报告基因实验——GUS活性的组织化学检测
实验材料组织试剂、试剂盒HGUS 缓冲液磷酸盐缓冲液乙醇溶液仪器、耗材微量滴定板或者试管实验步骤1. 将组织置于新配制的 HGUS 缓冲液中（含有 X-Gulc 及其他添加物），足以完全浸没材料，试验在微量滴定板或者试管中进行。2. 吸真空 5~10 min，然后去掉真空条件。3. 铝箔包裹，37℃ 放置 48 h。 4. 用 100 mmol/L 的磷酸盐缓冲液（pH 为 7.0）洗脱材料。5. 为了清洗材料以便观察，在 25% 的乙醇溶液中孵育 15~30 min，在 50% 的乙醇溶液中孵育 15~30 min，在 75% 的乙醇溶液中孵育 30 min。6. 最后，在 90% 的乙醇溶液中（期间更换几次）37℃ 孵育 2~4 h，或者直到所有的叶绿素去掉为止。7. 样品可以无期限地保存在 90% 的乙醇溶液中。盖紧盖子，避光室温放置，但要经常监测乙醇的含量。展开......阅读全文
MTT法细胞活性检测实验步骤
MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。MTT主要有两个用途：
细胞活性检测DNA合成增殖实验
BrdU检测法BrdU为胸腺嘧啶核苷（Thymine）的衍生物，可用于标记活细胞中新合成的DNA（细胞活性周期S期），BrdU可随着DNA复制进入子细胞，因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记，可通过抗BrdU单克隆抗体检测，借此检测细胞的增殖能力，但BrdU单克隆抗体检测过程
辨析标记基因和报告基因教程
一、标记基因和报告基因的概念 标记基因(marker gene)，是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。标记基因是选择标记基因的简称，是指其编码产物能够使转化的细胞、组织具有对抗生素等的抗性，或者使转化细胞、组织具有代谢的优越性。在培养基中加入抗生素等选择试剂的条件下，非转化的细
知识分享：教你辨析标记基因和报告基因
一、标记基因和报告基因的概念 标记基因(marker gene)，是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。标记基因是选择标记基因的简称，是指其编码产物能够使转化的细胞、组织具有对抗生素等的抗性，或者使转化细胞、组织具有代谢的优越性。在培养基中加入抗生素等选择试剂的条件
除了基因检测，还有哪些方法可以检测肿瘤抑制基因的表达或功能状态？
除了基因检测，以下方法也可用于检测肿瘤抑制基因的表达或功能状态：免疫荧光法（IF）：类似于免疫组织化学，但是在荧光显微镜下观察荧光标记的抗体与目标蛋白的结合情况，能更清晰地显示蛋白的定位和表达。酶联免疫吸附测定（ELISA）：定量检测体液（如血液、脑脊液等）中肿瘤抑制基因编码的蛋白含量。转录组分析：
转基因植物中的筛选基因
基因工程（DNA重组技术）是在离体条件下对不同生物的遗传物质（DNA）进行人为“加工”，并按照人们的意愿重新组合，以改变生物的性状和功能，然后再通过适当的载体将重组DNA转入生物体或细胞内，并使其在生物体内或细胞中表达，从而获得新的生物机能。这种利用基因工程技术获得的植物一般称为“基因工程植物”。自
双萤光素酶报告基因检测
萤光素酶报告基因系统广泛应用于真核生物基因表达和细胞生理学研究，包括受体活性、转录因子、细胞信号转导、mRNA加工和蛋白质折叠等。萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单萤光素酶报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双萤光素
基因工程中标记基因的作用
标记基因，原本是基因工程的专属名词，但是现在它已经成为一种基本的实验工具，那么标记基因的作用有哪些呢？和报告基因的差别又是什么？据基因学资料显示，标记基因是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否；在基因定位
报告基因实验——花青素表达的定量
实验材料植物组织试剂、试剂盒酸性乙醇或甲醇花青素-3-O-葡萄糖苷仪器、耗材滤膜实验步骤1. 瞬时表达研究植物组织经基因枪转化培养大约 12 h 后，转化细胞开始表现出深红色或者偶尔为深蓝色的斑点。颜色常常会向整个液泡扩散，从外表上看整个细胞都是红色的。在几天时间里，颜色将会增强，并且能在 1~2
报告基因实验——利用冷型－CCD－像机进行－LUC－的活体检测
实验材料LUC试剂、试剂盒D- 萤光素水溶液仪器、耗材液氮冷却相机实验步骤对于萤光素酶的检测来说，需要解决荧光素渗透进入活体组织这一问题 [7]。多数情况下，用荧光素溶液简单地喷洒植物就可以解决，但是一些组织，如发育后期的种子不能吸收荧光素，需要产生伤口（见 注 27 ) 以利于底物进入 [52,
细胞凋亡检测实验——Caspase3活性检测法
实验方法原理Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（
荧光素酶检测值达到多少算有活性
荧光素酶（英文名称：Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,其中最有代表性的是一种学名为Photinus pyralis的萤火虫体内的荧光素酶.在相应化学反应中,荧光的产生是来自于萤光素的氧化,有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷（ATP）.没有荧光素酶的情况下,萤光素与氧气反应
荧光素梅活性检测－一般值是多少
荧光素酶（英文名称：Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，其中最有代表性的是一种学名为Photinus pyralis的萤火虫体内的荧光素酶。在相应化学反应中，荧光的产生是来自于萤光素的氧化，有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。没有荧光素酶的情况下，萤光素与氧气
荧光素酶的种类以及应用
在细胞和基因的微观世界中研究探索，遗传报告基因是非常有用的"可视化和量化"工具，具有广泛的应用。荧光素酶（萤光素酶）以出色的灵敏度、使用方便、可以定量检测而成为理想的报告基因。荧光素酶不是特定的分子，是一类中能催化产生生物发光的酶的统称，不同来源的荧光素酶各有特点，可催化底物发出不同颜色的光，有的还
荧光素酶报告基因检测的操作步骤
荧光素酶检测系统，可用裂解液来温和而快速地提取真核细胞中的荧光素酶，用其底物来检测荧光素酶活性。检测步骤如下：1. 加裂解缓冲液裂解转染的细胞。2. 将上述裂解物转移入微孔板或者试管中（根据检测的需要选择所用器材类型）。3. 加入含有所有酶反应成分（必须包括底物荧光素），使化学发光反应开始。4. 使
双荧光素酶报告基因实验原理
双荧光素酶报告基因实验原理具体如下：双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。双荧光素酶报告基因实验是一种基因表达定量分析技术，通过将双荧光素酶Luciferase作为报告基因插入到需要研究的靶基因启动子区域或转录后区域，使其与靶基因协同表达。当荧光素基
双荧光素酶报告基因检测（一）
双荧光素酶实验是广大科研工作者经常会遇到的实验。双荧光素酶报告基因通常以萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）为报告基因，以海肾荧光素酶（Renilla luciferase）为内参基因。这样构建的报告系统具备很多优势，包括检测灵敏度高、动态范围广、应用灵活等。同时双荧光素酶实验也有
双荧光素酶报告基因检测（三）
双荧光素酶报告基因检测（三）萤火虫荧光素酶片段互补成像（LCI）技术是一种新兴的蛋白质相互作用研究方法，其中两个被研究的目标蛋白质分别与萤火虫荧光素酶的N端和C端相连。当这两个蛋白质发生相互作用时，荧光素酶的两个段落会接近并组合成一个活性酶。结合烟草瞬时表达系统的LCI技术，能够在植物细胞内进行实时
双荧光素酶报告基因检测（二）
双荧光素酶报告基因检测（二）双荧光素酶实验通常被用来评估miRNA是否与其潜在的靶基因发生相互作用。实验中，预测的miRNA靶标基因的3’-UTR序列被克隆到含有萤火虫荧光素酶的报告基因载体的3’-UTR位置。如果miRNA与插入到质粒中的目标序列发生结合，miRNA将通过抑制该序列的翻译来降低萤火
酶标仪在植物领域的三种应用总结
一、简介 在基于哺乳动物细胞的研究中，酶标仪主要应用于: (1) 常规分子检测，如核酸、蛋白浓度及酶活性分析等；(2) 信号转导研究， 如一些细胞信号事件如 ROS，修饰的检测；(3) 整体细胞水平的分析，如细胞的活力、凋亡和杀伤等。然而在植物领域中，酶标 仪的应用则偏向前
酶标仪在植物领域的三种应用总结
一、简介 在基于哺乳动物细胞的研究中，酶标仪主要应用于: (1) 常规分子检测，如核酸、蛋白浓度及酶活性分析等；(2) 信号转导研究， 如一些细胞信号事件如 ROS，修饰的检测；(3) 整体细胞水平的分析，如细胞的活力、凋亡和杀伤等。然而在植物领域中，酶标 仪的应用则偏向前两个方向，此外
转基因植株的表型分析及组织化学分析
实验概要本实验将转基因拟南芥和水稻种子诱导发芽培养后进行了表型分析和GUS组织化学分析。主要试剂1. Tween-20(Sangon，上海)2. MS培养基3. 70%的酒精4. 20%漂白剂5. GUS反应缓冲液：主要设备1. LED光照培养箱(E-3 0 LED growth chamber，P
免疫金组织化学染色实验
实验方法原理 免疫金染色（immunogold staining，IGS）法是由 Geoghegan 等（1978）首次应用金标探针检测 B 淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于 20 nm）标记在第二抗体或 SPA 分子上，制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标
免疫组织化学法实验
实验方法原理 实验材料 在3〜5 cm培养皿上生长的单层细胞（培养皿越小所需的抗体就越少 但培养皿应适合显微镜下观察）试剂、试剂盒 VPBS 40℃2% (m V)高聚甲醛（PFA)固定液 4℃ 用于细胞表面抗原固定100%甲醇 -10〜-20℃ (置于冰箱的结冻室冷却较为理想）；或含0.1
亲和免疫组织化学实验
实验方法原理 ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法，是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的，其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记，生物素标记的第二抗体与
报告基因的应用
实验概要报告基因被广泛地应用于细胞生物学中的基因表达和细胞相关内容的研究。常用的报告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、绿色荧光蛋白基因及萤火虫荧光素酶基因等。在这些报告基因中萤火虫荧光素酶基因因其表达产物－荧光素酶敏感性高，测定方法快速且宜于掌握，线性好，并且荧光素
细胞因子生物学活性检测实验－古朵实验√
白细胞介素1是一种重要的细胞因子，主要由单核-巨噬细胞产生，IL-1不仅对多种免疫活性细胞有重要的调节功能，而且与发热、炎症发生以及某些疾病的病理变化有关。目前对IL-1产生水平的检测主要应用生物学活性检测的方法。一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性 小鼠胸腺细胞在丝裂原刺激下表达IL
细胞活性和细胞毒性检测的实验方法
细胞数量确定1.将细胞悬浮液（100μL/孔）接种在96洞孔板中。将板在潮湿的培养箱中预孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。2.向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。3.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。4.使用酶标仪测量450 nm处的吸光
报告基因：β半乳糖苷酶的原位染色实验
试剂、试剂盒 D-PBSA 染色液质粒实验步骤 一、材料非消毒物品 1. D-PBSA2. 底物：X-gal（nvitrogen），以二甲基甲酰胺配成 20 mg/mL，用多聚丙烯管-20℃ 避光保存，最长可达 6 个月 3. 固定液：1.8% 的甲醛和 0.05% 戊二醛，均以 PBSA 液配制；
报告基因：β半乳糖苷酶的原位染色实验
原位染色技术 实验方法原理 β-半乳糖苷酶是一种常用的报告基因分子，通过原位染色，在普通的光学显微镜下就可以用于检测到β-半乳糖苷酶的表达。