从培养的哺乳动物细胞中分离高尔基体
实验材料细胞试剂、试剂盒粗匀浆液仪器、耗材塑料离心管实验步骤1. 向 6 ml 的粗匀浆液中（细胞收获后以大约 5X105 /ml 悬于 0.25 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 中），加入 6 ml 含有 10 mmol/L pH 7.4 Tris-HCl 的冰浴的 2.3 mol/L 蔗糖，将蔗糖浓度调整到 1.4 mol/L。2. 加入 100 mmol/L 的 Na2EDTA 母液并混合使终浓度为 1 mmol/L。3. 将混合物加入到一只干净的 SW27 塑料离心管中（例如 polyallomer)，然后用 14 ml 的 1.2 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 覆盖，再加入 9 ml 的 0.8 mol/L 蔗糖-10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.4)。4. 将梯度溶液在 SW27 转头中以 25......阅读全文
从培养的哺乳动物细胞中分离高尔基体
实验材料细胞试剂、试剂盒粗匀浆液仪器、耗材塑料离心管实验步骤1. 向 6 ml 的粗匀浆液中（细胞收获后以大约 5X105 /ml 悬于 0.25 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 中），加入 6 ml 含有 10 mmol/L pH 7.4 Tris-HC
从96孔微培养板生长的哺乳动物细胞中分离
实验方法原理 本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992，1993 改进而成，是一种从微培养板的每个孔生长的真核细胞抽提基因组 DNA 的简便有效的方法。每个孔产生的基因组 DNA 足以做数次聚合酶链反应（PCR) 或者一次
从哺乳动物细胞或组织分离DNA
1. 根据样品类型，从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤 2 次，用刮棒把细胞刮入约 0.5 ml 的 TBS 中，将细胞悬液转移到冰浴的离心管中，用 1 mlTBS 冲洗培养皿，并入离心管中的细胞悬液。于 4℃ 以
从96孔微培养板生长的哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理 本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992，1993 改进而成，是一种从微培养板的每个孔生长的真核细胞抽提基因组 DNA 的简便有效的方法。每个孔产生的基因组 DNA 足以做数次聚合酶链反应（PCR) 或者一次 Southern 杂交。对于制备用于 PCR 反
从96孔微培养板生长的哺乳动物细胞中分离DNA
本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992，1993 改进而成，是一种从微培养板的每个孔生长的真核细胞抽提基因组 DNA 的简便有效的方法。每个孔产生的基因组 DNA 足以做数次聚合酶链反应（PCR) 或者一次 Southern 杂交。对于制备用于 PCR 反应的基因组 DNA 的最佳
用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改进而成，可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩
用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改进而成，可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩上。缠在钩上的 DNA 从乙醇溶液中转出溶于所选择
用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理本方法由 Bowtell 法（1987) 改进而成，可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩上。缠在钩上的 DNA 从乙醇溶液中转出溶于所选择的液体缓冲液。
纯化DNA实验_从哺乳动物细胞或组织分离DNA
基因纯化，可以用于（1）对大量提取的质粒DNA进行纯化；（2）常用的方法有柱层析法和氯化铯梯度离心法。实验材料细胞试剂、试剂盒TBS抽提缓冲液仪器、耗材离心管实验步骤1. 根据样品类型，从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境 1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规
从植物组织中分离高尔基体
实验材料新鲜组织试剂、试剂盒匀浆介质仪器、耗材研钵和杵离心机实验步骤1. 先用剪刀大致剪切叶片或茎杆，然后在少量的介质中用刀片切成碎片。2. 对于 1 g 新鲜组织，在 1 ml 介质中用研钵和杵捣碎使组织匀浆化。匀浆介质：50 mmol/L FiEPES10 mmol/L KCI1 mmol/L
哺乳动物细胞总RNA的分离
实验概要本实验介绍了从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序，该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解细胞的方法（在SDS存在的条件下用蛋白酶K消化)去消化组织速度很慢，导致内源性RNA酶在被蛋
哺乳动物细胞总RNA的分离
哺乳动物细胞总ＲＮＡ的分离细胞的裂解提取步骤注意事项 这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解
哺乳动物细胞培养过程－－培养条件
哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各个过程进行简述：原代培养：从动物机体取出组织后切碎，经过各种酶（常用胰蛋白酶），螯合剂（常用EDTA）结合机械方法（吸液管反复吸吹）处理，分散成单细胞，置于
哺乳动物细胞培养过程－－培养条件
哺乳动物细胞培养过程 & 培养条件导语：哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各
哺乳动物细胞总RNA快速分离
试剂、试剂盒 尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 EDTASDS 乙酸钠水平衡的苯酚 乙醇 Tris-Cl NaCL实验步骤 一 材料与设备1)尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 (PBS) 2)10 mmol/L EDTA (pH8.0 ) 3)0.5% SDS 4)0. l mol/L 乙酸钠（p
哺乳动物细胞总RNA快速分离
试剂、试剂盒 尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 EDTA SDS 乙酸钠 水平衡的苯酚 乙醇 Tris-Cl NaCL
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
实验方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质-DNA 复合物并使蛋白变性和释放，但他并不明显影
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
实验方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质-DNA 复合物并使蛋白变性和释放，但他并不明显影响蛋白酶 K 的活性。本实
哺乳动物细胞的细胞培养
实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒
哺乳动物细胞胞质RNA的分离
试剂、试剂盒 冰冷的磷酸盐缓冲液 NaClKCl Na2HP04•7H20 KH2PO4 冰冷的裂解缓冲液： LTris-HCl NaCl MgCL2 NkmidetP-40 胎盘 RNase 抑制剂 SDS 蛋白酶 K 酚 氯 仿 异戊醇 乙酸钠 (DEPC 处理） 无水乙醇 乙醇 乙酸钠
哺乳动物细胞胞质RNA的分离
试剂、试剂盒 冰冷的磷酸盐缓冲液 NaCl KCl Na2HP04•7H20 KH2PO4 冰冷的裂解缓冲液： LTris-HCl
2.1.2－哺乳动物细胞总RNA快速分离
利用 SDS 裂解细胞 ，并用酸性苯酚分级提取细胞总 RNA, 这是一种适合于处理 mRNA 含量相对较低、内源性 RNase 活性较髙的细胞的方法，该方法 RNA 损失极少，简便易行 ，可同时处理多个样品。对大多数细胞株来说，在一个直径 90mm 培养皿中培养细胞 ，其 RNA 收率为 100〜2
哺乳动物细胞的细胞培养温度
维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定而适宜的温度；不同种类的细胞对培养温度要求也不同。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时，即能
2.1.3－哺乳动物细胞胞质RNA的分离
下述方法是纯化组织培养细胞胞质 RNA 的 简便并行之冇效的方法 ，此方法出现在 RNA 分离的较早阶段，主要步骤即离心去除细胞核试剂、试剂盒冰冷的磷酸盐缓冲液NaClKClNa2HP04•7H20KH2PO4冰冷的裂解缓冲液： LTris-HClNaClMgCL2NkmidetP-40胎盘RNas
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
实验方法原理 实验材料 转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材 贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Doun
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
核提取物的制备核提取物制备优化细胞质（S-100)组分的制备实验方法原理实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞） 试剂、试剂盒PBS