病毒免疫荧光实验_病毒染色标本的制备

实验材料待检测病毒试剂、试剂盒丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯仪器、耗材玻片实验步骤1. 培养细胞小玻片标本的制备 根据所检测病毒种类,选择敏感细胞进行培养,如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞 (BHK21 细胞)培养,森林脑炎病毒用绿猴肾细胞 (Vero 细胞)培养,登革热病毒用白纹伊蚊传代细胞 (C6/36 细胞)培养。按细胞培养方法,将其分装在有盖玻片的培养板或培养瓶中,置 37℃温箱培养成单层细胞,然后接种病毒。接种病毒量及培养时间因病毒种类而异。如乙型肝炎病毒接种的病毒滴度为约 10-5, 培养 24 h 收片;森林脑炎病毒接种的病毒滴度为 10-6 ,24 h 收片;登革热病毒接种的病毒滴度为 10-6,48 h 收片。设未接种病毒的正常细胞作对照。感染和对照标本从培养板或培养瓶中取出后用 0. 01mol/L PBS 漂洗 2 次,放滤纸上,干燥后放预冷丙酮中置- 30~-28℃冰箱中固定 30......阅读全文

病毒免疫荧光实验_病毒染色标本的制备

实验材料待检测病毒试剂、试剂盒丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯仪器、耗材玻片实验步骤1. 培养细胞小玻片标本的制备 根据所检测病毒种类,选择敏感细胞进行培养,如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞 (BHK21 细胞)培养,森林脑炎病毒用绿猴肾细胞 (Vero 细胞)培养,登革热病毒用白纹伊蚊

病毒透射电镜病毒标本制备实验——负染色技术

实验方法原理病毒研究中用磷钨酸染色后发现在黑色背景中病毒粒子如同一个亮晶晶的「空洞」。尔后用磷钨酸对飞噬菌体染色也见到同样的现象,即将这种现象称为「负染色」。负染色是一种反衬染色,即高密度物质如重金属磷钨酸、醋酸铀等在透射电镜下形成黑色的背景反衬低密度的标本如病毒为白色透亮,从而清楚地显示出被衬物的

病毒免疫荧光实验_​荧光抗体染色

实验材料细胞小玻片标本试剂、试剂盒荧光抗体实验步骤荧光抗体染色按不同反应机制,可有以下几种:1.直接法 用已知特异性病毒抗体与荧光素结合,制成荧光特异性抗体,直接与细胞或组织中相应病毒抗原结合,在荧光显微镜下即可见病毒或病毒抗原存在部位呈现特异性荧光。此法特异简便,但一种荧光抗体只能检查一种抗原,特

病毒透射电镜病毒标本制备实验3

免疫吸附法实验方法原理有时由于病毒量少,用普通悬滴法在电镜下难以发现稀少散在的病毒粒子,则可用免疫吸附电镜法。主要是利用相应的病毒抗血清来吸附病毒,用本法检测病毒,快速、灵敏、特异性强,是可靠的电镜病毒诊断技术之一,也可用于病毒快速诊断。实验材料病毒试剂、试剂盒磷钨酸仪器、耗材透射电镜实验步骤将抗病

病毒透射电镜病毒标本制备实验1

悬滴标本法实验方法原理病毒等微小颗粒标本可取其培养物经稀释或分离提纯后直接滴于附有支持膜的载网上用电镜观察。实验材料病毒试剂、试剂盒稀释液仪器、耗材透射电镜实验步骤悬液应尽量除去杂质如培养基残渣,细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等,这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱

病毒透射电镜病毒标本制备实验2

实验方法原理病毒研究中用磷钨酸染色后发现在黑色背景中病毒粒子如同一个亮晶晶的「空洞」。尔后用磷钨酸对飞噬菌体染色也见到同样的现象,即将这种现象称为「负染色」。负染色是一种反衬染色,即高密度物质如重金属磷钨酸、醋酸铀等在透射电镜下形成黑色的背景反衬低密度的标本如病毒为白色透亮,从而清楚地显示出被衬物的

病毒透射电镜病毒标本制备实验4

直接取材镜检法实验材料病毒试剂、试剂盒磷钨酸仪器、耗材透射电镜实验步骤为了进行天花、水痘、疱疹等病毒的临床快速诊断,可用毛细吸管直接刺入病人皮肤疱疹内吸取少量泡液,立即滴于有膜的铜网上,稍干后即用 1%-2% 的磷钨酸溶液进行负染,待干后立即用电镜观察。于电镜下常可于短时间内发现典型的病毒颗粒。注意

病毒透射电镜病毒标本制备实验——悬滴标本法

实验方法原理病毒等微小颗粒标本可取其培养物经稀释或分离提纯后直接滴于附有支持膜的载网上用电镜观察。实验材料病毒试剂、试剂盒稀释液仪器、耗材透射电镜实验步骤悬液应尽量除去杂质如培养基残渣,细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等,这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱,只能观察

病毒免疫荧光实验_荧光抗体的制备

实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光色素的选择 可以产生明亮荧光的染料物质,称荧光色素 (fluorochrome) 。目前常用的荧光色素有以下几种:(1) 异硫氰酸荧光素 (Fluorescein isothiocyanate, FITC): 在碱性条件下, FITC 的异硫氰酸基在水溶液

病毒透射电镜病毒标本制备

实验方法原理 病毒等微小颗粒标本可取其培养物经稀释或分离提纯后直接滴于附有支持膜的载网上用电镜观察。实验材料 病毒试剂、试剂盒 稀释液仪器、耗材 透射电镜实验步骤 悬液应尽量除去杂质如培养基残渣,细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等,这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱

病毒透射电镜病毒标本制备实验——免疫吸附法

实验方法原理有时由于病毒量少,用普通悬滴法在电镜下难以发现稀少散在的病毒粒子,则可用免疫吸附电镜法。主要是利用相应的病毒抗血清来吸附病毒,用本法检测病毒,快速、灵敏、特异性强,是可靠的电镜病毒诊断技术之一,也可用于病毒快速诊断。实验材料病毒试剂、试剂盒磷钨酸仪器、耗材透射电镜实验步骤将抗病毒血清分别

病毒免疫荧光实验

实验方法原理 实验材料 待检测病毒试剂、试剂盒 丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯仪器、耗材 玻片实验步骤 1. 培养细胞小玻片标本的制备 根据所检测病毒种类,选择敏感细胞进行培养,如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞 (BHK21 细胞)培养,森林脑炎病毒用绿猴肾细胞 (Vero 细胞)培养

病毒透射电镜病毒标本制备实验——直接取材镜检法

实验材料病毒试剂、试剂盒磷钨酸仪器、耗材透射电镜实验步骤为了进行天花、水痘、疱疹等病毒的临床快速诊断,可用毛细吸管直接刺入病人皮肤疱疹内吸取少量泡液,立即滴于有膜的铜网上,稍干后即用 1%-2% 的磷钨酸溶液进行负染,待干后立即用电镜观察。于电镜下常可于短时间内发现典型的病毒颗粒。注意事项其他此方法

病毒的分离实验_标本法

实验步骤标本的采集:病毒分离常用的标本有血液,脑脊液,粪便,直肠拭子,咽喉含漱液,咽拭子,尸检组织等。所取标本的种类视疾病性质而异。如呼吸道疾病常取咽喉洗液,咽拭子;消化道疾病取粪便,直肠拭子;神经系统疾病取脑脊液,粪便等。采取标本时应避免污染,有些标本如粪便,咽喉洗液,虽本身含有大量杂菌,但为保持

染色体CBG标本制备实验

基本方案             实验方法原理 异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的,因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近,或在染色体臂上呈现“团块”,这些染色质主要由C

染色体GTG标本制备实验

非显带染色体除可根据形态分辨部分染色体,其他多数染色体难以确认,而显带技术则可使染色体纵向长度上出现不同带纹,以辨认全部染色体。GTG即G 带,Trypsin(胰酶),Giemsa的简写。Giemsa染料是噻嗪——曙红染料,染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红(2∶1)的沉淀物。实验方法原理非显

染色体GTG标本制备实验

实验方法原理 非显带染色体除可根据形态分辨部分染色体,其他多数染色体难以确认,而显带技术则可使染色体纵向长度上出现不同带纹,以辨认全部染色体。GTG即G带,Trypsin(胰酶),Giemsa的简写。Giemsa染料是噻嗪——曙红染料,染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红(2∶1)的沉淀物。着色

染色体CBG标本制备实验

实验方法原理 异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的,因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近,或在染色体臂上呈现“团块”,这些染色质主要由C显带技术呈现,故称为C带。CBG即C带、Ba(OH)2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA,但在C带区有很强抗性,仍保留大部

染色体GTG标本制备实验

基本方案             实验方法原理 非显带染色体除可根据形态分辨部分染色体,其他多数染色体难以确认,而显带技术则可使染色体纵向长度上出现不同带纹,以辨认全部染色体。GT

染色体提前凝集标本制备实验

实验方法原理七十年代初,由于发现M期细胞内有某种促进染色体凝集因子,它无种属特异性,所以在细胞融合和染色体技术的基础上,建立了制备染色体提前凝集标本的方法。即让M期细胞与间期(I期)细胞融合,从而诱导I期细胞染色质提前浓缩成染色体。形成的这种染色体称提前凝集的染色体(PrematurelyConde

染色体提前凝集标本制备实验

基本实验实验方法原理七十年代初,由于发现M期细胞内有某种促进染色体凝集因子,它无种属特异性,所以在细胞融合和染色体技术的基础上,建立了制备染色体提前凝集标本的方法。即让M期细胞与间期(I期)细胞融合,从而诱导I期细胞染色质提前浓缩成染色体。形成的这种染色体称提前凝集的染色体(PrematurelyC

姊妹染色单体互换标本制备与分析实验

基本方案             实验方法原理 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中

姊妹染色单体互换标本制备与分析实验

基本方案             实验方法原理 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中

姊妹染色单体互换标本制备与分析实验

姐妹染色单体是由一个着丝点连着的并行的两条染色单体,是在细胞分裂的间期由同一条染色体经复制后形成的,在细胞分裂的间期、前期、中期成对存在,其大小、形态、结构及来源完全相同。实验方法原理5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有

姊妹染色单体互换标本制备与分析实验

实验方法原理 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中进行DNA复制时,BrdU可专一替代胸腺嘧啶核苷,而掺入到新复制的DNA核苷酸链中。因此只要通过两个复制周期,就可使姊妹染色单体中一条单体的DNA链中,

病毒-DNA-的提取实验——拭子标本中病毒-DNA-的提取

实验材料拭子标本试剂、试剂盒TE 缓冲液裂解液蛋白酶K仪器、耗材离心机棉签实验步骤预操作:将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中,洗下标本。若标本在 4 h 内处理,可置于室温保存,否则需 4℃保存。1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min

体外培养细胞的染色体标本制备实验

实验材料细胞实验步骤1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,离心

体外培养细胞的染色体标本制备实验

实验材料 细胞实验步骤 1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,

病毒免疫荧光实验_​荧光素标记抗体

实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光标记抗体方法有直接标记法和间接标记法两种。(1) 直接法:较为常用,具体步骤是:1) 抗体溶液的制备:用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 将待标记抗体稀释至 20mg/ml;2) 荧光素:根据待标记抗体的总量,按 0.01mg 荧光素/mg 蛋白

MVA-病毒储液制备实验

基本方案 免疫染色法滴度测定             实验方法原理 实验材料 成片 CEF 或 BHK-