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侧群干细胞(sp细胞)的分离与分选2

这是我收集的SP分选的方法:与大家共享。 一 Hoechst染色方案 1. 在37℃循环水浴箱中预热DMEM+培养基。确保温度为37℃。 2. 重悬细胞于预热的DMEM+培养基中,浓度为106/ml,为了避免细胞留在试管中,所以在Hoechst染色时必须用聚丙烯试管。当要染大量细胞时,在250ml聚丙烯试管中最为便利。 3 加入Hoechst至终浓度为5μg/ml。我们建议用200 的原液(1 mg/ml),它是将一整瓶Hoechst粉末溶于水中(B2261, Sigma),再分装,保存浓缩的Hoechst溶液在-20℃ 4 将细胞在37℃循环水浴箱中预热,在90 min 的孵育中定期混匀试管。时间和温度对于Hoechst染色来说特别关键,所以DMEM必须预热而且试管必须完全没于水......阅读全文

侧群干细胞(sp细胞)的分离与分选-2

这是我收集的SP分选的方法:与大家共享。 一 Hoechst染色方案 1. 在37℃循环水浴箱中预热DMEM+培养基。确保温度为37℃。 2. 重悬细胞于预热的DMEM+培养基中,浓度为106/ml,为了避免细胞留在试管中,所以在Hoech

侧群干细胞(sp细胞)的分离与分选

准备工作: DF12 加入0.1%BSA,100ml,取10ml冰浴,40ml放入孵箱;其余的放入4度; DNase I 100*; PI:50ug/ml; Hoechst33342: 1000ug/ml(all&nbs

干细胞研究鼻祖分享经验:如何分选干细胞

  最早研究人员是在1997年发现了急性髓系白血病(AML)血液样品中的癌症干细胞,但是由于采用表面标记物证明实体肿瘤中癌症干细胞的存在,常常会出现不一致的结果,因此这一理论也引发了激烈的讨论。但是近年来科学家们在所有癌症类型(胶质母细胞瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌)中发现了具有自我更新能力,启

食管癌细胞系中干细胞样SP细胞的分离鉴定—细胞培养技术

细胞培养技术实验材料人食管癌细胞系试剂、试剂盒胰酶RNA酶碘化丙啶四甲基偶氮唑盐小牛血清DMEMDMSOK2HPO4Na2HPO4NaCI仪器、耗材无菌分选管400目细胞筛水浴锅离心机酶标仪电泳仪显微镜PCR仪实验步骤一、材料准备1.  青霉素储存液(1)将青霉素小瓶中的80万单位的干粉充

用流式法(FACS)分离间质SP细胞实验2

实验材料2〜4代的间质细胞试剂、试剂盒PBSA BSA:PBSA+0.5%BSAPBSA 2FB:含2%FBS的PBSA封闭缓冲液抗体:MAB4155F克隆5D3抗ABCG2-FITC或同型抗体-FITC仪器、耗材具有488 nm氩激光器和525 20带通滤波器的高速细胞分选仪实验步骤(a)胰蛋白酶

干细胞磁珠分选和流式分选的区别

简单说一下原理:现在流式分选一般都是电荷式分选,即对感兴趣的目标细胞所在的液滴充上电荷,液滴经过电极板,通过电场作用发生偏转,从而实现分选。磁珠分选首先使用磁珠偶联的抗体去标记细胞,然后把标记好的细胞过柱子(柱子周围连磁铁),带磁珠的细胞就留在柱子上,不带磁珠的细胞就流走了,从而实现分选。现在可以比

干细胞磁珠分选和流式分选的区别

应管理员要求,我来比较一下流式分选和磁珠分选的优缺点,本来想列一个表,但表格可能表述不清楚,还是用通俗的语言写啊,个人体会欢迎拍砖。简单说一下原理:现在流式分选一般都是电荷式分选,即对感兴趣的目标细胞所在的液滴充上电荷,液滴经过电极板,通过电场作用发生偏转,从而实现分选。磁珠分选首先使用磁珠偶联的抗

南医大:miRNA调控肺癌侧群细胞的分化与沉默

  肺癌又称原发性支气管癌,系指原发于支气管粘膜和肺泡的肿瘤。近年来,随着世界各国肺癌的发病率和病死率持续上升,肺癌成为最常见的恶性肿瘤之一。MicroRNA是一类非编码小分子RNAs(18-25 nt),其通过与靶mRNA特异性结合,降解mRNA或抑制蛋白翻译,从而

亚细胞结构的分离与鉴定-2

第三节 微粒体的分离细胞通过匀浆破碎时,细胞质膜碎成片段,这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器(细胞核、线粒体、质膜、内质网等)的小泡有不同的特性,所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小的膜泡异质性集合体,称微粒体(microsome)。分离

脂肪来源干细胞的取材与分离实验

从小鼠腹股沟脂肪垫获取ASCs实验方法原理人和小鼠的脂肪组织均可用于分离ASC,可以获得相当数目的ASCs。人脂肪组织通常来源于抽脂。小鼠脂肪组织则取自腹股沟处脂肪垫。实验材料小鼠 4〜6只试剂、试剂盒Hank’s缓冲盐溶液(HBSS)ASC培养基胶原酶溶液聚乙烯吡咯酮碘溶液麻醉剂:三溴乙醇 37℃