T细胞中丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK)活性分析
实验步骤基 本 方 案 1 免疫复合物蛋白激酶测定此方法可用于测定 E R K 、 J N K 和 p38 M A P K 的活性，也可使用针对每个 M A P K组分的商品化抗体。然而，特定的抗体对各组分内特定的亚型会显示一定的特异性。材 料基本方案 2 固相蛋白激酶法检测 J N K 活性这种方法最适合于测定 J N K 活 性 ，它依赖于 J N K 与它的靶转录因子 c-J u n 的 N H 2 末端活化区结合的特异性。材 料清晰。在真空中 80°C 下利用干胶仪在 Whatman 3M M 滤纸上将其干燥 lh。9 . 确认在每一步试验中底物蛋白质的水平均相同。将凝胶曝 光 在 X 射线胶片上使其显影或者利用磷成像仪分析法，对 32P 掺 入 GST-cJun (1-79) 的量进行定量。基本方案 3 SDS-P A G E 后原位检测 J N K 蛋白激酶活性 [「胶内」（IN-G E L )激酶测定]该方案改良自......阅读全文
人－T－细胞的克隆和扩增
实验步骤基 本 方案 精编免疫学实验指南, 第章材 料用可溶性抗原诱导特异性自体 T 细胞克隆时：外周 血 单 个 核 细 胞（P B M C ; 单 元 8.1)，来自抗原致敏的个体，作为反应细胞待 测 抗 原（抗原或抗原肽）照射灭活的自体或 H L A 匹配的同种异体 P B M C ，用作抗原
选择重组蛋白表达的合适方法（二）
三、毕赤酵母酵 母 作 为 另 一 种 表 达 重 组 蛋 白 的 强 有 力 的 传 统 工 具 ，已 被 成 功 应 用 于 大 量 蛋 白 质 的表 达 。酵 母 既 具 有 大 肠 杆 菌 的 许 多 优 点 ，如 增 殖 时 间 短 、基 因 组 易 于 操 作 ，又 具 有 真
T－细－胞－克－隆－的－建－立
实验步骤基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用
活微丝蚴浓集检测
在离心管内加蒸馏水半管，加外周血10～12 滴，再加生理盐水混匀，离心（每分钟3000 rpm）沉淀3 分钟，取沉渣镜检。或取静脉血1 ml，置于盛有3.8%枸橼酸钠0.1 ml的试管中，摇匀，加水9 ml，待红细胞溶化后，再离心2 分钟，倒去上清液，加水再离心，取沉渣镜检。根据微丝蚴活动规
丝裂沙参的形态特征及生长习性
形态特征 龙胆草为多年生草本，高1-2尺。叶对生，下部叶2-3对很小，呈现鳞片状，中部和上部叶披针形，表面暗绿色，背面淡绿色，有三条明显叶脉，无叶柄。花生于枝梢或近梢的叶腋间，开蓝色筒状钟形花。果实长椭圆形稍扁，成熟后二瓣开裂，种子多数，很小。根茎短，簇生多数细长根，淡黄棕色或淡黄色。 头花
丝裂沙参的生长习性及分布范围
生长习性 该植物是一种高山植物，性喜潮湿凉爽气候，野生于山区、坡地、林绿及灌木丛中。在植物整个生长季节，温度是相当高的。北京地区引种后，一直生长良好。地势高燥与 阳光直接照射的地方和土壤过粘、贫瘠的地区不宜栽培。龙胆喜肥，在结合深耕土地时，每亩应施入充分腐熟的厩肥8000斤左右。每年4月中旬萌
蛋白质凝胶染色法实验3
糖蛋白的检测1. 通用糖蛋白检测糖 基 化 是 真 核 细 胞 中 最 常 见 的 蛋 白 质 翻 译 后 修 饰 。寡 糖 通 常 连 接 于 天 冬 酰 胺 侧 链(iV-连 接 糖 基 化 ) 或 丝 氨 酸 和 苏 氨 酸 羟 基 侧 链 (〇 连 接 糖 基 化）。凝 胶 中 蛋 白 质
小－鼠－巨－噬－细－胞－的－分－离
实验步骤基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离材料小鼠，洁 净 环 境 中 饲 养（最好置层流柜中饲养）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 盐 肉 汤（Brewerthioglycollate medium，分离炎性腹腔巨嗤细
活微丝蚴浓集检测实验
实验步骤在离心管内加蒸馏水半管，加外周血10～12 滴，再加生理盐水混匀，离心（每分钟3000 rpm）沉淀3 分钟，取沉渣镜检。或取静脉血1 ml，置于盛有3.8%枸橼酸钠0.1 ml的试管中，摇匀，加水9 ml，待红细胞溶化后，再离心2 分钟，倒去上清液，加水再离心，取沉渣镜检。 根据微丝蚴活动
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（一）
一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中，
白假丝酵母菌的染色方法
白假丝酵母菌的染色方法如下：1、菌液准备将各种假丝酵母菌标准菌株及临床分离株分别接种沙保弱琼脂，35℃培养48h，挑取菌落，混匀2ml无菌蒸馏水中，在浊度仪上调整菌液浓度为4个麦氏单位(约8×108/m1)。2、选择适合假丝酵母菌生长繁殖的液体沙保弱培养基(100ml蒸馏水中含葡萄糖5g，蛋白胨10
B－细－胞－分－泌－抗－体－的－检－测
实验步骤基 本 方案材 料外周 血 单 个 核 细 胞（P B M C ; 单 元 8.1)RPMI- 5 和 RPMI-IO 完全培养基P W M 溶液9 6 孔 平 底 培 养 板（Costar)1 . 计 数 PBMC (附录 3A ) ， 用 RPMI-5 完全培养基调整浓度至 4 X 10
选择重组蛋白表达的合适方法
重组蛋白是研究生物学过程的重要工具。需要使用表达系统来对其进行制备。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质。作者： 伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」实验步骤一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及
选择重组蛋白表达的合适方法
实验步骤 一、引言 选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或
促[有丝]分裂原的基本概念
中文名称促[有丝]分裂原英文名称mitogen定 义刺激细胞进行有丝分裂的物质。如生长因子。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞周期与细胞分裂（二级学科）
英国农民发现“蛋中蛋”－专家称不多见
2月22日电 据外媒报道，英国一位退休的农民近日在做摊鸡蛋时，意外发现一枚奇怪的鸡蛋：敲开这枚鸡蛋的外壳，里面还有一只弹子大的小鸡蛋，这样的“蛋中蛋”可谓不多见。 68岁的约翰・菲罗斯(John Fellows)是英国多塞特郡威茅斯(Weymouth)的一位退休农民。
选择重组蛋白表达的合适方法（一）
一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或 低 量 表 达 . 缺 少 必要的翻译后 修 饰或不适当的修饰 。选 择 表
免－疫－球－蛋－白－G－(IgG)－片－段－的－水－解
一个新的抗体需要片段化的时候往往要进行摸索性的试验。选择反应时间的时候宁可保留部分抗体不被完全降解，这样可以避免蛋白酶过分裂解后导致抗体结合位点的破坏 。实验步骤木 瓜 蛋 白 酶 水 解 IgG 成 Fab 片段摸索性试验此 法 适 用 于 小 鼠（任何亚类）、大鼠、人 、山羊、绵羊、马 、鸡 、
膜蛋白的纯化实验（一）
一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
人－NK－T－细－胞－的－分－离－和－扩－增
实验步骤基本方案 1 NK T 细胞的鉴定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培养基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可选）流 式 细 胞 缓 冲 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
小－鼠－巨－噬－细－胞－的－表－型－检－测
实验步骤基 本 方 案 直 标 法 检 测 小 鼠 巨 噬 细 胞 的 表 型材料Sorvall RT 6000B 离心机I . 准 备 4 只 12m m X 75m m 试管，将试管编号为 1〜4。每 管 中 加 入 2 X IO7个细胞/ml细胞悬液 50ul。2.每管加入 3 mg/ml 阻
BrdU－检－测－丁－细－胞－和－B－细胞增殖
实验步骤基本方案材 料实验动物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液（口 服用）或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液（注射用)P B S ， p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测
实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯
人胚胎干细胞系:衍生与培养—小鼠胚胎饲养细胞的制备
实验步骤2.3 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备最广泛地用于支持 h E S 的伺养层细胞来自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎饲养细胞（MEFs) ，尽管它们可能是最原始的间叶细胞的前体细胞
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测2
四、化学发光信号4.1 信号捕捉虽然化学发光蛋白质印迹法十分常用，但是对于难于捕获的信号的捕捉却很棘手。蛋白质印迹法要用到一系列需要技巧的技术，因此许多因素都会导致无法捕捉到信号。由于变量较多 (表 33. 2)，问题印迹的问题诊断和排除就如同大海捞针一样困难。传统的方案在检测某一个蛋白质时通常都是
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验5
六、CID、ECD和 ETD的对比基于质谱的蛋白质组学分析依赖于气相中肽段在低碰撞能量下断裂, 在质量谱图中形成峰。进而通过峰图确定肽段序列，再推断出相关蛋白质。完成肽段断裂最主要的方法就是碰撞诱导解离（collision induced dissociation，C I D ) ( S w a n
大鸡蛋中有小鸡蛋专业人士：“蛋中蛋”可食用
“蛋中蛋，刚煮好的蛋剥开里面居然有个小蛋！”前日，厦门网友“两个孩子的妈”在一个本土论坛上发帖晒自己遇到的稀罕事，引来无数网友围观。短短两天时间，该贴的阅读量将近6000。大家纷纷议论：“这难道就是传说中的基因变异？” “两个孩子的妈”自发帖后就未出现，小记昨天和前天分别私信她，也没得到回应
膜蛋白的纯化实验
实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能
膜蛋白的纯化实验
实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
B－细－胞－功－能－的－增－殖－检－测－方－法
实验步骤基 本 方 案 抗 I g M 与 L P S 刺激的 B 细胞增殖材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)纯化的静息 B 细 胞（单 元 2. 5)，采 用 Percoll 梯度离心制备V D M E M -10 完全培养基山羊抗 IgM (JacksonImmunoresearch) 或