胰蛋白酶切磷酸化多肽作图实验—样品制备

实验材料蛋白质试剂、试剂盒甲醇电泳缓冲液仪器、耗材凝胶电泳实验步骤1. 用单向或者双向凝胶电泳将 32P 标记的目的蛋白质与其他不需要的成分分开。2. 电泳结束后,用 50% 甲醇清洗三次,时间控制在 6 小时,去处 SDS 和电泳缓冲液将凝胶放在两张塞热玢膜(Bio-Rad) 之间吸干。用放射性墨水在凝胶边缘点几个记号。3. 置于 X 射线片下曝光,在读片灯下看放射自显影图,找到放射标记的目的蛋白带用干净刀片小心地切下目的胶带,放入带螺帽的离心管用 0.5~1 ml 50 mol/L 碳酸氢铵泡。剥下赛璐玢膜,将胶带修剪成更小的小条。4. 加一等份胰蛋白酶(1 μg 溶于 50 mmol/L 碳酸氢铵,TPCK 处理过),于 37℃ 在 360° 旋转器中消化和洗脱几小时或者过夜。5. 10000 g 离心样品 5 分钟。小心取出上清,用一小等份做液闪计数估计回收效率。6. 用真空离心浓缩器(Savant) 抽干上清......阅读全文

DNA作图实验——多种酶消化

主要用于显示基因以及其他序列待征在基因组上位置的图。实验方法原理应用遗传学技术构建能显示基因以及其他序列待征在基因组上位置的图。实验材料DNA试剂、试剂盒限制酶缓冲液仪器、耗材电泳仪实验步骤1.  用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。 2.  从每个反应取小份样品作电泳分析,用已知的分

生物分析中蛋白质、多肽及寡聚核苷酸样品制备

LC-MS是蛋白质表征的强有力工具。反向HPLC/UPLC液相分离和质谱联用技术是最常用的分离模式,这种分离模式也是蛋白质除盐的有效方法。生物制品及蛋白质溶液经常储存在一定盐离子浓度的缓冲溶液中,如PBS(磷酸盐缓冲溶液)。这些盐溶液,能和蛋白质形成加和离子,使数据解析更加复杂,同时,这些盐类也抑制

胰蛋白酶及其系列酶制备

酶是细胞产生的以蛋白质为主要成分的生物催化剂,与化学催化剂相比较,具有作用条件温和、反应专一性强、反应副产物少等优点,因而广泛应用于医药、化工、食品、日化、农业、饲料、环保等领域,应用种类及用量均逐年递增。例如蛋白酶,应用于医药工业中,作为生化药物促进食物蛋白质消化;应用在食品工业中,水解蛋白质成肤

胰蛋白酶的制备要求

本品应从检疫合格的猪、羊或牛胰中提取所用动物的种属应明确,生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。本品为动物来源,工艺中应进行病毒的安全性控制。

用蛋白质组学方法绘制磷酸化位点图谱

方案1 用带有 Fe(Ⅲ) 和 Ga(Ⅲ)的 IMAC 纯化磷酸化多肽 方案2 在 MALDI 分析之前或之后对磷酸化多肽进行碱性磷酸酶处理 方案3 结合固定化金属离子亲和介质和 MALDI-TOF-MS 直接分析方法对磷酸化多肽进行特征分析实验 方

样品制备技术

俄歇电子能谱仪对分析样品有特定的要求,在通常情况下只能分析固体导电样品。经过特殊处理,绝缘体固体也可以进行分析。粉体样品原则上不能进行俄歇电子能谱分析,但经特殊制样处理也可以进行分析。由于涉及到样品在真空中的传递和放置,所以待分析样品一般都需要经过一定的预处理。

TEM样品制备

样品制备由于透射电子显微镜收集透射过样品的电子束的信息,因而样品必须要足够薄,使电子束透过。l 试样分类:复型样品,超显微颗粒样品,材料薄膜样品等。l 制样设备:真空镀膜仪,超声清洗仪,切片机,磨片机,电解双喷仪,离子薄化仪,超薄切片机等。 ▽ 超细颗粒制备方法示意图来源:公开资料 ▽ 材料薄膜制备

TEM样品制备

样品制备由于透射电子显微镜收集透射过样品的电子束的信息,因而样品必须要足够薄,使电子束透过。l 试样分类:复型样品,超显微颗粒样品,材料薄膜样品等。l 制样设备:真空镀膜仪,超声清洗仪,切片机,磨片机,电解双喷仪,离子薄化仪,超薄切片机等。▽超细颗粒制备方法示意图来源:公开资料▽材料薄膜制备过程示意

样品的制备

6 分析步骤6.1样品的制备测定前,应保证实验室样品至少在室温(20℃~25℃)下保持48h,以便使影响不溶度指数的因素,在各个样品中趋于一致。然后反复振荡和反转样品容器,混合实验室样品。如果容器太满,则将全部样品移入清洁、干燥、密闭、不透明的大容器中,如上所述彻底混合。对于速溶乳粉,应小心地混合,

样品制备方式

(1)无机材料溶剂清洗或长时间抽真空,以除去试样表面的污染物。如对陶瓷或金属样,用乙醇或丙酮擦洗,然后用蒸馏水洗掉溶剂,吹干或烘干。用氩离子刻蚀法除去表面污染物。擦磨、刮剥和研磨。表层与内表面的成分相同的固体样品,用SiC纸擦磨或用刀片刮剥;粉末样品采用研磨的办法使之裸露出新的表面层。真空加热法。对

GPC样品制备

 样品制备  对于比较样品的好坏或者控制产品质量来说,GPC分析结果的重复性非常重要。那么从样品制备方面如何保证结果的重复性呢?一般来说,大家会认为自动进样器只是提高了分析的自动化程度,更加方便。实际上自动进样器更深层次的意义在于可以提高测试结果的重复性。传统的样品制备需要外部溶样和外部过滤,人为因

TEM样品制备

  由于透射电子显微镜收集透射过样品的电子束的信息,因而样品必须要足够薄,使电子束透过。  试样分类:复型样品,超显微颗粒样品,材料薄膜样品等。  制样设备:真空镀膜仪,超声清洗仪,切片机,磨片机,电解双喷仪,离子薄化仪,超薄切片机等。

土壤样品制备

  一、样品制备  (一)场地和器具  1、制样场地  (1)风干室  应设置专用土壤风干室,配备风干架;风干室应通风良好,整洁,无易挥发性化学物质,避免阳光直射土壤样品, 注意防酸或碱等污染,可在窗户加设防尘网。每层样品风干盘上方空间应不少于 30cm,风干盘之间间隔应不少于 10cm。风干室应配

磷酸化蛋白鉴定实验

实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤:胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质(见 24. 3.1 );固相金属螯合亲和层析(IMAC) 富集磷酸肽(见 24. 3. 2 );用串联质谱对磷酸

磷酸化蛋白鉴定实验

实验材料测序级膜蛋白酶                                                          试剂、试剂盒二硫苏糖醇                                                                  碘代乙酰

磷酸化蛋白鉴定实验

实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤:胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质(见 24. 3.1 );固相金属螯合亲和层析(IMAC) 富集磷酸肽(见 24. 3. 2 );用串

DWS实验中样品和对照品的制备

(感谢瑞士弗里堡大学阿道夫·梅克尔研究院的Kitty van Gruijthuijsen博士撰写了本应用。)DWS技术是一项用于研究少量浑浊样品动力学性质的简捷技术。而且,即便是透明的样品,在添加合适的示踪粒子之后,也能测量粘弹模量,这种应用我们通常称之为DWS微流变技术。尽管用户可以通过LSI公司

ICPAES样品制备实验室要求

1)实验室器皿实验室常用的器皿,如烧杯、容量瓶,在使用前需进行清洗。聚四氟乙烯(PTFE)及硼硅玻璃器皿可先用肥皂或洗涤剂清洗,用水冲洗,再用(1+1)HNO3浸泡24小时(或煮沸)。用水清洗,用去离子水洗涤(三次)。有的玻璃器皿油污严重,可用洗液(浓硫酸加重铬酸钾配制)浸洗后,然后再用水充分冲洗。

如何采集制备实验室所需土壤样品?

一、土壤样品的采集土壤样品的采集方法对最终的检测结果与评价影响很大,采样时的误差往往比后续分析的测定误差大很多。因而,必须严格按采样规范操作,以保证土样具有代表性,能正确真实地反映原采样地块的土壤情况。土样采集的时间、地点、层次、方法、数量等都需由土样的分析项目及检测目的来决定。(1)采样前的准备工

细菌透射电镜样品制备实验固定

实验方法原理为了保持菌体的原有形状,常用戊二醛、甲醛、锇酸蒸气等试剂小心固定后再进行染色。实验材料菌悬液试剂、试剂盒固定液(如 pH 7.20.15% 的戊二醛磷酸缓冲液)戊二醛无菌水2% 的磷钨酸钠水溶液仪器、耗材冰箱无菌毛细吸管无菌滤纸实验步骤1. 将用无菌水制备好的菌悬液经过滤,然后向滤液中加

细菌透射电镜样品制备实验——-固定

实验方法原理为了保持菌体的原有形状,常用戊二醛、甲醛、锇酸蒸气等试剂小心固定后再进行染色。实验材料菌悬液试剂、试剂盒固定液(如 pH 7.20.15% 的戊二醛磷酸缓冲液)戊二醛无菌水2% 的磷钨酸钠水溶液仪器、耗材冰箱无菌毛细吸管无菌滤纸实验步骤1. 将用无菌水制备好的菌悬液经过滤,然后向滤液中加

样品和标准样品的制备

1.固体样品野外采回的土壤样品和岩石样品,经自然风干、粉碎、研磨、过筛(100~200目),混合均匀,干燥保存;称样50mg到1g,用高纯铝箔包好(作好编号)。根据待测元素的种类及核反应特征,制备标准样品。一般使用光谱纯或分析纯的待测元素的金属或化合物,根据(估计)待测元素含量范围,称取一定量的化学

样品和标准样品的制备

1.固体样品野外采回的土壤样品和岩石样品,经自然风干、粉碎、研磨、过筛(100~200目),混合均匀,干燥保存;称样50mg到1g,用高纯铝箔包好(作好编号)。根据待测元素的种类及核反应特征,制备标准样品。一般使用光谱纯或分析纯的待测元素的金属或化合物,根据(估计)待测元素含量范围,称取一定量的化学

样品和标准样品的制备

1.固体样品野外采回的土壤样品和岩石样品,经自然风干、粉碎、研磨、过筛(100~200目),混合均匀,干燥保存;称样50mg到1g,用高纯铝箔包好(作好编号)。根据待测元素的种类及核反应特征,制备标准样品。一般使用光谱纯或分析纯的待测元素的金属或化合物,根据(估计)待测元素含量范围,称取一定量的化学

mRNA的S1作图实验

M13模板 双链模板             实验材料 mRNA 试剂、试剂盒

mRNA的S1作图实验

实验材料 mRNA试剂、试剂盒 琼脂糖电泳缓冲液ATP寡聚核苷酸引物多核苷酸激酶缓冲液T4仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤一、图片简介 二、实验步骤 1.  用1×碱性制胶缓冲液制备1.2%的低融点琼脂糖,并将凝固好的胶在1×碱性电泳缓冲液中浸泡过夜。 2.  将以下试剂混合以制备磷酰化的寡

DNA作图实验——限制酶部分消化

实验材料DNA试剂、试剂盒限制酶缓冲液仪器、耗材电泳仪实验步骤1.  用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。2.  用32P末端标记消化产物,5’末端可先用小牛肠碱性磷酸酶处理。3.  用T4多核苷酸激酶进行标记。4.  3’末端可先用大肠扞菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段或T4 DNA

多肽疫苗的定义和制备方式

多肽疫苗是按照病原体抗原基因中已知或预测的某段抗原表位的氨基酸序列,通过化学合成技术制备的疫苗。传统疫苗一般由两种方式制备,一种为能诱发免疫力却不致病的减毒疫苗,例如黄热病、脊髓灰质炎和麻疹疫苗或卡介苗;另一种为灭活疫苗(例如百日咳杆菌、狂犬病毒、伤寒杆菌)。多肽疫苗由于完全是合成的,不存在毒力回升

蛋白酶解的首选变性剂——RapiGest-SF(一)

在生物药肽图分析、蛋白质修饰分析、蛋白质组学研究等诸多工作中,蛋白质的变性与酶解是样品处理的必经之路。RapiGestTM SF正是在这个实验步骤中,用以辅助蛋白酶解的变性试剂[1,2,3]。RapiGest SF有以下优点:■ 综合水相、有机相溶液条件下,最高效的辅助酶解变性剂。■ 作用过程中,不

蛋白酶解的首选变性剂——RapiGest-SF

  在生物药肽图分析、蛋白质修饰分析、蛋白质组学研究等诸多工作中,蛋白质的变性与酶解是样品处理的必经之路。RapiGestTM SF正是在这个实验步骤中,用以辅助蛋白酶解的变性试剂[1,2,3]。RapiGest SF有以下优点:   ■ 综合水相、有机相溶液条件下,最高效的辅助酶解变性剂。