酿酒酵母的LiAc／ssDNA／PEG高效转化法实验_快速简便的转化法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒LiAc仪器、耗材YPAD 平板YPAD 液体培养基实验步骤1. 将 10 μl 接种物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2，培养过夜。2. 对一个转化来说，在微量离心管中用 1.0 ml 灭菌水悬浮一接种环酵母菌。3. 离心沉淀细胞，将水去掉。4. 用 500 μl 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞，30℃ 水浴 15 分钟。5. 制备转化混合物：每个转化管加 240 μl PEG、36 μl 1.0 mol/L 的 LiAc、25 μl ssDNA、5.0 μl 质粒 DNA 和 45 μl 水。6. 用微量离心机离心沉淀细胞，去掉 LiAc。7. 向每个细胞沉淀中加入 350 μl 转化混合物，剧烈涡旋混匀。8. 30℃ 水浴 30 分钟。9. 42℃ 水浴热休克 20 分钟。10. 用微量离心机最高速度离心 15 秒，去掉转化混合物。11. 吸取 1.0 ml 灭菌水加到管中，上......阅读全文
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_快速简便的转化法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒LiAc仪器、耗材YPAD 平板YPAD 液体培养基实验步骤1. 将 10 μl 接种物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2，培养过夜。2. 对一个转化来说，在微量离心管中用 1.0 ml 灭菌水悬浮一接种环酵母菌。3. 离心沉淀细胞，将水去掉。4. 用 500 μl
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_高效转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒LiAc仪器、耗材YPAD 平板YPAD 液体培养基实验步骤1. 取 10 μl 细胞在 YPAD 平板上涂布 2 cm2，培养过夜；或者接种 5 ml 的 YPAD 液体培养基，于 30℃ 震荡培养过夜。2. 将一瓶 YPAD 培养基于 30℃ 平衡过夜。3. 去 50 m
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验
转化材料的制备 高效转化法 转化含有质粒的菌株 快速简便的转化法 实验材料 DNA
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验
转化材料的制备 高效转化法 转化含有质粒的菌株 快速简便的转化法 实验材料 DNA
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE 缓冲液双蒸水仪器、耗材 磁力搅拌器玻璃烧杯实验步骤 一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml 灭菌 TE 缓冲液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力搅拌器上剧烈搅拌 2~3 个小时以混匀。2. 将载体 DNA 溶液分装成 9 个 10 ml
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_转化材料的制备
实验材料DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液双蒸水仪器、耗材磁力搅拌器玻璃烧杯实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml 灭菌 TE 缓冲液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力搅拌器上剧烈搅拌 2~3 个小时以混匀。2. 将载体 DNA 溶液分装成 9 个 10 ml 和 10
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_转化含有质粒菌株
实验材料细胞试剂、试剂盒YPAD仪器、耗材培养瓶SC 减样选择培养基实验步骤1. 在一个 250 ml 的培养瓶中，接种该菌株到 25 ml 相应的 SC 减样选择培养基中，200 r/min 培养过夜。2. 检测每毫升细胞数，按 2.5X108 个细胞计算所需培养物体积。3. 将该体积的培养物加到
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_LiAc转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒腺嘌呤亮氨酸LiAc仪器、耗材YEA 平板实验步骤1. 在 YEA 平板上培养细胞直到长成可见单菌落。2. 接种单菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等营养缺陷互补物的 YEA 或 PM 培养基中，于允许温度以 200 r/min 振荡培养防止酵母菌沉积
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG3350仪器、耗材YPAD 液体培养基涡旋振荡器实验步骤1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基，30℃ 振荡培养过夜，使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 100 ml 灭菌水洗两遍，
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_材料的准备
实验材料高分子量 DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液仪器、耗材微量离心管实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_材料的准备
实验材料高分子量 DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液仪器、耗材微量离心管实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒三梨糖醇仪器、耗材PM 或 YE 培养基实验步骤1. 用 PM 或 YE 培养基培养细胞，至滴度到每毫升 1X107 个细胞。2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍，以降低细胞的导电性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞，使滴度
酵母的高效转化
酵母的高效转化1．接种5ml液体YPAD或10ml SC，30℃下振荡培养过夜。2．计数过夜培养物细胞密度，以最终5×106个/ml的细胞密度接种50ml YPAD培养液。3．置30℃，200r/min振荡培养至2×107个细胞/ml，通常需要3～5小时，该培养物的细胞足够供十次转化用。4．用50m
大肠杆菌转化实验——高效率电转化法
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LBSOC仪器、耗材电转化仪离心机分光光度计实验步骤1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养液，37℃温和振摇培养5 h 或过夜。2. 将2.5 ml 培养物加人到盛有500 ml LB培养液的2 L 烧瓶中，37℃摇匀振荡培养至OD600为0.5~0.6。 3.
酵母转化实验
实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开
酵母转化实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD
酵母菌落直接质粒转化法
酵母菌落直接质粒转化法1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PL
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过
酵母转化实验_乙酸锂转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基，然后
质粒的转化及转化子的鉴定实验——电转化法
实验方法原理电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。实验材料外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞试剂、试剂盒X-galAmpLA培养基水抗生素仪器、耗
毕赤酵母高效转化实验方案
毕赤酵母高效转化实验方案1.收集菌体取1mlGS115过夜培养物(OD约6-10) 分装到1.5ml EP管中，4℃、10000g 离心1min，弃上清，沉淀用无菌水(4℃)洗涤，同样条件下离心，弃上清。2.菌体处理加入1ml处理液，室温下放置20min。处理液：10mM LiAc10mM DTT0
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养过夜（如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养）。2. 转化前一天晚上，从5 ml 过夜培养
LiCl法转化毕赤酵母菌
实验概要本实验介绍了用LiCl法将重组质粒导入毕赤酵母菌X-33的转化方法。主要试剂甘油，YPD培养基，50% PEG，1 mol/L LiCl，Sac I主要设备摇床，高速离心机，1.5 ml微量离心管，水浴锅实验材料重组质粒pPIC6αA-APC，毕赤酵母菌X-33实验步骤1. 取毕赤酵母甘油种
毕氏酵母氯化锂转化法
试剂1M LiCl 50% PEG3350 (氯化锂转化法只能PEG3350,不能用PEG8000,PEG3350在北京莱博生物有售,80元/100克)2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA）-20℃保存注：醋酸锂对毕
TSS－法快速转化大肠杆菌
A．过夜培养物转种后27拚２度快摇约205hrs至O.D 值为0.3 左右。B．取１ml菌液离心收菌，加入0.1ml 冰浴的1 ′TSS 液轻轻吸打悬起细胞。（可以放-70 摄氏度冻存半年）B 、可以取0.1ml 菌液加入0.1ml 冰浴的2 ′TSS 混匀，该方法只适于做质粒转化，如做连接产物转化
转化子DNA的快速鉴定—快速细胞破碎法
目的：1、掌握用细胞破碎液裂解菌体细胞，并通过电泳的方法细胞中不同分子量质粒的方法；2、从实验六的氨苄青霉素抗性转化子中筛选仅含一个拷贝目的基因的重组载体。原理：挑选8～10个白菌落接于平板过夜培养。利用破碎细胞缓冲液中的十二烷基硫酸纳（SDS）在37℃溶解膜蛋白，使细胞破裂，然后高速离心，将含有质
毕赤酵母PEG1000转化方法
实验概要本文介绍了毕赤酵母PEG1000转化方法。据称PEG比LiCl 方法好，但不如去壁细胞及电转化法，但对没有电转装置的人来说，更方便，效率为102-103/ugDNA。主要试剂Buffer A：1M山梨醇，10mM bicine(N－二(羟乙基)甘氨酸)pH8.35，3%(v/v)乙二醇Buf
质粒的转化及转化子的鉴定实验——热激法
质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）筛选目的细胞。实验方法原理热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸