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胚胎小鼠纹状体神经干细胞的分离培养及鉴定

方法：神经干细胞的培养①原代细胞的培养：取孕13.5天昆明种二级孕小鼠，引臼脱颈处死,碘酒、乙醇消毒腹部,逐层剖开腹部皮肤、肌肉、腹膜，取出子宫,放入盛有D1-SGH液的器皿中。仔细剥离胎膜、羊膜，暴露胎鼠，剪开颅骨，取出胎鼠脑组织并转移至另一盛有D1-SGH液的器皿中，体视显微镜下剥离脑膜,分离胎鼠纹状体，仔细剥离血管及脑膜，将收集到的纹状体在D-hanks液中漂洗两次，置于盛有4℃D-hanks液的器皿中，用虹膜剪将组织剪碎,加入0.125℅的胰酶消化(37℃，15min)，期间每隔5min震荡一次。500转离心5min, 弃上清，D-hanks液清洗两次，将沉淀细胞重悬于增殖培养基中，培养基成分：DMEM/F12（1：1），2% B27 supplement，青霉素、链霉素各100U/ml，EGF 20 ng/mL，b-FGF 10ng/mL。用火焰抛光的吸管反复吹打，分散组织制成单细胞悬液，吸取9滴细胞悬液、......阅读全文