细胞凋亡检测实验——DNAladder法
实验方法原理发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。 实验材料凋亡细胞试剂、试剂盒蛋白酶K醋酸钾白细胞裂解液Tris-HClNaClEDTASDS乙醇琼脂糖仪器、耗材离心管离心机水浴锅电泳仪电泳槽实验步骤一、材料与试剂准备 1. 材料：凋亡细胞。 2. 蛋白酶K（500 μg/ml）， 醋酸钾氯仿（8 mol/L），无水乙醇，70%乙醇，2%琼脂糖凝胶。 3. 白细胞裂解液：pH8.0，10 mmol/L Tris-HCl，10 mmol/L NaCl，10 mmol/L EDTA，1% SDS。 二、操作步骤 1. 收集凋亡细胞：取1～2×106 个细胞，......阅读全文
双脱氧法DNA测序实验
测序酶进行标记测序反应 α-标记核苷酸进行热循环测序反应 实验材料 DNA
DNA印迹法实验凝胶处理
1)凝胶照相后切去包括标记带在内的多余部分。将凝胶的一角(·点第一个样品的一侧)切去作为标记 以便于定位。精确测量凝胶大小然后将凝胶放入一个方形瓷盘中 。 2)变性：将凝胶浸泡于适量的碱变性液中，室温下变性30分钟。期间更换变性液一次，不断地轻轻摇动。如果先进行酸变性酸变性，则凝胶中溴酚兰的颜
双脱氧法DNA测序实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器、耗材 离心机离心管微量滴定板实验步骤 1. 对于每个单链模板：将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中（1）0.5 pmol 单链DNA模板（2）0.5 pmol 引物（3）1 μl 10×测序酶缓冲液（4
DNA印迹法的实验步骤
注意注意，操作戴手套。凝胶处理1)凝胶照相后切去包括标记带在内的多余部分。将凝胶的一角(·点第一个样品的一侧)切去作为标记 以便于定位。精确测量凝胶大小然后将凝胶放入一个方形瓷盘中 。2)变性：将凝胶浸泡于适量的碱变性液中，室温下变性30分钟。期间更换变性液一次，不断地轻轻摇动。如果先进行酸变性酸变
植物DNA提取实验——机械法
植物DNA提取实验用于：（1）获得较纯的真核细胞基因组DNA；（2）后续PCR分析，RFLP分析，基因文库的构建，基因探测等的研究。实验方法原理这是一种快速简便提取植物总DNA的方法。先将新鲜的叶片在液氮中研磨，以机械力破碎细胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液，使细胞膜破裂。同时将核酸与植物
细胞凋亡的形态：生化性质实验
使用活体荧光染料的显微镜定量凋亡指数和细胞活力（台盼蓝染色） 吖啶橙染色 吖啶橙或溴化乙锭染色 实验方法原理
细胞凋亡的形态：生化性质实验
实验方法原理 实验材料 细胞试剂、试剂盒 染料混合物：0.01%台盼蓝l00μg ml吖啶橙或 100μg ml吖啶橙+100 μg ml溴化乙锭所有试剂都在PBS中制备约5×105〜5×106细胞 ml的细胞悬浮液在完全的RMPI 1640培养基仪器、耗材 12 mm×75 mm的玻璃试管显微镜载
细胞凋亡实验步骤及注意事项
一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征 2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的
流式细胞仪检测细胞凋亡实验——Heochst－33342/PI双染色法
实验方法原理流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”，因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞。活细胞染料如Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜而对细胞没有太大得细胞毒作用。Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度要比正常细胞中要高，Hoechst 33342在凋亡细
流式细胞仪检测细胞凋亡实验Heochst－33342/PI双染色法
实验方法原理流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”，因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞。活细胞染料如Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜而对细胞没有太大得细胞毒作用。Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度要比正常细胞中要高，Hoechst 33342在凋亡细
流式细胞仪检测细胞凋亡实验Annexin－V/PI双染色法
实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。A
流式细胞仪检测细胞凋亡实验——Annexin－V/PI双染色法
流式细胞仪检测细胞凋亡可应用于：（1）鉴定细胞凋亡形态；（2）准确的进行凋亡细胞的计数；（3）进行特异的定性分析和定量分析。实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种
流式细胞仪在细胞凋亡检测应用
细胞凋亡的检测方法众多，流式细胞仪 检测凋亡，是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此，具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。下面是一幅凋亡过程图。在凋亡诱导剂的作用下，首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体，线粒体
六种染色后光镜观察法检测肝癌细胞凋亡
作者：杨连君，司晓辉，王文亮，王文勇，赵一岭，方正清［摘 要］ 目的：探讨简便易行的在光镜下通过形态学观察检测细胞凋亡的方法，并对其进行比较。方法：首先用6%的乙醇作用6 h诱导人肝细胞癌细胞系HCC9204细胞凋亡，然后进行未固定细胞的台盼蓝染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色，细胞固定后
用荧光激活的细胞分类仪检测凋亡细胞
1）原位缺口翻译检测裂解的DNA片段：1、取106经促调亡物质处理的细胞，用1％ BSA-PBS洗涤细胞后加入0.1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体，4℃ 20分钟。用1％ BSA-PBS洗涤细胞。置冰上。2、加入0.1ml 1％多聚甲醛，置冰上5分钟，加入60％（v/v）甲醇溶液，
流式细胞仪检测细胞凋亡的原理
一、原理在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结
流式细胞仪检测细胞凋亡的原理
一、原理在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结
检测凋亡和其他形式的细胞死亡
实验步骤 基本方案1 用活细胞或荧光染料定量细胞活性 显微镜观察是一种简单且准确的检测凋亡的方法。凋亡的标志性特征包括细胞核浓 缩 、细胞膜完整但出现发泡现象，以及清晰的胞质。 材 料 （带7 项 目 见 附 录 1) V 染料混合剂 P B S 的 细 胞 悬 液 （附 录 1
简述细胞凋亡的形态学检测
光学显微镜和倒置显微镜 1、未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。 贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 2、染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割 成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。
细胞凋亡的早期检测方法有哪些？
1、PS（磷脂酰丝氨酸）在胞外膜分布的检测PS从胞膜内侧转移到外侧现象是在细胞凋亡的早期即可发生标志。AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，能专一性的结合暴露在胞膜外侧的PS，使用荧光素标记的AnnexinV 蛋白（如Annexin V-FITC）即可检测细胞凋亡。由于这是一种凋亡早
关于细胞凋亡的其他检测方法介绍
1、ssDNA 单抗法 把抗单链DNA(ssDNA) 单克隆抗体用于细胞凋亡的检测,是一种偶然发现,因为在应用ssDNA 单抗(荧光法) 检测细胞毒性药物诱导DNA 损伤中,观察到凋亡的白血病细胞(MOL T24) 有较强的荧光,后来经过适当的改进,证明ssDNA 单抗可以特异地识别凋亡细胞。
细胞凋亡的免疫检测技术2
（二）荧光标记法1．材料与试剂 采用德国Boehringer- Mannheim公司In Situ Cell Death Detection 试剂盒，或美国Oncor公司ApopTagTM试剂盒，包括：⑴ 生物素标记的-Dutp(Biotin-dUTP)或地高辛标记的-dUTP(Digoxingen
三种流式方法检测细胞凋亡
一、检测原理细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。流式细胞仪检测有下列特点1、检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确2、可用许多相关
光散射法检测细胞凋亡的介绍
在FCM 系统中，被检细胞在液流中通过仪器测量区时,经激光照射,细胞向空间360°立体角的所有方向散射光线,其中前向散射光( FSC) 的强度与细胞大小有关,而侧向散射光(SSC) 的强度与质膜和细胞内部的折射率有关。细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,核碎裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞FS
罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序
（In situ cell death detection kit-POD法）一、 原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dU
细胞凋亡的免疫检测技术1
一、概述 细胞凋亡（apoptosis,Apo）是细胞增殖的反面，探讨的是细胞死亡的方式与机制。凋亡一词来源于希腊语。原指花瓣、叶片的脱落。自1972年Kerr首次提出细胞凋亡的概念以来，随着细胞生物学、免疫学和肿瘤学的研究发展，最近几年人们对细胞凋亡的重大理论意义和实际意义有了更深的理解。细胞
免疫组化的细胞凋亡检测
细胞凋亡原理：正常凋亡细胞通过检测凋亡细胞DNA片段进行染色，正常的、人为造成凋亡的细胞很少能够被染色。以甲基绿复染，便于从形态学上分辨评估正常细胞和凋亡细胞。 首先确定目标凋亡细胞的组织部位（如眼球组织，由于玻璃体结构内没有细胞核，因此看不到凋亡，在整个组织的最外面有单层视网膜细胞，因此只能
细胞凋亡形态学检测与观察
hoechst33258染色，他们认为细胞发生凋亡时，染色质会固缩。 所以Hoechst染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。正常细胞核刺激后有致密浓染的凋亡细胞 AO-EB染色法：The image below shows human lymphoma cells treated wi
细胞凋亡检测：形态学特征的检测方法
根据调亡形态学特征的检测方法 一、普通光学显微镜观察方法 1 ）苏木素－伊红染色（ HE 染色法） 石蜡组织切片的 HE 染色1． 取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋， 4 μ m 切片。2． 切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（ I ） 5min →二甲苯（Ⅱ） 5min → 100％
细胞凋亡检测：形态学特征的检测方法
根据调亡形态学特征的检测方法一、普通光学显微镜观察方法1）苏木素－伊红染色（HE染色法）石蜡组织切片的HE染色1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％