细胞的PFA固定实验——悬浮法
当纯净甲醛在水溶液中溶解时,会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一,在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质,因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时,能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时,形成一网状结构,把细胞的各个结构成分连接起来。实验材料细胞悬液试剂、试剂盒PFAPBS仪器、耗材载玻片加湿盒玻璃染色盘实验步骤1. 吸取浓度为2×107细胞/ml 的细胞悬液10 μl,滴于多聚L-赖氨酸包被的载玻片上。置于加湿盒中,使细胞静置30 min。 2. 将玻片放入玻片架,浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盘中,室温固定 20 min。 3. 将玻片架移至另一盛有3×PBS的盘中,放置2 min(此步终止PFA固定作用)。4. 将玻片架移至一新的含1×PBS的盘中,放置2 min。换1×PBS后,再放置2 min。5. &n......阅读全文
细胞的PFA固定实验——悬浮法
当纯净甲醛在水溶液中溶解时,会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一,在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质,因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时,能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时,形成一网状结构,把细胞的各个结构成分连接起来。实验材料细胞悬液试剂、试
细胞的PFA固定实验
悬浮法 实验材料 细胞悬液 试剂、试剂盒
细胞的PFA固定实验
实验材料细胞悬液 试剂、试剂盒PFA PBS
细胞的PFA固定实验
实验材料 细胞悬液试剂、试剂盒 PFAPBS仪器、耗材 载玻片加湿盒玻璃染色盘实验步骤 1. 吸取浓度为2×107细胞/ml 的细胞悬液10 μl,滴于多聚L-赖氨酸包被的载玻片上。置于加湿盒中,使细胞静置30 min。 2. 将玻片放入玻片架,浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盘中,室温固定
怎样固定悬浮细胞
如何判断悬浮细胞培培养时,细胞是死的还是活的将在动物细胞凋亡研究中应用的Hoechst-PI双重荧光染色 法与琥珀酸脱氢酶(SDH)染色法相结合,建立了一种更加完善的、能同时鉴别和研究悬浮培养的植物细胞凋亡及坏死的新方法——Hoechst-PI- SDH三重染色法(H-P-S法)。该方法可直接用于红
特殊细胞培养实验_悬浮培养法
实验方法原理悬浮培养是使贴附性细胞呈悬浮状态生长。如所培养的细胞本身属悬浮生长类型,则无须做任何处理,在传代时先做离心处理去除旧培养液,添加新培养液即可。但在培养贴附型细胞时,因其有贴附性,必须进行干扰使细胞不能贴附,才能形成悬浮状态生长的细胞。实验材料细胞仪器、耗材培养瓶搅拌器实验步骤1. 用大
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细胞培养实验——悬浮细胞培养
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悬浮培养法细胞的筛选驯化和保藏
实现悬浮培养首先需要选择合适的宿主细胞,细胞系的特征直接影响放大的可能性以及放大技术的选择。同一种细胞在悬浮培养和贴罐培养时对同一病毒的敏感性不同;同一株细胞不同的克隆对营养条件有不同的需求,对病毒敏感性亦可能不同。 常根据毒株特性,综合考虑所用毒株能在何种细胞上增殖、表达,悬浮或贴壁细胞属性足否适
悬浮培养细胞生长曲线的绘制实验
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悬浮培养细胞生长曲线的绘制实验
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悬浮培养细胞生长曲线的绘制实验
实验方法原理 以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养,每天计数细胞直至平台期。实验步骤 材料无菌悬浮细胞培养培养液,l00 mlD-PBSA(细胞计数用)24 孔板非无菌装培养板的塑料盒CO2 温箱或 5% C02 以充盈塑料盒操作步骤1. 如单层培养那样(见方案 21.8 ) 将生长液中的细胞悬液以不
体细胞融合实验——悬浮培养细胞的融合
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单细胞培养培养方法介绍细胞悬浮培养法
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细胞固定切片和包埋实验
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悬浮培养法介绍
悬浮培养是使帖壁细胞呈悬浮状态生长。如所需培养的细胞本身属悬浮生长型,则无须做任何处理;在传代时先做离心处理去除旧培养液,添加新培养液即可。但在培养帖附型细胞时,必须进行干扰细胞不能帖附,方法有二:(1)用大培养瓶增加含有铁芯的无毒的聚苯乙烯棒,在培养中进行电磁搅拌,使细胞不能帖壁而成悬浮培养。(2
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悬浮细胞的免疫荧光标记实验
实验方法原理免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。实验材料悬浮细胞试剂、试剂盒多聚
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方案21.9 悬浮培养细胞生长曲线的绘制 实验方法原理 以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养,每天计数细胞直至平台期。
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实验材料 悬浮细胞试剂、试剂盒 多聚-L-赖氨酸仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 1. 细胞在冰浴中冷却,然后用台式离心机于4℃以800 g 离心5 min,吸去培养液并以4℃PBS重悬细胞。 2. 离心吸去PBS,以1~2 ml 2%PFA固定液,或2%PFA固定液/0.1% Triton X
悬浮细胞克隆的分离
实验方法原理用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。仪器、耗材生长培养基多孔板培养瓶解剖显微镜移液器粗头笔黄色枪头实验步骤1. 用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔标记出集落。2. 24 孔板的每一孔中加 1 ml 培养基。3. 解剖显微
悬浮细胞的培养经验
取点在倒置显微镜下看细胞密度,还有培养基颜色。密度较大了就取出离心,我做的一般是800r/min离心4分钟就可以了,时间太长细胞缺氧缺养分,会影响状态。然后用培养基重悬,一定要吹匀,至于留的密度要看你是不是每天都要传代了,还有不同的细胞要求密度也不同。等你多传两次根据经验就好了。
悬浮细胞克隆的分离
实验方法原理 用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。 仪器、耗材 生长培养基 多孔
悬浮细胞克隆的分离
实验方法原理 用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。仪器、耗材 生长培养基多孔板培养瓶解剖显微镜移液器粗头笔黄色枪头。实验步骤 1. 用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔标记出集落。2. 24 孔板的每一孔中加 1 ml 培养基。3.
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经验交流(0)实验方法原理用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。仪器、耗材生长培养基 多孔板
悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,zui简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟,若悬液量大,可适当延长离心时间,但速度不能太高,延时也不能太长,以避免挤压或机械损伤细胞,离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次,用培养基洗一次后,调整适当细胞浓度后再分瓶培养,若选用悬液中某些细胞,