细胞的PFA固定实验——悬浮法
当纯净甲醛在水溶液中溶解时，会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一，在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质，因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时，能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时，形成一网状结构，把细胞的各个结构成分连接起来。实验材料细胞悬液试剂、试剂盒PFAPBS仪器、耗材载玻片加湿盒玻璃染色盘实验步骤1. 吸取浓度为2×107细胞/ml 的细胞悬液10 μl，滴于多聚L-赖氨酸包被的载玻片上。置于加湿盒中，使细胞静置30 min。 2. 将玻片放入玻片架，浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盘中，室温固定 20 min。 3. 将玻片架移至另一盛有3×PBS的盘中，放置2 min（此步终止PFA固定作用）。4. 将玻片架移至一新的含1×PBS的盘中，放置2 min。换1×PBS后，再放置2 min。5. &n......阅读全文
悬浮细胞的培养经验
取点在倒置显微镜下看细胞密度，还有培养基颜色。密度较大了就取出离心，我做的一般是800r/min离心4分钟就可以了，时间太长细胞缺氧缺养分，会影响状态。然后用培养基重悬，一定要吹匀，至于留的密度要看你是不是每天都要传代了，还有不同的细胞要求密度也不同。等你多传两次根据经验就好了。
丙烯酰胺包埋法固定化酶实验
实验方法原理丙烯酰胺的聚合已经应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），也应用于酶的包埋。长的聚合物链通过交联 N，N'-亚甲基二丙烯酰胺连接而成（图 1）。聚合反应是通过N，N，N'，N'-四甲基乙二胺（TEMED）和过硫酸铵引发的。通过改变交联剂的数量，可以控制聚合物网孔尺寸
病毒中和实验_固定抗血清－稀释病毒法
实验材料已知标准的抗病毒血清 (20抗体单位 0. 1 ml)试剂、试剂盒已知阴性血清 (56℃ 30 min 灭活）宿主：敏感细胞、敏感动物、鸡胚仪器、耗材细胞培养板水浴锅细胞培养箱实验步骤（以细胞培养为例）：①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10-1~10-8);②取 0. 6ml不同浓度
丙烯酰胺包埋法固定化酶实验
基本方案 实验方法原理 丙烯酰胺的聚合已经应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），也应用于酶的包埋。长的聚合物链通过交联 N，N'-亚甲基二丙烯酰胺
丙烯酰胺包埋法固定化酶实验
实验方法原理 丙烯酰胺的聚合已经应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），也应用于酶的包埋。长的聚合物链通过交联 N，N'-亚甲基二丙烯酰胺连接而成（图 1）。聚合反应是通过N，N，N'，N'-四甲基乙二胺（TEMED）和过硫酸铵引发的。通过改变交联剂的数量，可以控制聚合
病毒中和实验_固定病毒－稀释抗血清法
中和试验 (neutralization test)是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存的病毒感染力的一种方法。凡是能与病毒结合，并使其失去感染力的抗体称为中和抗体。因为病毒要依赖于活的宿主系统复制增殖，因此，中和试验必须
细胞膜的制备方法实验——从悬浮细胞中制备细胞膜
实验材料胶原酶试剂、试剂盒EDTAHBSS胶原酶溶液阳离子硅胶贮存液仪器、耗材离心机实验步骤一、用胶原酶/EDTA 释放细胞1. 用预保温溶液洗涤单层细胞并用胶原酶处理(1) 预保温溶液洗涤细胞。预保温溶液：5 mmol/L EDTA 钠盐溶于 HBSS，不含二价阳离子。(2) 在单层细胞上加 1%
提取悬浮细胞RNA
提取RNA器械：离心管2支，吸管4个，酒精灯，打火机，记号笔，200ul,1000UL枪，DEPC泡过的枪头EP管，紫外照过的手套。滤纸，DEPC纯水（750ml无水乙醇＋150mlDEPC水,剧烈振荡，使劲的摇晃，直至混匀），氯仿，75％酒精，异丙醇，Trizol，预冷的离心机（两种），EP管架（
植物细胞悬浮培养
一、目的要求 了解植物 细胞悬浮培养的基本原理，通过实验掌握植物细胞悬浮培养的方法和技术。并通过实验练习和巩固无菌操作技术。 二、基本原理 利用固体琼脂 培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点，比如在培养过程中，植物的愈伤组织
悬浮细胞如何贴壁
贴壁细胞分为两种,上皮细胞型和成纤维细胞型,在显微镜下观察时,贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形,而且晃动培养液时,细胞不动.悬浮细胞漂在培养液中,呈圆形,晃动培养液时细胞也随着漂动。所谓的贴壁培养是指大多数动物细胞在离体培养条件下都需要附着在带有适量正电荷的固体或半固体的表面上才
悬浮细胞如何贴壁
贴壁细胞分为两种,上皮细胞型和成纤维细胞型,在显微镜下观察时,贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形,而且晃动培养液时,细胞不动.悬浮细胞漂在培养液中,呈圆形,晃动培养液时细胞也随着漂动。所谓的贴壁培养是指大多数动物细胞在离体培养条件下都需要附着在带有适量正电荷的固体或半固体的表面上才
悬浮细胞换液
1细胞换液是否需要用PBS清洗 我们知道，在“贴壁细胞传代”中，培养基中的血清会抑制胰酶的活性，影响消化的效果，所以必须要PBS 的清洗。但对于细胞换液，尚未查到有资料明确说明是否需要PBS清洗。我觉得这里应该根据细胞的具体情况考虑： 1.若细胞比较“娇气”或生长状态不是特别好时，建议还是不
悬浮细胞如何贴壁
贴壁细胞分为两种,上皮细胞型和成纤维细胞型,在显微镜下观察时,贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形,而且晃动培养液时,细胞不动.悬浮细胞漂在培养液中,呈圆形,晃动培养液时细胞也随着漂动。所谓的贴壁培养是指大多数动物细胞在离体培养条件下都需要附着在带有适量正电荷的固体或半固体的表面上才
植物细胞悬浮培养
一、目的要求了解植物细胞悬浮培养的基本原理，通过实验掌握植物细胞悬浮培养的方法和技术。并通过实验练习和巩固无菌操作技术。二、基本原理利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点，比如在培养过程中，植物的愈伤组织在生长过程中的营
用[32P]磷酸标记细胞实验_标记悬浮培养的HeLa细胞
实验材料细胞试剂、试剂盒磷酸仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 培养细胞至对数期，600 g 离心 5 分钟。2. 弃上清，用无磷酸培养基悬浮细胞。3. 培养细胞 3~4 小时以耗尽它们的磷酸储备。4. 再次离心，弃上清，用无磷酸培养基悬浮，加 32P 磷酸盐至 20 μCi/ml 培养液，培养 1
悬浮细胞如何去除死细胞
将培养瓶竖立放一段时间（50min左右），然后用吸管轻轻吸取上面1ml的细胞悬液，移入另一个新的已加培基的培养瓶中。或者ficoll分离，就像分离PBMC一样，先把细胞混匀，然后小心缓慢地把细胞加入到ficol中，1000g离心20分钟，收集位于ficoll和培养基之间的透明层，即为你的活细胞，这是
植物细胞的悬浮培养技术
将游离的植物细胞或小的细胞团置于液体培养其中进行培养和生长的一种技术，称为植物细胞悬浮培养。它是从愈伤组织的液体培养基础上发展起来的一种新的培养技术。从50年代起，米尔（Muir）等便对单 细胞培养 进行了探讨和研究，得到了万寿菊，烟草单细胞和细胞团的悬浮液。1958年斯图
丙烯酰胺包埋法固定化酶实验2
实验方法原理丙烯酰胺的聚合已经应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），也应用于酶的包埋。长的聚合物链通过交联 N，N'-亚甲基二丙烯酰胺连接而成（图 1）。聚合反应是通过N，N，N'，N'-四甲基乙二胺（TEMED）和过硫酸铵引发的。通过改变交联剂的数量，可以控制聚合物网孔尺寸
免疫沉淀的培养细胞的裂解实验_悬浮生长的细胞的裂解
实验材料细胞实验步骤①细胞在480g的离心力条件下离心10min，弃去上清。②用冷PBS洗细胞两次，然后将洗过的细胞置于冰上。③重新悬浮沉淀，使1.0ml裂解液（冷却到4℃)中含大约1X107〜5X107个细胞。④冰上孵育细胞15min，并不时地振动小管。⑤4℃条件下20000g离心裂解液10min
如何去除悬浮细胞中的死细胞
将培养瓶竖立放一段时间（50min左右），然后用吸管轻轻吸取上面1ml的细胞悬液，移入另一个新的已加培基的培养瓶中。或者ficoll分离，就像分离PBMC一样，先把细胞混匀，然后小心缓慢地把细胞加入到ficol中，1000g离心20分钟，收集位于ficoll和培养基之间的透明层，即为你的活细胞，这是
悬浮细胞培养经验
6 细胞培养基的选择 6.1根据细胞特点、蛋白表达及病毒特点和培养方式选择细胞培养基 商售工业用细胞培养基主要是干粉培养基，常用的培养基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等系列，根据细胞的特性及工业化的生产需求，开发或生产的同一系列的细胞培养基在成份上也有
如何养好悬浮细胞？
最近有很多小伙伴向小尚诉苦：“悬浮细胞太难养了，操作不方便，总感觉长得很慢！”其实呀，只要掌握诀窍，悬浮细胞也可以轻松培养。小尚多年培养80余种悬浮细胞，精心总结了这份悬浮细胞培养指南，相信肯定能帮到你。1.选择合适的容器培养悬浮生长的细胞，需要选择合适的容器，就像选择一个合适的家一样。但家并不是越
灌注固定实验
实验材料实验动物试剂、试剂盒无水乙醇二甲苯酒精甘油生理盐水等仪器、耗材灌注瓶针管剪刀摄子止血钳组织钳咬骨钳等实验步骤1灌注固定用1%戊巴比妥钠(80mg/kg)麻醉动物，沿胸骨柄剪开胸腔，剪开心包膜，暴露心脏，与心尖成30°-45°夹角剪开左心室，再剪开右心耳，将灌注针头从左心室插入主动脉，固定针头
灌注固定实验
实验方法原理 实验材料 实验动物试剂、试剂盒 无水乙醇二甲苯酒精甘油生理盐水等仪器、耗材 灌注瓶针管剪刀摄子止血钳组织钳咬骨钳等实验步骤 1灌注固定用1%戊巴比妥钠(80mg/kg)麻醉动物，沿胸骨柄剪开胸腔，剪开心包膜，暴露心脏，与心尖成30°-45°夹角剪开左心室，再剪开右心耳，将灌注针头从左心
实验室分析方法色谱法－固定液定义和对固定液的要求
一般是一种高沸点的有机物的液膜,通过对不同组份的不同分子间的作用,使组份在色谱柱中得到分离。对气相色谱用的固定液,一般有如下几点要求:1.在操作温度下蒸气压低,热稳定性好,与被分析物理或载气不产生不可逆反应;2.在操作温度下呈液态,而且粘度愈低愈好。物质在高粘度的固定液中传质速度慢,柱效率因而降低。
细胞常用固定剂和固定方法
培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟，干燥。2．甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟，自然干燥。3．丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强，抗原保存好，很少用于组织切片，常用于培养细
免疫资料——免疫学常用简称介绍
1：抗体查询常用名词Reactivity （物种与抗体反应）：Species with which the antibody reactsHost Species （宿主）：Host in which the antibody was generatedApplications（应用） ：Speci
微胶囊化尼龙珠法酶固定化实验
实验方法原理 实验材料 酶溶液试剂、试剂盒 碳酸氢钠癸二酰二氯化合物溶液磷酸钾NaCl实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」相同体积的酶和 1，6-己烷溶液混合，为了尼龙珠子在形成的时候彼此不相互接触，癸二酰二氯化合物溶液用微量注射器缓慢注入混合液中。5 min 后，有机相被轻轻倒出，在有
微胶囊化尼龙珠法酶固定化实验
实验方法原理实验材料酶溶液试剂、试剂盒碳酸氢钠癸二酰二氯化合物溶液磷酸钾NaCl实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」相同体积的酶和 1，6-己烷溶液混合，为了尼龙珠子在形成的时候彼此不相互接触，癸二酰二氯化合物溶液用微量注射器缓慢注入混合液中。5 min 后，有机相被轻轻倒出，在有机溶液完全挥发后
微胶囊化尼龙珠法酶固定化实验
微胶囊化尼龙珠法 实验方法原理 实验材料 酶溶液