内毒素测定实验——凝胶法

实验方法原理鲎是一种海洋节肢动物,其血液中的有核变形细胞含有凝固酶原和可凝固蛋白。将这些变形细胞冻融裂解后制成鲎变形细胞溶解物(limulus amebocyte lysate,LAL),此溶解物若与待检标本中的内毒素相遇,内毒素激活 LAL 的凝固酶原成为凝固酶,作用于可凝固蛋白,使其凝聚成凝胶状态,鲎试验是目前检测内毒素最敏感的方法之一,比家兔热原试验敏感 10~100 倍,可测出 0.01~1 ng/ml 的微量内毒素。鲎试验在临床上用于革兰氏阴性菌感染引起的内毒素血症、革兰氏阴性细菌性脑膜炎的早期诊断,以及用于药剂、生物制品中的热原检査,是一种快速、简便和离度灵敏的方法。鲎试验主要有三种方法:凝胶法、沉淀蛋白法和产色底物法。后二种方法是从凝胶法改进而来,其灵敏度比凝胶法高 5~10 倍以上,可定量测定内毒素的含量,但操作较繁琐。下面介绍常用的方法——凝胶法。实验材料待检样品试剂、试剂盒鲎试剂标准内毒素无热原的无菌蒸馏水仪......阅读全文

内毒素测定实验——凝胶法

实验方法原理鲎是一种海洋节肢动物,其血液中的有核变形细胞含有凝固酶原和可凝固蛋白。将这些变形细胞冻融裂解后制成鲎变形细胞溶解物(limulus amebocyte lysate,LAL),此溶解物若与待检标本中的内毒素相遇,内毒素激活 LAL 的凝固酶原成为凝固酶,作用于可凝固蛋白,使其凝聚成凝胶状

内毒素测定实验

实验方法原理 鲎是一种海洋节肢动物,其血液中的有核变形细胞含有凝固酶原和可凝固蛋白。将这些变形细胞冻融裂解后制成鲎变形细胞溶解物(limulus amebocyte lysate,LAL),此溶解物若与待检标本中的内毒素相遇,内毒素激活 LAL 的凝固酶原成为凝固酶,作用于可凝固蛋白,使其凝

凝胶法鲎试剂测内毒素方法

细菌内毒素检查法又称鲎试验法,它是一种定性或定量检测微量细菌内毒素的分析方法,由美国学者 Levin 和 Bang于 1964 年发现,并在 1968年正式建立的。该法具有灵敏度高、特异性强和操作简便快捷等特点,在制药行业、微生物学和临床检验等领域都具有广泛的应用。鲎制剂作为一种生物制剂于1973年

细菌内毒素检测实验_鲎试验法

实验方法原理鲎是一种海洋节肢动物,血液中含有一种变形细胞,此细胞的裂解物可与微量细菌内毒素起凝胶反应,即细胞裂解物中的一种酶被内毒素激活,使细胞裂解物中蛋白质形成凝胶。鲎试验具有快速、简便、灵敏等优点。  实验材料鲎试剂试剂、试剂盒生理盐水无菌水内毒素仪器、耗材安瓶习惯水浴箱实验步骤一、材料 1.

Pyrosate凝胶法内毒素快速检测试剂盒操作说明

【产品说明】Pyrosate凝胶法内毒素快速检测试剂盒是目前世界上唯一的凝胶法内毒素快速检测试剂,是当今最先进最快速的凝胶法鲎试剂,在LAL凝胶法检测中具有着其它方法无可替代的优点,它不需要专业培训或额外的检测仪器,只需按照说明书中的步骤操作,即可在短时间(30分钟)之内得到准确结果,尤其适用于对水

吸附法纯化病毒实验_​凝胶吸附法

实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒凝胶材料仪器、耗材烧杯实验步骤磷酸钙凝胶:这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶,由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物,用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮,置千 4℃ 4~5小时使之充分沉淀后应用

凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量实验_凝胶过滤层析法

凝胶过滤也称排阻层析、分子筛层析和凝胶层析。本实验目的是了解凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量的基本原理,巩固柱层析的操作方法。实验方法原理凝胶过滤( Gel Filt ration ) 也称排阻层析( Exclusion Chromatography)、分子筛层析(Molecular Sieve Ch

细菌内毒素检测方法动态浊度法和凝胶法结果不一致

1.动态浊度法比凝胶法灵敏很多,比如某个样品中内毒素限值为0.40EU,使用动态浊度法检测结果在0.35EU/ml左右,而使用凝胶法,当使用0.5EU的鲎试剂时,有可能检测结果会呈阳性!2.动态浊度法和凝胶法实验过程中使用的内毒素标准品存在差别,由于判断实验结果的质控品的不一样,会使实验结果较大的误

细菌内毒素检测方法动态浊度法和凝胶法结果不一致

您好,同一样品采用动态浊度法检测和凝胶法检测内毒素结果相差很多的原因主要有:1.动态浊度法比凝胶法灵敏很多,比如某个样品中内毒素限值为0.40EU,使用动态浊度法检测结果在0.35EU/ml左右,而使用凝胶法,当使用0.5EU的鲎试剂时,有可能检测结果会呈阳性!2.动态浊度法和凝胶法实验过程中使用的

细菌内毒素检测方法动态浊度法和凝胶法结果不一致

1.动态浊度法比凝胶法灵敏很多,比如某个样品中内毒素限值为0.40EU,使用动态浊度法检测结果在0.35EU/ml左右,而使用凝胶法,当使用0.5EU的鲎试剂时,有可能检测结果会呈阳性!2.动态浊度法和凝胶法实验过程中使用的内毒素标准品存在差别,由于判断实验结果的质控品的不一样,会使实验结果较大的误

DNA印迹法实验凝胶处理

  1)凝胶照相后切去包括标记带在内的多余部分。将凝胶的一角(·点第一个样品的一侧)切去作为标记 以便于定位。精确测量凝胶大小然后将凝胶放入一个方形瓷盘中 。  2)变性:将凝胶浸泡于适量的碱变性液中,室温下变性30分钟。期间更换变性液一次,不断地轻轻摇动。如果先进行酸变性酸变性,则凝胶中溴酚兰的颜

凝胶色谱法实验技术—凝胶的选择介绍

  凝胶色谱法实验技术根据所需凝胶体积,估计所需干胶的量。 一般葡聚糖凝胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的2倍,例如Sephadex G-20的吸水量为20,1 克Sephadex G─200吸水后形成的凝胶体积约40ml。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度细胞分离效果好,但阻力大,流速慢。一般实验

凝胶色谱法实验技术—凝胶的制备介绍

  凝胶色谱法实验技术—凝胶的制备:商品凝胶是干燥的颗粒使用前需直接在欲使用的洗脱液中膨胀。为了加速膨胀,可用加热法,即在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温至近沸,这样可大大中速膨胀,通常在1-2小时内即可完成。特别是在使用软胶时, 自然膨胀需24小时至数天,而用加热法在几小时内就可完成。这种方法不但节约时间

凝胶色谱法的实验技术

层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,

聚凝胶法交叉配血实验

实验方法原理红细胞表面带有大量的负电荷,以避免其产生自发性凝集。当红细胞悬浮在电解质时,阳离子会被红细胞的负电荷所吸引,此的红细胞刚被扩散的双层离子云所围绕,而形成Zeta电位,Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。实验材料血清仪器、耗材试管实验步骤一、交叉配血试验1、取试管2支,标主次侧.主侧管加

细菌内毒素检查法(鲎试剂法)

细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法.细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。细菌内毒素检查包括凝胶法和光度测定法两种方法,前者利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素,后者包括浊度法和显色基质

细菌内毒素检查法标准内毒素的稀释的要求

  细菌内毒素检查法在药品生产和检测过程中具有重要意义。根据《美国药典》规定,应使用国家参考标准内毒素(RSE),复溶后应旋涡振荡不少于20分钟,并在冰箱中保存不超过14天。再次使用前需要强烈旋涡振荡不少于5分钟,每一步稀释前被稀释液也要旋涡振荡不少于1分钟,不能使用保存的稀释液。此外,美国鲎试剂厂

内毒素测定的测试原理

根据检测原理,终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度的方法。终点显色法和动态显色法都是属于

细菌内毒素检查法简介

  细菌内毒素检查法是判断供试品中细菌内毒素是否符合规定。 内毒素(Endotoxin)即革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖,其毒性成分为类脂A。菌体死亡崩解后释放出来。细菌内毒素检查包括两种方法,即凝胶法和光度测定法,后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时,可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争

细菌内毒素测定仪的细菌内毒素的检测相关

  细菌内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁成分,当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。因此,细菌内毒素广泛存在于自然界中。如自来水中含内毒素的量为1至100EU/ml。当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害,但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。内毒素小量入血后被肝脏枯否细胞灭活,不造成机体

细菌内毒素中什么是定量法

目前,国内外广泛应用且检测技术比较成熟的细菌内毒素定量检查法主要有以下四种。1. 1 凝胶法 是目前最常用的细菌内毒素检查法。即在10mm×75mm的小试管内,加入待检样品和鲎试剂各0. 1ml混合, 37℃、60 min保温反应后, 180°倒转,根据凝胶形成的情况(凝胶是否坚实)作为判定指标的一

超纯水的内毒素定量测定

革兰氏阴性菌,如大肠杆菌(E. coli)和假单胞菌(Pseudomonads)等的细胞壁成分被认为是内毒素。它们具有一个亲水性多糖和亲脂性脂质结构,有别于它们所源自的细菌,具有高度的热稳定性和pH稳定性。内毒素属于致热源,如果它们与粘膜发生接触或者一旦它们进入血液循环,便会导致发热(参考

过载染色-SDS-凝胶扫描法估测纯度实验

            试剂、试剂盒 考马斯亮蓝(CBB) 染色液 脱色液 实验步骤 试剂考马斯亮蓝(CBB) 染色液脱色液(配方,见“试剂的

蛋白质的分离实验——凝胶层析法

蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法。应用于(1) 化学物质的分离、提纯、浓缩;(2)染料、染料中间体的浓缩及脱盐(3)超细粉体生产过程中的产品回收;(4)生产废水中有用物质的提纯、回用;(5)海洋生物提取物的浓缩、提纯(6)氨基酸、蛋白质的浓缩、提纯。

过载染色-SDS-凝胶扫描法估测纯度实验

由于蛋白质在 SDS 凝胶上可得到高分辨分离,并可用考马斯亮蓝(CBB) 给予灵敏的染色,故按本单元实验 4 所述的方法,对经 SDS 凝胶分离的蛋白质制备物进行染色和脱色后扫描,可得到蛋白质样品的纯度。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。试剂、试剂盒考马斯亮蓝(CBB) 染色液脱色

过载染色-SDS-凝胶扫描法估测纯度实验

试剂、试剂盒 考马斯亮蓝(CBB) 染色液脱色液实验步骤 试剂考马斯亮蓝(CBB) 染色液脱色液(配方,见“试剂的配制”,PP.184~189)操作程序1) 按实验 4(pp.159~160) 所述,取一较纯蛋白质的若干稀释的样品(约含 1、3、10 和 30ug 的总蛋白), 于小型 SDS-聚丙

血糖测定实验——酶法

实验方法原理血糖中β-D葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下,氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶催化下,氧化氧的受体——邻联甲苯胺产生有色化合物。在有足够的葡萄糖氧化酶和过氧化物酶存在下,形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比,并在625 nm处有最大吸收。实验材料葡萄糖试剂、试剂盒邻联甲苯胺

与您分享内毒素挑战实验

  对生物过滤器的挑战实验是向带正电的过滤器进水中不断注入高含量的内毒素,然后采用鲎变形细胞溶解物试验(动态浊度法)测量产水中的内毒素浓度。   大多数的内毒素挑战实验均要使用净化的LPS。 ELGA LabWater的科研团队从纯水中已有的细菌中生产出自己的LPS。 这是为了模仿逼真的挑战实验环

内毒素的检测方法和原理

本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素 以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法细菌内毒素检查包括浊度法和显色基质法 供试品检测时 可使用其中任何一种方法进行试验 当测定结果有争议的时候 除另有规定外 以凝胶法结果为准本实验操作过程硬防止微生物和内毒素的污染凝胶法鲎试

内毒素的检测方法和原理

本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素 以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法细菌内毒素检查包括浊度法和显色基质法 供试品检测时 可使用其中任何一种方法进行试验 当测定结果有争议的时候 除另有规定外 以凝胶法结果为准本实验操作过程硬防止微生物和内毒素的污染凝胶法鲎试