双脱氧法DNA测序实验
测序酶进行标记测序反应 α-标记核苷酸进行热循环测序反应 实验材料 DNA 试剂、试剂盒 寡核苷酸引物 测序酶终止混合液 测序酶缓冲液 焦磷酸酶混合液 仪器、耗材 离心机 离心管 微量滴定板 实验步骤 1. 对于......阅读全文
双脱氧法DNA测序实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器、耗材 离心机离心管微量滴定板实验步骤 1. 对于每个单链模板：将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中（1）0.5 pmol 单链DNA模板（2）0.5 pmol 引物（3）1 μl 10×测序酶缓冲液（4
双脱氧法DNA测序实验
测序酶进行标记测序反应 α-标记核苷酸进行热循环测序反应 实验材料 DNA
化学发光双脱氧DNA测序实验
标准的双脱氧DNA测序可以很容易和很有效地使用非同位索标记的化学发光法进行检测。在测序反应中，使用生物素标记的引物。用非同位素标记如生物素衍生化的引物，可用于为5’-末端标记引物而设的入测序反应的工作方案。实验材料DNA试剂、试剂盒生物素Tris·ClMgCl2DNA聚合酶dATPdCTPdGTPd
化学发光双脱氧DNA测序实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 生物素Tris·ClMgCl2DNA聚合酶dATPdCTPdGTPdTTP仪器、耗材 热循环仪尼龙膜滤纸离心机实验步骤 1. 在微量离心管中混匀下列试剂，配制DNA摸板混合物（1）1 μg 单链DNA模板或1~3 μg 变性双链DNA模板（2）0.5 pmol 生物素
化学发光双脱氧DNA测序实验
利用生物素标记引物 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
DNA测序——双脱氧链末端终止法
实验方法原理DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3'-OH末端上进行的。由于2’，3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3'-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3'-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。 本实验根据此原理，将待测DNA片段插入单链噬菌体M13载体，
双脱氧法DNA测序实验——测序酶进行标记测序反应
在基本的双晩氧测序反应中，寡核苷酸引物退火于单链DNA摸板，在4种脱氧核糖核酸三磷酸存在时，引物为DNA聚合酶所延伸。反应混合物中也含有4种双脱氧核糖核苷三磷酸的其中一种，当它掺入到DNA的生长链时，可终止链的延伸。实验材料DNA试剂、试剂盒寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器
制备DNA测序模板实验——双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性
实验材料DNA试剂、试剂盒NaOHEDTA乙酸钠乙醇仪器、耗材离心管离心机摇床实验步骤1. 加入约0.5 pmol 重组质粒DNA于0.5 ml 微量离心管中，如果体积大于20 μl 应以乙醇沉淀，重溶于20 μl 水。2. 如果体积小于20 μl，用水补足20 μl。3. 加入2 μl 2
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 ddNTP dNTP 甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀释缓冲液
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水ddNTPdNTP甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶Taq 酶稀释缓冲液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 标记的寡核苷酸引物仪器、耗材 微量离心管（0.5 ml) 或
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
热稳定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反应中应用外，还可用来替代测序酶或 Klenow 片段进行双脱氧链终止法测序。它在高温下（70°C) 进行等温链终止反应的能力可减少测序反应中由于模板 DNA 上引物假结合位点与引物退火错配产生的问题，它还可用于富含二级结构模板的测序。本实验源于分子克隆实验指南
双脱氧法DNA测序实验——α标记核苷酸进行热循环测序反应
实验材料DNA试剂、试剂盒DNA测序缓冲液dATPDNA聚合酶仪器、耗材热心换反应装置离心机实验步骤1. 对应于毎个待测模板，分别以A、G、C、T 标记好4个微量离心管。2. 分别往标好A、G、C、T 的管子中，加A、G、C、T 测序混合液各3 μl。 3. 对于单链模板：在0.5 ml 微量
DNA(脱氧核糖核酸)测序
DNA测序是确定特定DNA片段的核苷酸顺序的过程。到目前为止，大多数的DNA测序都是使用弗雷德里克·桑格开发的链终止方法进行的。这种技术利用修饰的核苷酸底物通过序列特异性终止DNA的合成反应。然而，新的测序技术，如焦磷酸测序正在获得越来越多的测序市场份额。焦磷酸测序比桑格DNA测序产生了更多的基
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 二硫苏糖醇 dNTP 和 ddNTP 标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液 甲酰胺上样缓冲液 测序酶稀释缓冲
双脱氧链终止法测定DNA序列
[目的] 掌握双脱氧链终止法测定DNA序列的原理与方法[原理]DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3’-OH末端上进行的。由于2’，3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3’-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。本实验根据此原理，将待测DNA片段插
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
本方案参照了 Tabor 和 Richardson(1987a,1989b,1990) 的方法，采用单链 DNA 模板进行 DNA 测序（有关单链 M13 噬菌体和质粒 DNA 制备，请参见第 3 章的方案 4、8 和第 12 章的方案 1)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水二硫苏糖醇dNTP 和 ddNTP标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液甲酰胺上样缓冲液测序酶稀释缓冲液测序酶反应缓冲液含MgCl2测序酶酵母无机焦磷酸酶寡核苷酸引物模板 DNA放射性化合物仪器、耗材 离心机和转头微量离心管或微量滴定板实验步骤 材料缓充液和溶液去离子蒸
用大肠杆菌－DNA－聚合酶－I－Klenow－片段进行双脱氧测序实验
当 Sanger 及其同事建立第一个 DNA 链终止延伸法时，只有一种合适的 DNA 聚合酶可用，即大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在时聚合 dNTP 的活性，但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，
循环测序：利用－PCR－和引物末端标记进行双脱氧测序实验
试剂、试剂盒 ddNTP 延伸 终止混合物酶及其缓冲液AmpliTaq CS 或其他无外切酶活性的 DNA 聚合酶循环测序缓冲液热稳定的 DNA 聚合酶核酸和寡核苷酸模板 DNA仪器、耗材 小离心管 或者微孔板热循环仪实验步骤 材料溶液和缓冲液贮存液、缓冲液和试剂的配方请参照附录 1。将贮存液稀释到
循环测序：利用－PCR－和引物末端标记进行双脱氧测序实验
本方法成功的关键是模板 DNA 的纯度。琼脂糖、盐和蛋白质的污染都会导致 DNA 聚合酶的提前终止或暂停，而 DNA 和 RNA 降解所产生的寡核苷酸将造成引物错配。这些污染会严重导致假阳性条带或空白出现。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试
双脱氧ATP末端标记双链DNA的3突出端
实验材料 限制性内切核酸酶 小牛胸腺末端转移酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 乙酸铵
双脱氧链终止法测序用变性模板的制备实验
试剂、试剂盒 乙酸铵氯仿异戊醇DMSO乙醇NaOH酚测序反应缓冲液琼脂糖凝胶寡核苷酸引物闭环双链质粒 DNA仪器、耗材 干冰-乙醇浴65°C 水浴实验步骤 材料缓冲液和溶液试剂、缓冲液、储液的组成参见附录 1, 储液使用前稀释到适当浓度。乙酸铵（5mol/L, 非缓冲，pH~7.4)氯仿：异戊醇（2
双脱氧链终止法测序用变性模板的制备实验
试剂、试剂盒 乙酸铵 氯仿 异戊醇 DMSO 乙醇 NaOH酚 测序反应缓冲液 琼脂糖凝胶
双脱氧链终止法测序用变性模板的制备实验
双脱氧链终止法变性模板 分子克隆实验指南（第三版）下册 第12章 方案2下面通过碱变性质粒 DNA 的方法应与方案 3 联合使用，因在此过程中采用测序酶催化双脱氧测序反应。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒乙酸铵氯仿异戊醇DMSO
如何看脱氧核糖核酸（DNA）测序报告单
脱氧核糖核酸,就是DNA.核酸分脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）脱氧核糖,是五碳糖的一种,脱氧核糖是脱氧核苷酸的组成成分.脱氧核苷酸是由一分子脱氧核糖,一分子含氮碱基,一分子磷酸组成.脱氧核苷酸是脱氧核糖核酸的基本单位,脱氧核糖核酸就是由许多个脱氧核苷酸缩合而成.脱氧核糖核酸（DNA），就
大肠杆菌－DNA－－I－Klenow－片段及单链－DNA－模板进行双脱氧实验
试剂、试剂盒 dATP 去离子蒸馏水 EDTA 延伸 终止混合液 和示踪混合液 甲酰胺上样缓冲液 Tris-Cl
DNA测序
自动测序法 双脱氧链末端终止法 非同位素银染 鸟枪法 Maxam-Gilbert化学修饰法 实验方法
DNA测序
实验方法原理 ABI PRISM 310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司ZL的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DN
DNA测序
DNA测序（主要内容如下）· Sequencing Gel Preparation· Preparation of Templates · DNA Sequencing by the Dideoxy Method· DNA Sequen
DNA序列测定技术（Sanger双脱氧链终止法与Maxam－Gilbert－...
选择随机定向测定策略的影响因素（1）计算设备 任何大规模的测序计划将在很大程度上依赖计算机程序对原始序列资料进行分类、整理和排列（Staden，1986）。在权衡随机法的利与弊之时，必须将与适当的计算机设备进行联机的问题放到压倒一切的位置上来考虑。如果这些设备尚无从适当的计算机设备进行联机的问题