免疫组织化学法实验——单层生长细胞的免疫荧光标记
实验材料在3〜5 cm培养皿上生长的单层细胞（培养皿越小所需的抗体就越少 但培养皿应适合显微镜下观察）试剂、试剂盒VPBS40℃2% (m V)高聚甲醛（PFA)固定液 4℃ 用于细胞表面抗原固定100%甲醇 -10〜-20℃ (置于冰箱的结冻室冷却较为理想）；或含0.1% (V V) Triton×-100的2% PFA固定液 4℃用于细胞质抗原固定第一抗体 约5〜10μg mL第二抗体：抗特定种属来源的第一抗体的抗体荧光染料结合物仪器、耗材培养皿实验步骤1) 细胞置于冰上冷却，吸去培养液并以4℃的PBS洗涤，吸去PBS。2) 如欲研究细胞表面抗原，则以2% PFA于冰上固定30 min。如研究细胞质抗原，则 可用含0.1% Triton×-100的2% PFA于冰上固定30 min,或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室（-10〜-20℃)固定15 min。两种固定细胞质抗原的方法均可获满意结果。然而，用高聚甲醛/Triton×......阅读全文
细胞增殖生长方面实验_细胞分裂指数法
实验方法原理细胞分指数是指被测细胞群每1000 个细胞中的分裂细胞数（分裂细胞/1000），用以表示细胞增殖旺盛程度。因此在检测中需观察和记录群体中1000 个细胞中的细胞分裂相数。细胞分裂是细胞增殖的方式，能比较确切地反映细胞增殖度。细胞分裂在培养的活细胞中也可直接观察到，因细胞分裂是动态变化过程
细胞免疫荧光染色实验
实验原理利用抗原抗体反应，鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后，用特异性抗体（一抗）识别目的蛋白，再用一抗的抗体（二抗）识别一抗，二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团，通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec
细胞免疫荧光染色实验
实验原理利用抗原抗体反应，鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后，用特异性抗体（一抗）识别目的蛋白，再用一抗的抗体（二抗）识别一抗，二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团，通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec
细胞免疫荧光实验步骤
细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导，细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合，原理就是利用抗原-抗体反应之后，采用荧光标记，标记完成后，显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少，从而做出一个定位研究，也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导，细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速
32－P－标记裂解培养细胞实验——SDS煮沸法裂解细胞
实验材料待标记的培养细胞固相化金黄色葡萄球菌（可选）试剂、试剂盒37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)SDS裂解缓冲液RIPA 校正液免疫沉淀洗液仪器、耗材橡皮细胞刮子Sorvall 冷冻离心机(或其他)树脂玻
单层培养细胞更换培养液实验
实验方法原理以肉眼和倒置显微镜观察培养物，若有指征，如PH降低，则去除旧培养基加如新鲜培养基，再重新放入温箱培养。实验步骤材料无菌培养的细胞：A549细胞，以2×10^4ml接种到25cm2培养瓶后4天……4瓶生长培养液……………………………………………………100ml例如：Eagle1×MEM含H
单层培养细胞更换培养液实验
实验方法原理以肉眼和倒置显微镜观察培养物，若有指征，如PH降低，则去除旧培养基加如新鲜培养基，再重新放入温箱培养。实验步骤材料无菌培养的细胞：A549细胞，以2×10^4ml接种到25cm2培养瓶后4天……4瓶生长培养液……………………………………………………100ml例如：Eagle1×MEM含H
亲和免疫组织化学实验——LSAB－法
实验方法原理LSAB 法或称 S-P 法、SABC 法，它是采用生物素标记的第二抗体与结合有 HRP 或 AKP 酶的链霉亲和素（streptavidin）连接来测定细胞及组织中的抗原。链霉亲和素是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质，相对分子质量 60000，不含糖链，等电点 pI 为 6.0～6.5
亲和免疫组织化学实验——ABC－法
实验方法原理ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法，是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的，其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记，生物素标记的第二抗体与 ABC 复合物
亲和免疫组织化学实验——－CSA法
实验方法原理催化信号放大系统（catalyzed signal amplification system，CSA），也称酿胺信号放大（tyramine signal amplification system，TSA）或称 CARD（catalyzed repoter deposition）。该方法的
免疫组化的相关分类介绍
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。 这些常用免疫组织化学方法的原理如下： 1. 免疫荧光细胞化学技术 将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的
免疫组化的分类
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。 这些常用免疫组织化学方法的原理如下： 1. 免疫荧光细胞化学技术 将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的
活细胞间接免疫荧光法
一．实验器材：1． 器材：40孔塑料板、40孔板离心机、微量加样器、振荡器、盖玻片、荧光显微镜等2． 试剂：单抗隆抗体（单抗）、荧光标记抗鼠免疫球蛋白、PBS（pH7.2-7.4）、甘油、叠氮钠（NaN3）等二．方法（微量法）1． 将分离好的单个核细胞用PBS洗2次，1000rpm每次10分钟
标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞）基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞）SDS煮沸法裂解细胞实验方法原理实验材料待标记的培养细胞 试剂、试剂盒37℃标记培养液
光镜下双/多重免疫标记实验——免疫荧光双重标记TRITCFITC
双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理，在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物，或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位标记两种或两种以上抗原-抗体复合物，达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分（定性、定位、定撤），分析不同抗原成分相互间功能的增消关系，操作遵循的原则与要求同单
免疫荧光标记技术
．原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法：将标记
细胞生长曲线实验
实验方法原理 细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为
细胞生长曲线实验
细胞生长曲线可应用于：（1）测定细胞绝对生长数；（2）判定细胞活力。实验方法原理细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲
细胞生长曲线实验
实验方法原理 细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。只有具备自身稳定生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中，生长曲线的测定是最为基本的指标。细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。实验材料 细胞试剂、试剂盒 D-Hanks液牛血清R
细胞生长曲线实验
实验方法原理 细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为
小鼠脑片免疫组织化学（ABC法）实验
实验方法原理 通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位，还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强。实验材料 冷冻切片试剂、试剂盒 一
亲和免疫组织化学实验——改进－CSA法
实验方法原理已有的研究结果证实，CSA 法较 LSAB 法敏感 500～1000 倍，较 EnVision 法敏感 20～100 倍。其对细胞周期素等核内抗原的定位，有独特的优点，定位准确性、敏感性、稳定性要较标准的 CSA 法好，其敏感性和穿透性要好于 EnVision 法。最近，Hasui K
单层细胞的传代
实验方法原理去除培养基，加人胰蛋白酶短暂作用，孵育，以培养基分散细胞，计数，稀释并再接种。实验材料A549细胞 WI-38
单层细胞的传代
实验方法原理去除培养基，加人胰蛋白酶短暂作用，孵育，以培养基分散细胞，计数，稀释并再接种。实验材料A549细胞WI-38MRC-5胰蛋白酶D-PBS试剂、试剂盒70%乙醇喷壶仪器、耗材生长培养基吸管离心管培养瓶移液器吸耳球吸水纸巾吸管桶抗乙醇记号笔血细胞计数板实验步骤1. 准备超净工作台，将试剂及材
单层细胞的传代
实验方法原理 去除培养基，加人胰蛋白酶短暂作用，孵育，以培养基分散细胞，计数，稀释并再接种。 实验材料 A549细胞 WI-38
单层细胞的传代
实验方法原理 去除培养基，加人胰蛋白酶短暂作用，孵育，以培养基分散细胞，计数，稀释并再接种。实验材料 A549细胞WI-38MRC-5胰蛋白酶D-PBS试剂、试剂盒 70%乙醇喷壶仪器、耗材 生长培养基吸管离心管培养瓶移液器吸耳球吸水纸巾吸管桶抗乙醇记号笔血细胞计数板实验步骤 1. 准备超净工作台，
亚细胞定位的免疫荧光法介绍
1、直接法 将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。 2、间接法 如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应
免疫荧光实验方法1
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术
免疫组织化学技术简介
免疫组织化学技术（immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(（多肽和蛋白质）
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗...2
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗体的方法 2P3（2）Chadwick氏法 试剂和材料：抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、0.01 mol/L pH8.0磷酸盐缓冲盐水、1%硫柳汞、离心机及离心管、三角烧瓶(25 ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500 ml