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食管癌细胞系中干细胞样SP细胞的分离鉴定—细胞培养技术

细胞培养技术实验材料人食管癌细胞系试剂、试剂盒胰酶RNA酶碘化丙啶四甲基偶氮唑盐小牛血清DMEMDMSOK2HPO4Na2HPO4NaCI仪器、耗材无菌分选管400目细胞筛水浴锅离心机酶标仪电泳仪显微镜PCR仪实验步骤一、材料准备1. 青霉素储存液(1)将青霉素小瓶中的80万单位的干粉充分溶解于8 ml去离子水中。(2)分装为1 ml/管,-20℃保存。2. 链霉素储存液(1)将键霉素小瓶中的1 mg干粉充分溶解于10 ml去离子水中。(2)分装为1 ml/管,-20℃保存。3. RPMI 1640培养基(1)在大三角瓶中装入800 ml 去离子水。(2)加入1袋RPMI1640干粉制荆,于搅拌器上混匀。(3)加入2.0 g Na2HCO3,1 ml 10万unit/ml 的青霉素储存液。(4)1 ml 充分溶解后,调节pH值至7.4,去离子水定容为1000 ml。(5)无菌条件下0.22 u......阅读全文

食管癌细胞系中干细胞样SP细胞的分离鉴定—细胞培养技术

细胞培养技术实验材料人食管癌细胞系试剂、试剂盒胰酶RNA酶碘化丙啶四甲基偶氮唑盐小牛血清DMEMDMSOK2HPO4Na2HPO4NaCI仪器、耗材无菌分选管400目细胞筛水浴锅离心机酶标仪电泳仪显微镜PCR仪实验步骤一、材料准备1.  青霉素储存液(1)将青霉素小瓶中的80万单位的干粉充分溶解于8

食管癌细胞系中干细胞样SP细胞的分离鉴定实验

实验材料 人食管癌细胞系试剂、试剂盒 胰酶RNA酶碘化丙啶四甲基偶氮唑盐小牛血清DMEMDMSOK2HPO4Na2HPO4NaCI仪器、耗材 无菌分选管400目细胞筛水浴锅离心机酶标仪电泳仪显微镜PCR仪实验步骤 一、材料准备1.  青霉素储存液(1)将青霉素小瓶中的80万单位的干粉充分溶解于8 m

侧群干细胞(sp细胞)的分离与分选

准备工作: DF12 加入0.1%BSA,100ml,取10ml冰浴,40ml放入孵箱;其余的放入4度; DNase I 100*; PI:50ug/ml; Hoechst33342: 1000ug/ml(all from Sigma) 计数板,冰盒;各种离心管,无菌流式管(BD),400滤网(BD

侧群干细胞(sp细胞)的分离与分选-2

这是我收集的SP分选的方法:与大家共享。 一 Hoechst染色方案 1. 在37℃循环水浴箱中预热DMEM+培养基。确保温度为37℃。 2. 重悬细胞于预热的DMEM+培养基中,浓度为106/ml,为了避免细胞留在试管中,所以在Hoechst染色时必须用聚丙烯试管。当要染大量细胞时,在250ml聚

皮肤干细胞的分离与鉴定

  皮肤干细胞的分离  皮肤干细胞的分离主要利用发现的相对特异的表面标志(如整合素家族成员和角蛋白家族成员)结合流式细胞术进行。  皮肤干细胞的鉴定  利用皮肤干细胞一些相对特异的标志建立了一系列的皮肤干细胞鉴别方法。最初,一些学者是从研究细胞黏附特性入手的。他们发现,在表皮基底细胞定向分化时,它会

脐血脐带中干细胞分离实验—脐血来源胚胎样干细胞分离

实验材料脐带血来源的MNCs(CB-MNCs)试剂、试剂盒灭菌培养基TPOFLK细胞因子混合物(10 ng mL促血小板生成素50 ng mL Flt-3配体和20 ng mL c-kit配体)ACD-A缓冲液小鼠抗人CD45CD33CD47单克隆抗体抗血型糖蛋白A抗体2%人丙种球蛋白(HAG。用P

什么是细胞系鉴定?

所谓细胞系鉴定即通过STR(短串联重复)图谱所建立细胞系的遗传特征。一株细胞系的遗传特征确立后,细胞系可以通过定期的检测,以防止出现细胞系被误认或交叉污染的情况。

细胞分离技术是细胞培养的基本方法

从原代组织中分离细胞 将组织块分离(散)成细胞悬液的方法有多种,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短,以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织,获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋白酶 (Tryp

细胞培养的基本方法-细胞分离技术(一)

细胞分离技术一、从原代组织中分离细胞 将组织块分离(散)成细胞悬液的方法有多种,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短,以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织,获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋

细胞培养的基本方法-细胞分离技术(二)

1.悬浮细胞 ●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200~400g离心5分钟沉淀细胞,使用移液管移去上清到最小体积,不要搅乱细胞。 ●以1×107到5×107细胞/ml密度,在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞,或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中,再次悬浮细胞。 ●