技术和方案13已固定细胞的肌动蛋白染色
试剂、试剂盒PBS固定液实验步骤鬼笔环肽专一性地结合 F 肌动蛋白,荧光标记的鬼笔环肽染细胞与肌动蛋白抗体的染色模式类似。1.在 500 ml 三角瓶中振荡培养 25 ml 酵母菌至密度为 2X107 个/ml。2.添加 17 ml 10% 甲醛(EM 电子显微级)到培养基中至终浓度 4%,在酵母菌生长温度下固定细胞 10 min。3.2000~3000r/min 离心 5 min,收集细胞。4.在 6 ml 加了 4 ml 10% 甲醛(EM 级)的 PBS 溶液中室温固定细胞 lh。5.用 10 ml PBS 洗细胞两次,重悬在 500ul PBS 中。6.取 180ul 细胞悬液,添加 20ul 罗丹明鬼笔环肽或荧光素鬼笔环肽。避光温育 lh,每融 15 mm 轻轻混合。7.用 1ml PBS 洗细胞 5 次。8.悬浮细胞在约 200ul 免疫荧光固定液中。放置于 -20°C,染色细胞可以保存几个月。9.观察细胞时,滴 1......阅读全文
技术和方案13-已固定细胞的肌动蛋白染色
试剂、试剂盒PBS固定液实验步骤鬼笔环肽专一性地结合 F 肌动蛋白,荧光标记的鬼笔环肽染细胞与肌动蛋白抗体的染色模式类似。1.在 500 ml 三角瓶中振荡培养 25 ml 酵母菌至密度为 2X107 个/ml。2.添加 17 ml 10% 甲醛(EM 电子显微级)到培养基中至终浓度 4%,在酵母菌
【技术方案】微孔板内细胞固定和抗体染色自动化解决方案
以往,我们使用显微镜做荧光成像的时候,常常将样本放在载玻片上。但是随着样本量增加,细胞实验使用 96 孔和 384 孔微孔板逐渐成为趋势,这与高内涵(high-content analysis,HCA)分析不谋而合。高内涵分析是一种高通量识别并分析由与细胞相互作用的物质所带来的细胞表型变化的方法。这
LSCM细胞固定和染色
细胞固定和染色除了上述使用多聚甲醛固定细胞的方法外,还有一种普遍使用的方法是:培养细胞在 - 20 °C 预冷的甲醇中孵育 5 min。但这种方法对于固定表达荧光蛋白的细胞及 FRET 实验中并不推荐。这是因为:这种处理方法是沉淀细胞内的蛋白,而不是使蛋白质发生交联。此外,为了尽可能减少抗体的用量,
酵母遗传学方法10:固定化细胞的肌动蛋白染色
固定化细胞的肌动蛋白染色1.培养细胞到对数生长期(约107细胞/ml)。2.直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培养物的离心管中固定细胞(甲醛浓度为3.7%;标准母液是37%)。3.在甲醛中培养细胞30分钟或稍长时间。4.用PBS洗两次,离心5分钟收集细胞。5.用50μl的PBS悬浮细胞,加5个单位的
细胞肌动蛋白的功能和位置
肌动蛋白形成细丝('F-肌动蛋白'或微丝),其是真核细胞骨架的必需元件,能够经历非常快速的聚合和解聚动力学。在大多数细胞中,肌动蛋白丝形成更大规模的网络,这对于细胞中的许多关键功能是必不可少的:各种类型的肌动蛋白网络(由肌动蛋白丝制成)为细胞提供机械支持,并提供通过细胞质的运输途径以
固定细胞的PI单染色法
方法一1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。2.3ml PBS洗一次。3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。5.400目的筛网过滤1次,500~1000r/min离心5min,弃去P
革兰氏染色法染色的目的和火焰固定的目的
细菌染色之后才能在显微镜下看到形态,也可用于区分革兰氏阳性菌和阴性菌,G+细菌呈现革兰氏染液的蓝紫色,而G-细菌呈现沙黄或复红的红颜色。火焰固定目的是防止染色后洗涤、复染时细菌脱片。
技术和方案18-染色质免疫沉淀
试剂、试剂盒甲醛甘氨酸TBS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液免疫共沉淀洗脱液TESTE仪器、耗材超声波粉碎仪实验步骤1.培养要分析的细胞。每一个样品,需要在三角瓶中培养 50~100ml 细胞至 OD600 大约为 1。2.甲醛处理细胞交联蛋白质和 DNA。加甲醛到细胞中至终浓度为 1%(37% 的甲醛按 1
细胞常用固定剂和固定方法
培养细胞常用固定剂有4%多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95%乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。1.4%多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟,干燥。2.甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟,自然干燥。3.丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强,抗原保存好,很少用于组织切片,常用于培养细
固定化细胞技术简介
所谓固定化细胞技术,就是将具有一定生理功能的生物细胞,例如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等,用一定的方法将其固定,作为固体生物催化剂而加以利用的一门技术。
固定化细胞和固定化酶比较
固定化细胞:优点: 固定化细胞内酶的活性基本没有损失。缺点: 固定化细胞只能用于生产细胞外酶。固定化酶:优点:容易与水溶性反应物和产物分离。缺点: 一种酶只催化一种化学反应,而产物形成是通过一系列酶促反应得到的.
组织和细胞的固定方法
组织和细胞的固定方法 固定 的目的是用人为的方法尽可能使组织细胞的形态结构和化学成分保持生活状态,防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。固定还能增加组织块硬度,使其更容易切片,使不同的结构更容易染色。 固定方法有物理固定和化学固定两类,物理固定可采用空气干燥(血涂片)、骤冷(在液氮中迅速冷冻)或微波
组织和细胞的固定方法
组织和细胞的固定方法 固定 的目的是用人为的方法尽可能使组织细胞的形态结构和化学成分保持生活状态,防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。固定还能增加组织块硬度,使其更容易切片,使不同的结构更容易染色。 固定方法有物理固定和化学固定两类,物理固定可采用空气干燥(血涂片)、骤冷(在液氮中迅速冷冻)或微波固
细胞肌动蛋白的影响
有许多毒素可以通过阻止肌动蛋白聚合(latrunculin和细胞松弛素D)或通过稳定它(鬼笔环肽)来干扰肌动蛋白的动力学:Latrunculin是一种由海绵产生的毒素,它与G-肌动蛋白结合,阻止它与微丝结合。细胞色素D是由真菌产生的生物碱,其与F-肌动蛋白的(+)末端结合,阻止添加新单体。已发现Cy
技术和方案17-细胞同步化
实验步骤展
简介固定化细胞技术的载体
①载体应是亲水的,疏水载体与有机溶剂相同的变性影响。 ②载体也是要求有一定的机械强度和稳定性。 ③常用的载体包括:1、天然高分子(纤维素、琼脂糖、淀粉、葡萄糖凝胶、胶原及其衍生物等)2、合成高聚物(尼龙。多聚氨基酸等)3、无机支持物(多孔玻璃、金属氧化物等)
固定化细胞技术的应用范围
固定化细胞的应用范围极广,已遍及工业、医学、制药、化学分析、环境保护、能源开发等多种领域。在工业方面,如利用产葡萄糖异构酶的固定化细胞生产果葡糖浆;将糖化酶与含α淀粉酶的细菌、霉菌或酵母细胞一起共固定,可以直接将淀粉转化成葡萄糖;利用海澡酸钙或卡拉胶包埋酵母菌,通过批式或连续发酵方式生产啤酒;利用固
固定细胞培养的技术方法
中文名称固定细胞培养英文名称fixed cell culture定 义将植物悬浮细胞包埋在多糖或多聚化合物(如聚乙烯)制成的网状支持物中进行无菌培养的技术。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞培养与细胞工程(二级学科)
免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能
免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能
什么是固定化细胞技术?
所谓固定化细胞技术,就是将具有一定生理功能的生物细胞,例如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等,用一定的方法将其固定,作为固体生物催化剂而加以利用的一门技术。 固定化细胞与固定化酶技术一起组成了现代的固定化生物催化剂技术。早在19世纪初叶,人们就利用微生物细胞在固体表面吸附的倾向而采用滴滤法来生产
YIJI细胞骨架(肌动蛋白单体;GACTIN)红色荧光染色试...
YIJI细胞骨架(肌动蛋白单体;G-ACTIN)红色荧光染色试剂盒使用说明主要用途 YIJI细胞骨架(肌动蛋白单体;G-ACTIN)红色荧光染色试剂是一种旨在使用德克萨斯红标记的DNA酶I,探寻细胞骨架的肌动蛋白单体的分布和局部定向变化状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。
流式细胞计量术(DNA含量)实验_固定全细胞的PI染色
实验材料细胞试剂、试剂盒PBS冷乙醇PI 溶液仪器、耗材锥形管实验步骤1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮,1000 g 离心 5 分钟,弃上清。2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次,计数细胞总数,记在管山。3. 用约 500 μl 的 PBS 重悬
细胞固定切片和包埋实验
哺乳动物肌梭的初级终末—使 用 1 um 连续切片的光学显微镜研究实验实验材料猫 部分显露肌梭试剂、试剂盒二甲砷酸钠缓冲液戊二醛四氧化锇乙醇环氧乙烷甲苯胺蓝派罗宁仪器、耗材玻片实验步骤一、固定将取出的肌肉置于含 5% 戊二醛的 0.1mol/l 二甲砷酸钠缓冲液内,PH 值为 7.2, 原位固定 5
细胞固定切片和包埋实验
经验交流(0)实验材料猫 部分显露肌梭 试剂、试剂盒二甲砷酸钠缓冲液
细胞固定切片和包埋实验
哺乳动物肌梭的初级终末—使 用 1 um 连续切片的光学显微镜研究实验 实验材料 猫 部分显露肌梭
血细胞分析仪激光散射和细胞化学染色技术
激光散射和细胞化学染色技术 在白细胞分类上,仪器采用两个通道进行,一个为过氧化酶检测通道,另一个为嗜碱细胞检测通道。 过氧化酶反应(peroxidase,POX)是血涂片染色的一个常用细胞化学染色方法,用于鉴别原始细胞与成熟的粒细胞,鉴别粒细胞与非粒细胞。染色后的细胞内无蓝黑色颗粒出现为阴性
血细胞分析仪激光散射和细胞化学染色技术
在白细胞分类上,仪器采用两个通道进行,一个为过氧化酶检测通道,另一个为嗜碱细胞检测通道。 过氧化酶反应(peroxidase,POX)是血涂片染色的一个常用细胞化学染色方法,用于鉴别原始细胞与成熟的粒细胞,鉴别粒细胞与非粒细胞。染色后的细胞内无蓝黑色颗粒出现为阴性反应,出现细小颗粒或稀疏样分布
固定化细胞技术的优越性
①无需进行酶的分离和纯化,减少酶的活力损失,同时大大降低了成本;②可进行多酶反应,且不需添加辅助因子,固定化细胞不仅可以作为单一的酶发挥作用,而且可以利用菌体中所含的复合酶系完成一系列的催化反应,对于这种多酶系统,辅助因子再生容易;③对于活细胞来说,保持了酶的原始状态,酶的稳定性更高,对污染的抵抗力
简介固定化细胞技术的应用范围
固定化细胞的应用范围极广,已遍及工业、医学、制药、化学分析、环境保护、能源开发等多种领域。在工业方面,如利用产葡萄糖异构酶的固定化细胞生产果葡糖浆;将糖化酶与含α淀粉酶的细菌、霉菌或酵母细胞一起共固定,可以直接将淀粉转化成葡萄糖;利用海澡酸钙或卡拉胶包埋酵母菌,通过批式或连续发酵方式生产啤酒;利