酸钾的冰醋酸溶液6ml与4ml,再各加溴0.2ml;通过支管将CO2或N2气流缓慢而均衡地(每秒钟1~2个气泡为宜)通入烧瓶,缓缓加热使温度控制在恰
旋光度测定法的测定方法
旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面:1、仪器旋光计:《中国药典》规定,应使用读数至0.01。并经过检定的旋光计。旋光计的检定:可用标准石英旋光管进行校正,读数误差应符合规定。2、测定方法将测定管用供试液体或固体物质的溶液(取固体供试品,按各药品项下的方法制成)冲洗数次,缓缓注入供试液或溶液适
关于氰化高铁血红蛋白测定法的简介
氰化高铁血红蛋白(hemiglobincyanide, HiCN)测定法是WHO和ICSH推荐的人血红蛋白(hemoglobin, Hb)测定参考方法,由于HiCN试剂含有剧毒氰化钾,各国均相继研发出不含氰化钾的血红蛋白测定法,有的测定法已用于血液分析仪,但其标准应溯源到HiCN量值。
氰化高铁血红蛋白测定法操作的步骤
器具和试剂: 采血工具,分光光度计,HiCN转化液。步骤: 准备:打开分光光度计预热(预热时间由仪器类型决定),取5mlHiCN转化液与试管中;采血:一般为采用皮肤采血法,采血20μl后立即溶于含有转化液的试管中,充分震荡混匀,静置5分钟;测定:使用分光光度计测定混合液的吸光度A;计算:根据公式计算
浊度测定法的定义
比浊法又称浊度测定法。为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法,这是一种光散射测量技术。