质粒DNA高频转化大肠杆菌实验——高频法
实验材料感受态细胞试剂、试剂盒质粒DNA抗生素仪器、耗材Ep管水浴锅LB平板实验步骤1、取新制备的一管感受态细胞。 2、取0．03 ml感受态细胞转和4 ng质粒DNA混匀，置冰浴30min 3、将 Ep管置于42 ℃水浴中热冲击2分钟，立即置于冰上1分钟。 4、在 Ep管中加70 ul LB培养基混匀，37 ℃培养30min 5、涂在含适当浓度抗生素的LB平板上。 6、37 ℃培养过夜，长出的菌斑既为阳性克隆。展开......阅读全文
质粒DNA高频转化大肠杆菌实验——高频法
实验材料感受态细胞试剂、试剂盒质粒DNA抗生素仪器、耗材Ep管水浴锅LB平板实验步骤1、取新制备的一管感受态细胞。 2、取0．03 ml感受态细胞转和4 ng质粒DNA混匀，置冰浴30min 3、将 Ep管置于42 ℃水浴中热冲击2分钟，立即置于冰上1分钟。 4、在 Ep管中加70 ul LB培养基
质粒DNA高频转化大肠杆菌实验
实验材料 感受态细胞试剂、试剂盒 质粒DNA抗生素仪器、耗材 Ep管水浴锅LB平板实验步骤 1、取新制备的一管感受态细胞。 2、取0．03 ml感受态细胞转和4 ng质粒DNA混匀，置冰浴30min 3、将 Ep管置于42 ℃水浴中热冲击2分钟，立即置于冰上1分钟。 4、在 Ep管中加70 ul L
外源质粒DNA转化大肠杆菌
摘要： 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒 DNA 转化 大肠杆菌 1 实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程
耐药质粒－DNA转化实验
耐药质粒 DNA转化实验 本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。 【原理】 受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒
质粒－DNA－的转化实验
实验方法原理转化活性是检测质粒生物活性的重要指标，在基因克隆技术中，转化（transformation）是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA（包括人工染色体）导入细胞的过程， 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态，用于转化的受体细胞一般
质粒－DNA－的转化实验
实验方法原理 转化活性是检测质粒生物活性的重要指标，在基因克隆技术中，转化（transformation）是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA（包括人工染色体）导入细胞的过程， 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态，用于转化的受
大肠杆菌质粒DNA的提取及转化
实验概要本实验包括大肠杆菌质粒DNA的提取，质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定，大肠秆菌感受态细胞的制备及质粒DNA高频转化大肠杆菌。实验步骤1. 大肠杆菌质粒DNA的提取碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下： 1) 接1%含质
质粒DNA导入细菌细胞实验——电转化法
实验方法原理高压电转化简单，快捷可靠，而且是目前效率最高的质粒DNA转化大肠杆菌方法。不过该方法需要电转化装置。实验材料菌落试剂、试剂盒LB甘油SOC仪器、耗材平板离心瓶聚丙烯管电阻器电转化池实验步骤1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养液，37°C温和振摇培养5 h或过夜。2. 将2.5 m
大肠杆菌质粒DNA的提取实验_煮沸法
实验材料大肠杆菌细胞试剂、试剂盒溶菌酶仪器、耗材eppendorf管卫生纸STET溶液水浴锅牙签电泳实验步骤1、将1.5 ml培养液倒入eppendorf管中,4 ℃下12000ｇ离心30秒。2、弃上清，将管倒置于卫生纸上几分钟，使液体流尽。3、将菌体沉淀悬浮于120 ml STET溶液中, 涡旋混
质粒转化大肠杆菌
该实验主要有两个用途：1．重组质粒的鉴定。当质粒的重组或其它载体重组后，通常会发生质粒的重组失败，包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选，把重组成功的质粒找出来。在目前常用的质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗性基因，一旦重组成功，质粒环化（包括自身环化），抗生素抗性基因表达，被转化的大肠杆菌便具备抗相
质粒DNA的转化(CaCl2法)
实验原理受体细胞经过一些特殊方法如化学试剂法的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子(即带有异源DNA分子的受体细
质粒DNA的转化
实验概要本实验将人Bcl-2重组质粒转化DH5α扩增菌，转化后在含Amp的培养基上进行筛选，生长的菌落即为含重组质粒的工程菌。含人Bcl-2重组质粒的DH5α菌用于质粒DNA的扩增，获得的质粒将作为限制性内切酶的酶切底物DNA。实验原理转化是将外源DNA分子导入到受体细胞，使之获得新的遗传特性的一种
质粒DNA导入细菌细胞实验——CaCl2转化法
实验材料菌落质粒DNA试剂、试剂盒CaCl2仪器、耗材培养基平板实验步骤1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中，于37°C中速摇床培养过夜（250 r/min)。2. 往一个2 L的烧瓶中加人400 ml LB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37°C摇床（250 r/min）培养至
耐药质粒DNA的转化
实验概要本实验介绍了将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。实验原理受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒带有氨基苄青霉素（Ap）和四
大肠杆菌转化实验——热击法
大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。实验方法原理质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42摄氏度短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒
质粒的转化及转化子的鉴定实验——电转化法
实验方法原理电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。实验材料外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞试剂、试剂盒X-galAmpLA培养基水抗生素仪器、耗
大肠杆菌转化实验——高效率电转化法
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LBSOC仪器、耗材电转化仪离心机分光光度计实验步骤1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养液，37℃温和振摇培养5 h 或过夜。2. 将2.5 ml 培养物加人到盛有500 ml LB培养液的2 L 烧瓶中，37℃摇匀振荡培养至OD600为0.5~0.6。 3.
高频红外碳硫分析仪的高频设计
1、高频炉输出功率为2.5千瓦，选用风冷陶瓷功率管并使其工作在降额使用状态，提高了功率输出的稳定性及元件寿命。 2、主振电容采用额定电流达一百安培的真空陶瓷电容，具有极低的介质损耗、优良的稳定性，有效提高了可靠性及功率输出的稳定性。 3、高频炉所有金属联接件采用铜表面镀银加抗氧化导电膜技术；
大肠杆菌质粒DNA的提取
一、大肠杆菌质粒DNA的提取质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法：碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下：1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。2、3
牙签法小量制备质粒DNA实验
用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒 DNA。所得的闭合环状 DNA 往往杂质太多，不能作为大多数限制酶的底物。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒 DNA。所得的闭合环状 DNA 往往杂质太多，不能作为大多数限制酶
牙签法小量制备质粒DNA实验
实验方法原理 用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒 DNA。所得的闭合环状 DNA 往往杂质太多，不能作为大多数限制酶的底物。 试剂、试剂盒
牙签法小量制备质粒DNA实验
实验方法原理 用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒 DNA。所得的闭合环状 DNA 往往杂质太多，不能作为大多数限制酶的底物。试剂、试剂盒 抗生素溴酚蓝溶液EDTA溴化乙锭NSS 溶液KCl琼脂糖凝胶仪器、耗材 LB、YT 或 SOB热循环仪木质牙签实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液(
大肠杆菌质粒DNA的提取实验_碱裂解法
实验方法原理碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离它们。在碱性pH环境，DNA变性，当恢复中性并在高盐离子浓度时，绝大多数质粒DNA可以准确复性，留在上清中；而线性染色体DNA不能准确复性，相互交联缠绕附着在细胞壁碎片上与蛋白质发生沉淀。离心后获得大量质粒的上清液，利用
大肠杆菌转化实验——CaCl2转化法
实验方法原理细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA，然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒CaCl2氨苄青霉素LB
重组质粒转化感受态大肠杆菌
实验概要 细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化(Transformation)是指重组质粒导入受体细胞的过程，使之获得新的遗传性状的一种手段。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于
高频继电器测试
继电器广泛用于各个领域，如电动汽车、智能电表、电化学等，其性能和可靠性也影响设备系统稳定，继而继电器测试验证标准越来越严格，其测试设备综合要求更高。 继电器是具有隔离功能的自动开关元件，广泛应用于遥控、遥测、通讯、自动控制、机电一体化及电力电子设备中，是最重要的控制元件之一。对于功耗超过100W和工
高频通气的机理
目前对高频通气机理的研究，文献资料多集中在HFO方面，尽管其它形式的高频通气 机理上 不可能与此完全相同，但从都是达到高频条件下小潮气量的有效通气这一共同要求来考虑， 则不难理解在HFO通报导中起作用的某因素，可能也存在于其它形式的高频通气中。本章侧 重讨论HFO的通气机理，然而有些基本的气体运
高频通气的特点
1、高频通气时气道开放、适宜采用小的无气囊的通气导管，同时呼气阻力小有利于 二氧化碳的排出。 2、通气时气道内压低(8～12cmH2O)，对回心血流的干扰小有利于心排血量的增加。 3、气道开放通气时有利降低脑压、降低胸内压，减少肺的波动，有利于肺、脑手术的精细 操作。 4、可在通气时进行气
高频通气的概述
在瑞典学者早期报告中，把这种通气方式称谓为高频率低潮气量的正压通气(HFPPV)，学者们注意到在采用HFPPV通气时对中心静脉压较低且变化小，平均为10mmHg，气道峰值压仅为8 ～12cmH2O，通气时胸内压仍为负压，动脉压、中心静脉压和肺动脉压均无明显波动，肺动脉楔嵌压变化甚小，这是在传统的
质粒的转化及转化子的鉴定实验——热激法
质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）筛选目的细胞。实验方法原理热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸