细菌细胞的制备实验实验_将核糖体解离为大亚基/小亚基

实验材料核糖体试剂、试剂盒解离缓冲液贮存缓冲液实验步骤1. 通过将核糖体样品对解离缓冲液透析并用 7%~30% 的线性蔗糖梯度离心来将真细菌 70S 核糖体分离为 30S 和 50S 亚基。解离缓冲液:10 mmol/L Tris-HCl,pH 7.51 mmol/L MgOAc100 mmol/L NH4Cl1 mmol/L DTT0.5 mmol/L EDTA2. 测量样品在 A260 下的光吸收,将样品用解离缓冲液稀释至每毫升 100~150 A260。3. 将样品于 4℃ 对解离缓和液透析 5 分钟。4. 用解离缓冲液制备 7% 和 30% 的蔗糖溶液。用 Millipore 过滤蔗糖溶液。5. 线性蔗糖梯度可以按前述方法在 Beckman Vti 50 转头配套的管中制备。制备 37 ml 梯度和 2 ml 样品。在梯度的制备中,应自下而上地先向管底倒入 18.5 ml 7% 蔗糖溶液,然后倒入 18.5 m......阅读全文

细菌细胞的制备实验实验_将核糖体解离为大亚基/小亚基

实验材料核糖体试剂、试剂盒解离缓冲液贮存缓冲液实验步骤1. 通过将核糖体样品对解离缓冲液透析并用 7%~30% 的线性蔗糖梯度离心来将真细菌 70S 核糖体分离为 30S 和 50S 亚基。解离缓冲液:10 mmol/L Tris-HCl,pH 7.51 mmol/L MgOAc100 mmol/L

核糖体亚基的概念

核糖体(ribosome)内有大、小两个亚基(subunit)组成。由于沉降系数不同,核糖体又分为70S型和80S型两种。70S型核糖体主要存在于原核细胞的细胞质基质中,其小亚基单位为30S,大亚基单位为50S。80S型核糖体主要存在于真核细胞质中,其小亚基单位为40S,大亚基单位为60S。

细菌细胞的制备实验实验——多核糖体的纯化

实验材料真细菌多核糖体植物多核糖体试剂、试剂盒多核糖体蔗糖梯度缓冲液蔗糖梯度缓冲液实验步骤一、真细菌多核糖体1. 含有多核糖体(每管 0.6 ml ) 的上清铺到 15%~30% 蔗糖梯度的上面,在该蔗糖梯度的下面为 0.5 ml 的 60% 蔗糖铺垫液,内含如下缓冲液:多核糖体蔗糖梯度缓冲液:20

细菌细胞的制备实验实验——核糖体及多核糖体的分离

实验材料细胞试剂、试剂盒蔗糖溶液高盐蔗糖铺垫液蔗糖铺垫缓冲液重悬缓冲液实验步骤1. 为从剩余的细胞组分中分离核糖体,将不含细胞碎片的粗制裂解液以 1:1 的比例铺到 1.1 mol/L 的蔗糖溶液之上。于 4℃ 在Beckinan 50.2 Ti 恒定角度转头中离心,这一过程包括长时间的离心以使 7

用线性连续蔗糖梯度快速分离原核细胞的核糖体亚基

大肠杆菌(E. coli )的核糖体(70S,M=380万)由50S (M=180万) 大亚单位及30S小亚单位 (M=90万)组成,用简单的直线型5—25%蔗糖梯度(在缓冲液中调制)。合适的缓冲液(0.2mM 醋酸镁,10mM  Tris—HCL 及60mM 氯化铵)有利于稳定70S核糖体

细菌细胞的制备实验实验——70S核糖体的纯化

实验材料核糖体试剂、试剂盒致密偶联缓冲液仪器、耗材Beckman Vti50 转头实验步骤1. 采用 Beckman Vti50 转头和 7% 至 30% (w/v) 的线性蔗糖梯度沉降来纯化 70S 真细菌的核糖体。这一步可以确保大的蛋白质聚集物不会与 70S 核糖体一起沉淀下来。并可以产生致密偶

亚基缔合的定义

中文名称亚基缔合英文名称subunit association定  义蛋白质的两个或多个单一亚基在某种条件下以非共价键形式结合在一起的方式。如蛋白质生物合成时,核蛋白体大小亚基的结合。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),总论(二级学科)

亚基的化学结构

亚基之间呈特定的三维空间排布,并以非共价键相连接。蛋白质分子中各个亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用,成为蛋白质的四级结构(quaternary structure)。一个化合物从形式上消去两个一价或一个二价的原子或基团,剩余的部分称为亚基。亚基有两种不同的构造:①两个价集中在同一个原子上

细菌细胞的制备实验实验

细胞抽提物的制备 核糖体及多核糖体的分离 70S核糖体的纯化 多核糖体的纯化 将核糖体解离为大亚基和小亚基             实验材料

细菌细胞的制备实验实验

细胞抽提物的制备核糖体及多核糖体的分离70S核糖体的纯化多核糖体的纯化将核糖体解离为大亚基和小亚基实验材料细胞                                                          试剂、试剂盒弗氏破碎缓冲液                        

细菌细胞的制备实验实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 弗氏破碎缓冲液匀浆缓冲液仪器、耗材 弗氏破碎器实验步骤 1. 将 5~10 g 新鲜或冻存的细胞沉淀物垂悬于弗氏破碎缓冲液中或者适当的匀浆缓冲液中。通常 4L 的大肠杆菌培养物可以获得大约 7.5 g 的细胞沉淀。2. 悬液中加入无 RNase 的 DNase 至终浓度为

Science:从结构上揭示人类核糖体大亚基组装过程

  生命依靠核糖体运转。地球上的每个细胞都需要核糖体来将遗传信息转化为生物运作所需的所有蛋白,并反过来制造更多的核糖体。但是科学家们仍然对这些重要的纳米机器是如何组装的缺乏清楚的了解。  如今,在一项新的研究中,来自美国洛克菲勒大学的研究人员解析出核糖体大亚基的新的高分辨率图像,揭示了这种自然界最基

什么是调节亚基?

中文名称调节亚基英文名称regulatory subunit定  义调节酶中没有催化活性的亚基,但其通过与效应物结合、改变构象,进而影响催化亚基的活性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)

蛋白质亚基

在结构生物学,一个蛋白质亚基是一个单一的蛋白质分子,其组装(或“ coassembles ”)与其他蛋白质分子以形成蛋白复合物。一些天然存在的蛋白质具有相对较少的亚基,因此被描述为寡聚体,例如血红蛋白或DNA聚合酶。其他的可能由非常多的亚基组成,因此被描述为多聚体,例蛋白质亚基如微管和其他细胞骨架蛋

细菌细胞的制备实验实验——细胞抽提物的制备

实验材料细胞试剂、试剂盒弗氏破碎缓冲液匀浆缓冲液仪器、耗材弗氏破碎器实验步骤1. 将 5~10 g 新鲜或冻存的细胞沉淀物垂悬于弗氏破碎缓冲液中或者适当的匀浆缓冲液中。通常 4L 的大肠杆菌培养物可以获得大约 7.5 g 的细胞沉淀。2. 悬液中加入无 RNase 的 DNase 至终浓度为 2 μ

什么是催化亚基?

中文名称催化亚基英文名称catalytic subunit定  义在别构酶分子中,能与底物结合并起催化作用的亚基,具有酶促活性,但不与效应物结合。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)

亚基的结构特点和功能

亚基(subunit)是生物学术语,指有些蛋白质分子含有两条或多条多肽链,每一条多肽链都有完整的三级结构。亚基与亚基之间呈特定的三维空间排布,并以非共价键连接,它是具有四级结构的蛋白质中最小的共价单位。亚基之间的结合力主要是疏水作用,其次是离子键、氢键和范德华力。

上海生科院揭示端粒酶蛋白亚基与RNA亚基的相互作用

  国际学术期刊Nature Structural and Molecular Biology于5月4日在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所/国家蛋白质科学中心·上海(筹)雷鸣研究组的最新研究成果Structural basis for protein-RNA recog

亚基交换层析的原理和应用

中文名称亚基交换层析英文名称subunit-exchange chromatography定  义系将蛋白质的亚基共价连接在层析基质上的一种亲和层析技术。研究与该蛋白其他亚基的相互作用,也可用以纯化与之结合的蛋白质或DNA等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

血浆因子ⅩⅢ亚基抗原测定的原理

原理:凝血因子ⅩⅢ由两个亚基α和β构成。检测方法为免疫火箭电泳法:在含有FⅩⅢα亚基和β亚基抗血清的琼脂凝胶板中,加入受检血浆(抗原),在电场作用下,出现抗原-抗体反应形成的火箭样沉淀峰,此峰的高度与受检血浆中FⅩⅢ亚基的浓度成正比。根据沉淀峰的高度,从标准曲线中计算出FⅩⅢα:Ag和FⅩⅢβ:Ag

核糖体的分类

细菌核糖体细菌的核糖体70S核糖体由30S的小亚基和50S的大亚基组成。30S小亚基含有16S RNA(1540个核苷酸)和21种核糖体蛋白质;大亚基由5S RNA(120个核苷酸)、23S RNA(2900个核苷酸)及31个核糖体蛋白组成 。真核生物核糖体真核生物的核糖体80S 核糖体定位于其胞质

核糖体的分类

  细菌核糖体  细菌的核糖体70S核糖体由30S的小亚基和50S的大亚基组成。30S小亚基含有16S RNA(1540个核苷酸)和21种核糖体蛋白质;大亚基由5S RNA(120个核苷酸)、23S RNA(2900个核苷酸)及31个核糖体蛋白组成[5]。  真核生物核糖体  真核生物的核糖体80S

核糖体的分类

  细菌核糖体  细菌的核糖体70S核糖体由30S的小亚基和50S的大亚基组成。30S小亚基含有16S RNA(1540个核苷酸)和21种核糖体蛋白质;大亚基由5S RNA(120个核苷酸)、23S RNA(2900个核苷酸)及31个核糖体蛋白组成[5]。  真核生物核糖体  真核生物的核糖体80S

核糖体的分类

细菌核糖体细菌的核糖体70S核糖体由30S的小亚基和50S的大亚基组成。30S小亚基含有16S RNA(1540个核苷酸)和21种核糖体蛋白质;大亚基由5S RNA(120个核苷酸)、23S RNA(2900个核苷酸)及31个核糖体蛋白组成 。真核生物核糖体真核生物的核糖体80S 核糖体定位于其胞质

关于核糖体的分类介绍

  细菌核糖体  细菌的核糖体70S核糖体由30S的小亚基和50S的大亚基组成。30S小亚基含有16S RNA(1540个核苷酸)和21种核糖体蛋白质;大亚基由5S RNA(120个核苷酸)、23S RNA(2900个核苷酸)及31个核糖体蛋白组成[5]。  真核生物核糖体  真核生物的核糖体80S

核糖体的分类

  细菌核糖体  细菌的核糖体70S核糖体由30S的小亚基和50S的大亚基组成。30S小亚基含有16S RNA(1540个核苷酸)和21种核糖体蛋白质;大亚基由5S RNA(120个核苷酸)、23S RNA(2900个核苷酸)及31个核糖体蛋白组成[5]。  真核生物核糖体  真核生物的核糖体80S

核糖体的分类介绍

细菌核糖体细菌的核糖体70S核糖体由30S的小亚基和50S的大亚基组成。30S小亚基含有16S RNA(1540个核苷酸)和21种核糖体蛋白质;大亚基由5S RNA(120个核苷酸)、23S RNA(2900个核苷酸)及31个核糖体蛋白组成 。真核生物核糖体真核生物的核糖体80S 核糖体定位于其胞质

关于颗粒状细胞器—核糖体的分类介绍

  1、核糖体的分类— 细菌核糖体  细菌的核糖体70S核糖体由30S的小亚基和50S的大亚基组成。30S小亚基含有16S RNA(1540个核苷酸)和21种核糖体蛋白质;大亚基由5S RNA(120个核苷酸)、23S RNA(2900个核苷酸)及31个核糖体蛋白组成 [6]。  2、核糖体的分类—

细胞器中核糖体的介绍

  简介  核糖体是无膜结构,分为附着核糖体和游离核糖体,将氨基酸合成蛋白质是由rRNA和核糖核蛋白构成的微小颗粒,是合成蛋白质的场所,所有细胞都含有核糖体。  核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒,主要由RNA(rRNA)和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体

分子生物学课程教学讲义(三)

第三讲 蛋白质合成一.基因与基因表达的一般概念基因作为唯一能够自主复制、永久存在的单位,其生理学功能以蛋白质形式得到表达。DNA序列是遗传信息的贮存者,它通过自主复制得到永存,并通过转录生成mRNA,翻译生成蛋白质的过程控制所有生命现象。编码链(coding strand)又称sense stran