报告基因实验——植物提取物中LUC活性的检测
实验材料植物组织试剂、试剂盒裂解液萤光素酶分析缓冲液仪器、耗材离心机实验步骤一、完整组织1. 液氮速冻植物组织（5~50 mg)，研磨成粉末状。2. 100~400 ul 裂解液室温重悬，组织匀浆。3. 16000 g，4℃ 离心 15 min，弃掉破碎的细胞。4. 检测提取物中的蛋白质浓度。5. 立即使用提取物，或者 -80℃ 保存。二、原生质体1. 50 g 离心 4 min，小份收集（1 x106 ) 原生质体。2. 用 2 ml 的 3M 缓冲液重悬，50 g 离心 4 min。3. 400 ul 裂解液重悬，短暂涡旋（或者通过 26G 的抽吸）。4. 16000 g，4℃ 离心 15 min，沉淀破碎的细胞。检测提取物的蛋白质浓度。三、萤光素酶的检测1. 取 20 ul 分装的组织提取液于不透明的微型板，以未转化组织的提取物作对照。2. 设置光度计程序，加入 100 ul 萤光素酶分析缓冲液，等待 2s，在 ......阅读全文
报告基因实验——植物提取物中LUC活性的检测
实验材料植物组织试剂、试剂盒裂解液萤光素酶分析缓冲液仪器、耗材离心机实验步骤一、完整组织1. 液氮速冻植物组织（5~50 mg)，研磨成粉末状。2. 100~400 ul 裂解液室温重悬，组织匀浆。3. 16000 g，4℃ 离心 15 min，弃掉破碎的细胞。4. 检测提取物中的蛋白质浓度。5.
报告基因实验——利用冷型－CCD－像机进行－LUC－的活体检测
实验材料LUC试剂、试剂盒D- 萤光素水溶液仪器、耗材液氮冷却相机实验步骤对于萤光素酶的检测来说，需要解决荧光素渗透进入活体组织这一问题 [7]。多数情况下，用荧光素溶液简单地喷洒植物就可以解决，但是一些组织，如发育后期的种子不能吸收荧光素，需要产生伤口（见 注 27 ) 以利于底物进入 [52,
报告基因实验——GUS－活性的组织化学检测
实验材料组织试剂、试剂盒HGUS 缓冲液磷酸盐缓冲液乙醇溶液仪器、耗材微量滴定板或者试管实验步骤1. 将组织置于新配制的 HGUS 缓冲液中（含有 X-Gulc 及其他添加物），足以完全浸没材料，试验在微量滴定板或者试管中进行。2. 吸真空 5~10 min，然后去掉真空条件。3. 铝箔包裹，37
转染实验常用的报告基因（植物、动物）
报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其 它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。
转基因植物Gus报告基因的检测
一、原理Gus (b-glucuronidase)基因作为一种报告基因，在植物遗传转化研究中有广泛的用途。Gus基因来自于大肠杆菌，编码b－葡聚糖苷酶（一种水解酶），可催化底物5－溴－4－氯－3－吲哚葡聚糖醛酸苷（5－bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为
荧光素酶的作用原理及应用
荧光素酶（luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素，在荧光素氧化的过程中，会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达，是检测转录因子与目的基因
荧光素酶互补（Luc）实验
【导入】基于荧光素酶（Luciferase）的发光原理，形成了双荧光素酶报告基因检测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海参荧光素酶（Renilla luciferase）。两者可与各自的底物发生氧化作用产生生物荧光，产生的荧光值即表示两种酶的表达量多少。图片来源
植物提取物中多种有机氯农残检测前处理
方案优势 采用微波萃取、GPC净化能较好地除去植物提取物中的色素及油脂等大分子杂质，回收率也较高。 采用标准 国家相关标准 方法/原理/步骤 1样品的提取 1.1称取5克植物提取物样品6份，用1：1的石油醚
报告基因实验
实验方法原理报告基因是一个分子生物学概念，它是指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：①已被克隆和全序列已测定；②表达产物在受体细胞中本不存在，即无背景，在被转染的细胞中
报告基因检测概述
报告基因检测是功能基因组学研究的一个重要手段，在真核基因表达调控研究和相关药物或蛋白筛选工作中，有广泛的应用。报告基因检测系统，是把顺式调控元件（即DNA非编码序列）与某一种非常容易被鉴定的蛋白（即报告基因产物）的编码序列连接起来，通过测定该报告基因在细胞内的表达产物的量或活性，来判断顺式调控元件的
报告基因实验——荧光蛋白（FP)－的显微检测
实验材料活体组织仪器、耗材落射荧光显微镜汞灯实验步骤表达突光蛋白的材料一般首先用落射荧光显微镜（epi-fluorescent microscopy) 来观察 ，尤其当研究表皮上表达的荧光蛋白或者用反褶积软件去掉从焦点之外采集的荧光时[18]。然而，对于较厚的材料，必须使用共聚焦显微镜，因为它可以
双荧光素酶报告基因实验原理
双荧光素酶报告基因实验原理具体如下：双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。双荧光素酶报告基因实验是一种基因表达定量分析技术，通过将双荧光素酶Luciferase作为报告基因插入到需要研究的靶基因启动子区域或转录后区域，使其与靶基因协同表达。当荧光素基
报告基因的特点和作用
理想的报告基因通常具备如下基本要求：①、受体细胞中不存在相应内源等位基因的活性；②、它的产物是唯一的，且不会损害受体细胞；③、具有快速、廉价、灵敏、定量和可重复性的检测特性。常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因（cat）、荧光素酶基因（luc）、β-葡萄糖苷酸酶基因（gus）等。
知识分享：教你辨析标记基因和报告基因
一、标记基因和报告基因的概念 标记基因(marker gene)，是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。标记基因是选择标记基因的简称，是指其编码产物能够使转化的细胞、组织具有对抗生素等的抗性，或者使转化细胞、组织具有代谢的优越性。在培养基中加入抗生素等选择试剂的条件
辨析标记基因和报告基因教程
一、标记基因和报告基因的概念 标记基因(marker gene)，是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。标记基因是选择标记基因的简称，是指其编码产物能够使转化的细胞、组织具有对抗生素等的抗性，或者使转化细胞、组织具有代谢的优越性。在培养基中加入抗生素等选择试剂的条件下，非转化的细
上海生科院揭示等位遗传调控机制
5月14日，国际学术期刊Cell Reports在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物逆境生物学研究中心朱健康研究组题为Involvement of multiple gene silencing pathways in a paramutation-like phenomenon in A
天麻提取物的活性成分
化学成分含天麻甙(天麻素,gastrodin)、天麻甙元、天麻醚甙(gastrodioside)、 派立辛(parishin)、香草醇、β2甾醇、对羟基苯甲醛、柠檬酸、琥珀酸等。
问荆提取物的活性成分
全草含问荆皂甙、木贼甙、异槲皮甙、木犀草甙、硅酸(含量达干生药的5.19～7.77%)、有机酸、脂肪、β-谷甾醇、犬问荆碱、二甲砜、胸嘧啶、3-甲氧基吡啶、多种氨基酸。孢子含五羟基蒽醌葡萄糖甙、廿八烷二酸、卅烷二酸、卅烷二酸二甲酯、棉花皮次甙和草棉甙。
麦冬提取物的活性成分
含麦冬皂甙A、B、B’、C、C’、D、D’(ophiopogoninA，B，B’，C，C’、D，D’)、麦冬酮A、B(ophiopogononeA，B)、甲基麦冬黄酮A、B(methy-lophiopogononeA，B)、二氢麦冬黄酮A、B(ophiopogonanoneA，B)等。
葛根提取物的活性成分
1、藤本，长约达10cm，全株被黄褐色长硬毛。 2、 三出复叶互生，托叶盾状着生，卵状椭圆形；中央小叶菱状卵形或宽卵形，侧生小叶斜椭圆形，两面被糙毛。背面较密；托叶盾形，小托叶针状。 3、 总状花序腋生，花密集；小苞片卵形或披针形；花萼钟状，萼齿5，上面2齿合生，下面1齿较长，内外面均被黄色
双荧光素luc不表达
双荧光素luc不表达有多种原因，实验过程中的每一个步骤都可能导致双荧光素luc不表达。如果目的基因载体没有成功转移到受体细胞，或者受体细胞没有成活，以及实验过程中出现其他物质抑制了双荧光素luc的表达等等，都有可能导致双荧光素luc不表达。基于荧光素酶（Luciferase）的发光原理，形成了双荧光
双荧光素luc不表达
双荧光素luc不表达有多种原因，实验过程中的每一个步骤都可能导致双荧光素luc不表达。如果目的基因载体没有成功转移到受体细胞，或者受体细胞没有成活，以及实验过程中出现其他物质抑制了双荧光素luc的表达等等，都有可能导致双荧光素luc不表达。基于荧光素酶（Luciferase）的发光原理，形成了双荧光
双荧光素luc不表达
双荧光素luc不表达有多种原因，实验过程中的每一个步骤都可能导致双荧光素luc不表达。如果目的基因载体没有成功转移到受体细胞，或者受体细胞没有成活，以及实验过程中出现其他物质抑制了双荧光素luc的表达等等，都有可能导致双荧光素luc不表达。基于荧光素酶（Luciferase）的发光原理，形成了双荧光
为什么荧光素酶报告基因活性太低
为什么荧光素酶报告基因活性太低（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提
关于Promega萤光素酶技术发光史里程碑介绍
1990年12月，Promega首次提出萤火虫萤光素酶(Luc)作为一种新兴报告基因技术的应用可能性。当时的人们认为，萤火虫萤光素酶具备的生物发光特性、极高的灵敏度和快速简单的检测流程等特点，可能会对分子生物学家的研究产生重要的影响。几个月后，第一代萤火虫萤光素酶报告基因载体和检测试剂在Prom
双萤光素酶报告基因检测
萤光素酶报告基因系统广泛应用于真核生物基因表达和细胞生理学研究，包括受体活性、转录因子、细胞信号转导、mRNA加工和蛋白质折叠等。萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单萤光素酶报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双萤光素
关于标记基因的分类介绍
引入“选择基因”和“报告基因”的概念 选择基因和报告基因都可以看做是标记基因，都起着标记目的基因是否成功转化的作用，但是它们又有着各自的特点。 选择基因（又称选择标记基因），主要是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因，这种基因在执行其选择功能时，通常存在检测慢（蛋白酶作用需要时间）、依
简述标记基因的不同分类
引入“选择基因”和“报告基因”的概念 选择基因和报告基因都可以看做是标记基因，都起着标记目的基因是否成功转化的作用，但是它们又有着各自的特点。 选择基因（又称选择标记基因），主要是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因，这种基因在执行其选择功能时，通常存在检测慢（蛋白酶作用需要时间）、依
标记基因的分类
选择基因和报告基因都可以看做是标记基因，都起着标记目的基因是否成功转化的作用，但是它们又有着各自的特点。选择基因（又称选择标记基因），主要是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因，这种基因在执行其选择功能时，通常存在检测慢（蛋白酶作用需要时间）、依赖外界筛选压力（如抗生素、除草剂）等缺陷。而报告
双荧光素酶报告基因实验中的质粒怎么找
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。是检测启动子的荧光报告载体，当然是将miR的启动子序列构建