报告基因实验——荧光蛋白（FP)的显微检测
实验材料活体组织仪器、耗材落射荧光显微镜汞灯实验步骤表达突光蛋白的材料一般首先用落射荧光显微镜（epi-fluorescent microscopy) 来观察 ，尤其当研究表皮上表达的荧光蛋白或者用反褶积软件去掉从焦点之外采集的荧光时[18]。然而，对于较厚的材料，必须使用共聚焦显微镜，因为它可以穿过产生荧光的样品，深入材料 50 um 或更厚的地方，从而产生很薄的（0.5~1.5 um ) 光切片。此外 ，如果对多种荧光蛋白成像，共聚焦显微镜也十分有用，它可以同时检测多种发射波长（参见注释 3 4 )。共聚焦显微镜的主要缺点是使用激光照射样品，因为通常可用的激光激发波长范围有限，所以激发波长必然会与激发效率相冲突，而激发效率取决于发色团的物理特性，虽然只需要 25% 的激发效率，但是 80% 或者更高的效率更合适。正确选择滤光片非常重要（见注 35 ) ，不管使用哪种显微镜，次优的滤光片都会导致所观察到的荧光蛋白亮......阅读全文
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒
荧光素酶报告基因的技术流程
启动子的预测转录因子的预测报告基因质粒的构建实验方法及结果分析 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。扩增转录因子质
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
双荧光素酶报告基因测试
在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因
报告基因实验——GUS－活性的组织化学检测
实验材料组织试剂、试剂盒HGUS 缓冲液磷酸盐缓冲液乙醇溶液仪器、耗材微量滴定板或者试管实验步骤1. 将组织置于新配制的 HGUS 缓冲液中（含有 X-Gulc 及其他添加物），足以完全浸没材料，试验在微量滴定板或者试管中进行。2. 吸真空 5~10 min，然后去掉真空条件。3. 铝箔包裹，37
除了基因检测，还有哪些方法可以检测肿瘤抑制基因的表达或功能状态？
除了基因检测，以下方法也可用于检测肿瘤抑制基因的表达或功能状态：免疫荧光法（IF）：类似于免疫组织化学，但是在荧光显微镜下观察荧光标记的抗体与目标蛋白的结合情况，能更清晰地显示蛋白的定位和表达。酶联免疫吸附测定（ELISA）：定量检测体液（如血液、脑脊液等）中肿瘤抑制基因编码的蛋白含量。转录组分析：
FP900热值分析系统（FP900）
FP900是一套具有多种功能的测量仪器，由中央控制器FP90连接不同的测量单元构成。根据所连接的测量单元的功能，该系统能测量熔点、沸点、滴点、软化点等物理参数直到差热分析和显微热台测量，是研究开发和质量控不可缺少的工具。 FP900热值分析系统包括几个测量单元，用来测定各种热值和TOA应用，中央
实验室检验检测设备倒置荧光显微镜
倒置荧光显微镜是近代发展起来的新式荧光显微镜,就其光路来分有两种:一是透射式荧光显微镜,激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。二是落射式荧光显微镜,这是近代发展起来的新式荧光显微镜,特点是激发光从物镜向下落射到标本表面,即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。倒置荧光显微镜由荧光附件与倒
生物发光技术在生命科学中的应用（一）
随着发光(luminescence)技术在多种生物实验中的广泛应用，生物发光(bioluminescence)技术越来越成为首选的生物检测手段。在这篇文章中，我们将详细讨论生物发光技术在生物检测中的应用，以及它与其它发光检测手段相比所显示出的优点。1 生物发光的特点根据产生光子的能量来源不同，发光可
报告基因实验——植物提取物中LUC活性的检测
实验材料植物组织试剂、试剂盒裂解液萤光素酶分析缓冲液仪器、耗材离心机实验步骤一、完整组织1. 液氮速冻植物组织（5~50 mg)，研磨成粉末状。2. 100~400 ul 裂解液室温重悬，组织匀浆。3. 16000 g，4℃ 离心 15 min，弃掉破碎的细胞。4. 检测提取物中的蛋白质浓度。5.
双重荧光素酶报告基因优缺点
双重荧光素酶报告基因优点是具有灵敏度高，缺点是需要多次实验。双荧光素酶报告基因检测系统因其具有灵敏度高、无细胞内源性表达干扰等优势，现已被广泛用于基因表达调控的研究中，同批次样品检测值也可能出现浮动。所以实验一般需要做3个或3个以上复孔，并且引入另一个报告基因作为内参。双荧光素酶报告基因检测是以荧光
自动荧光显微系统：高效光控蛋白
光遗传学是近年来最具创新性的显微技术之一，通过结合遗传学和光学方法，科学家们可以利用光来特异性控制活细胞中精确时间段的蛋白活性，以及蛋白相互作用。 在进行光遗传学实验的时候，研究人员经常需要使用一种激光共焦显微镜的光漂白模式（photobleaching mode）。虽然目前特殊激光或其它通过
自动荧光显微系统：高效光控蛋白
光遗传学是近年来最具创新性的显微技术之一，通过结合遗传学和光学方法，科学家们可以利用光来特异性控制活细胞中精确时间段的蛋白活性，以及蛋白相互作用。 在进行光遗传学实验的时候，研究人员经常需要使用一种激光共焦显微镜的光漂白模式（photobleaching mode）。虽然目前特殊激光或其它通过光学
载体构建中常用的选择标记基因和报告基因是什么
报告基因的主要作用是标记转化细胞，起报告和识别作用。常用的有Gus基因（β-葡萄糖苷酸酶基因），该基因来自大肠杆菌染色体上的uidA座位，编码β-葡萄糖苷酸酶。绝大多数植物不存在内源的Gus基因活性，因而Gus基因被广泛用作转基因植物的报告基因。常用的检测方法有组织化学染色定位法、荧光检测法和分光光
载体构建中常用的选择标记基因和报告基因是什么
报告基因的主要作用是标记转化细胞，起报告和识别作用。常用的有Gus基因（β-葡萄糖苷酸酶基因），该基因来自大肠杆菌染色体上的uidA座位，编码β-葡萄糖苷酸酶。绝大多数植物不存在内源的Gus基因活性，因而Gus基因被广泛用作转基因植物的报告基因。常用的检测方法有组织化学染色定位法、荧光检测法和分光光
荧光显微技术有哪些检测方法？
1.直接法：用特异荧光抗体直接滴加于标本上，使之与抗原发生特异性结合。本法操作简便，特异性高，非特异荧光染色因素少;缺点是敏感度偏低，且每检查一种抗原需制备相应的特异荧光抗体。2.间接法：可用于检测抗原和抗体。本法有两种抗体相继作用，第一抗体为针对抗原的特异抗体，第二抗体(荧光抗体)为针对第一抗体的
荧光显微镜计数检测
观察标本的特异性荧光强度一般用+号表示，-表示无荧光；±为极弱的可疑荧光；+为荧光较弱但清楚可见；2+为荧光明亮；3+～4+为荧光闪亮。
荧光显微镜检测方法
荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 （一）光源 现在多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起
荧光素酶报告基因用品的选择与应用（一）
一 、什么是荧光素酶报告基因？ 报告基因（Reporter Gene）：通常指可编码某种蛋白或酶，其表达产物容易被检测，并且能与内源性背景蛋白相区别的基因，通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控。 而理想的报告基因必须具备以下几个条件： 1
为什么荧光素酶报告基因活性太低
为什么荧光素酶报告基因活性太低（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提
酶标仪在植物领域的三种应用总结（二）
三、利用酶标仪进行植物信号分析 除了一些常见分子的分析和定量之外，常见的植物信号，如报告基因、蛋白蛋白相互作用和 ROS 分析等，也都可以用酶标仪 进行高通量的分析。3.1 报告基因分析基于 β-葡萄苷酸酶 (β-glucuronidase) 的 GUS报告基因系统利用了在高等植物中 β-glucu
转染实验常用的报告基因（植物、动物）
报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其 它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。
生物发光技术在生命科学中的应用
随着发光(luminescence)技术在多种生物实验中的广泛应用，生物发光(bioluminescence)技术越来越成为首选的生物检测手段。在这篇文章中，我们将详细讨论生物发光技术在生物检测中的应用，以及它与其它发光检测手段相比所显示出的优点。 1 生物发光的特点 根据产生光子的
核蛋白的免疫荧光定位实验
免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种免疫荧光技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。实验方法免疫荧光定位法 实验方法原理 免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗