小鼠脑片免疫组织化学(ABC法)实验
实验方法原理 通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位,还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强。实验材料 冷冻切片试剂、试剂盒 一抗;二抗;三抗(生物素标记的辣根过氧化物酶卵白素);PBS缓冲液;多聚甲醛;DAB仪器、耗材 免疫湿盒;滴管;剪刀;进口膜(parafilm);37度培养箱;移液枪及枪头;酶标笔(PAP);光学显微镜实验步骤 1. 将实验用试剂从4度冰箱取出,自然平衡至室温; 2. 将脑片从-20/-80度冰箱中取出,自然平衡至室温。 3. 用酶标笔在脑片周围画圈,防止液体在玻片上溢流。 4. 4%多聚甲醛固定30 min。 5. 0.01M PBS洗......阅读全文
小鼠脑片免疫组织化学(ABC法)实验
实验方法原理 通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位,还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强。实验材料 冷冻切片试剂、试剂盒 一
小鼠脑片免疫组织化学(ABC法)实验——免疫组化法
实验方法原理通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位,还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强。实验材料冷冻切片试剂、试剂盒一抗;二
亲和免疫组织化学实验——ABC-法
实验方法原理ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法,是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的,其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记,生物素标记的第二抗体与 ABC 复合物
亲和免疫组织化学实验——LSAB-法
实验方法原理LSAB 法或称 S-P 法、SABC 法,它是采用生物素标记的第二抗体与结合有 HRP 或 AKP 酶的链霉亲和素(streptavidin)连接来测定细胞及组织中的抗原。链霉亲和素是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质,相对分子质量 60000,不含糖链,等电点 pI 为 6.0~6.5
亲和免疫组织化学实验——-CSA法
实验方法原理催化信号放大系统(catalyzed signal amplification system,CSA),也称酿胺信号放大(tyramine signal amplification system,TSA)或称 CARD(catalyzed repoter deposition)。该方法的
免疫组化ABC法步骤
1、4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片,贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后;2、加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80ml+0.01MKPBS 100ml+30%过氧化氢)30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,0.01MPBS清洗5mi
亲和免疫组织化学实验——改进-CSA法
实验方法原理已有的研究结果证实,CSA 法较 LSAB 法敏感 500~1000 倍,较 EnVision 法敏感 20~100 倍。其对细胞周期素等核内抗原的定位,有独特的优点,定位准确性、敏感性、稳定性要较标准的 CSA 法好,其敏感性和穿透性要好于 EnVision 法。最近,Hasui K
免疫组化ABC法操作流程
1、4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)过夜,蜡块制作,切片,贴片。0.01M PBS清洗5min×3次;2、脱蜡、水化:用二甲苯两次10min,用梯度乙醇由低浓度到高浓度进行水化;3、加入0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80ml+0.01M PBS 100ml+30%过氧化氢)
蛋白质印迹法速成知识ABC
蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。 蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔
脑片膜片钳实验方法(五)
(2) 自发性突触反应的分析 突触反应的检测 目前有三种方法判断自发性突触反应(Hwang,1999)。第一、峰值超过即定阈值,该方法受基线波动的影响较大,这可以通过基线加以弥补;第二、峰值相对于基线的变化量超过阈值,它受高频噪声的干扰较大,而且,很难设定一个合适的阈值,为克服这些不足,可以
脑片膜片钳实验方法(四)
5、突触反应的记录现在许多实验室都开始应用膜片钳技术记录培养神经元间、组织片中和异体移植组织中的突触传递。与尖电极记录相比,它具有明显的优势。如,记录的成功率较高,较高的信噪比,能较准确地钳制胞电位等。膜片钳甚至可以应用于在位突触活动的记录(Covey, 1996)。记录自发突触后反应 自发的
脑片膜片钳实验方法(三)
4、突触反应的判断及其波幅稳定性的评价突触信号的判断 突触信号样的假象波有三个来源。第一、邻近纤维的活动使静止细胞产生电压波动;第二、如果恒流刺激强度过大,电流就可被注入突触后神经元,使其产生失活时间类似EPSP或EPSC的信号,其信号幅度随刺激强度的变化而变化;第三、直接刺激突触后神经元诱导
脑片膜片钳实验方法(二)
二、海马脑片的膜片钳记录1、将刺激电极放置在含突触前纤维脑片区域附近在突触传递的研究中,应该同时记录突触前和突触后神经元的电信号,虽然,并不是所有突触前神经元胞体的动作电位均可传导至突触 (Vincent, 1996)。由于在突触前和突触后两个神经元上同时做膜片钳记录较困难,因此,需要用其它的方
脑片膜片钳实验方法(一)
1966年,Yamamoto和McIlwain首次在脑片上记录了电生理活动(1966a, b),证实了脑组织在体外也能存活,并保持很好的活性状态。此后,该方法在生理学研究中的应用越来越广泛,并为中枢神经系统生理和药理学领域突飞猛进的发展奠定了基础。1989年,Blanton将脑片电生理记录与细胞
动物血液采集实验——小鼠摘除眼球采血法
实验材料小鼠仪器、耗材小镊子灭菌小试管实验步骤1. 抓取小鼠使眼球突出同「小鼠眼眶后血管丛取血法」。2. 用一小镊子将突出的眼球摘除。3. 立刻将眼眶向下,使血液滴入小试管内。4. 用颈椎脱臼法处死小鼠:左手拉住鼠尾,使小鼠横爬在搪瓷盘上,右手用一镊子夹住鼠颈向右一拉。此法比「小鼠眼眶后血管丛取血法
临床输血ABC
输血作为一种成熟的医疗手段,在临床上发挥了极其有效甚至关键的作用。许多临床实践证明,对于某些疾病,输血已经成为治病救人的必要选择。但许多患者对血液和临床输血存在着种种疑虑和误解,所以有必要做一些澄清和讲解。 A.亲属间输血并不安全。有人认为病人输用亲属的血液最安全,这种说法是不对的。从某种
免疫组织化学法实验
实验方法原理 实验材料 在3〜5 cm培养皿上生长的单层细胞(培养皿越小所需的抗体就越少 但培养皿应适合显微镜下观察)试剂、试剂盒 VPBS 40℃2% (m V)高聚甲醛(PFA)固定液 4℃ 用于细胞表面抗原固定100%甲醇 -10〜-20℃ (置于冰箱的结冻室冷却较为理想);或含0.1
亲和免疫组织化学实验
实验方法原理 ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法,是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的,其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记,生物素标记的第二抗体与
小鼠腹腔巨噬细胞原代培养实验——腹腔取材法
小鼠腹腔巨噬细胞原代培养可应用于:(1)细胞保种;(2)分子生物学研究;(3)基因治疗研究。实验方法原理巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2-3周,多用做原代培养,难以长
小鼠胚胎干细胞培养实验——体外分化法
小鼠胚胎干细胞培养可以:(1)细胞保种;(2)用于干细胞研究;(3)用于细胞生理学、形态学等研究;(4)动物克隆。实验方法原理胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经前体细胞通过在最少量的培养基内选择(第3步),在有bFGF存在的情况下扩增(第4步)并最终分化在第5步
小鼠肝细胞原代培养实验——胰酶消化法
小鼠肝细胞原代培养可用于:(1)用于细胞保种;(2)用于分子生物学研究;(3)用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。 实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS
小鼠免疫实验
实验方法原理 实验材料 任意品系小鼠(6~8 周)试剂、试剂盒 PBS完全和不完全弗氏佐剂抗原仪器、耗材 22-G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤 1. 准备等体积 PBS 含 25~100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液(200~40
关于细胞组织化学染色的检查过程介绍
1、检查过程 PAP法抗原、抗体反应及酶标原理与APAAP法完全相同,都属于免疫组织化学反应,只是所标记的酶不同。PAP法酶化学反应原理与ABC-AP法完全相同,但ABC-AP法为亲合免疫组织化学反应。在染色步骤及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。 2、相关疾病 混合性厌氧菌感染,
牛黄净脑片的性状
本品为糖衣片,除去糖衣后显棕褐色;气清凉,味苦。
牛黄醒脑片的包装
包装材质:PVC片材、铝箔泡罩;包装规格:12片×2板。
牛黄醒脑片的成分
牛黄、水牛角、麝香、冰片、郁金、黄连、黄芩、栀子、雄黄、珍珠母、玳瑁、朱砂。
牛黄净脑片的成分
人工牛黄、蒲公英、黄芩、大黄、玄参、赭石、麦冬、郁金、磁石(煅)、板蓝根、雄黄、朱砂、石决明(煅)猪胆糕、地黄、栀子、甘草、金银花、黄连、珍珠、冰片、天花粉、连翘、石膏、葛根。
动物血液采集实验——小鼠眼眶后血管丛取血法
实验材料小鼠仪器、耗材毛细吸管烧杯(盛自来水用)实验步骤1. 右手拖鼠尾,左手的食指放在小鼠左耳后面,拇指放在右耳上,然后两手指抓住此两处的皮肤,并使小鼠的头向左转,而右眼朝上,此时由於颈静脉堵塞而使眼眶内血管丛充血,眼睛是突出的。2. 右手用一毛细吸管轻轻从小鼠右眼的边缘当中插入眼眶内(如图 1)
小鼠智力测试实验
实验概要用经典的水迷宫法测定小鼠的智力。 主要设备自制梯子水池加热器 实验材料 小鼠 实验步骤1. 正式训练前将动物放在终点梯子附近,让其自行爬上三次。2. 第1 天训练,训练前,让动物自行爬梯一次。将挡板置于A 位置,动物在A 点入水,放时将小鼠面向池壁。训练时间定为120秒,如果在120秒内,动
分离小鼠胚胎实验
实验方法原理 无菌条件下切除孕鼠(已知怀孕时间)子宫,分离胚胎。实验材料 DBSS试剂、试剂盒 70%乙醇仪器、耗材 培养皿尖镊子尖剪刀超净工作台本生灯实验步骤 1. 交配。将分笼的雄鼠和雌鼠合笼进行交配,雌鼠 3 天后可进入动情期,此时交配的成功率最高。这一过程可以有计划地进行,使胚胎在适宜的时间