免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否合适，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使以后的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能有一种适用于所有抗原的固定剂，而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下，供参考。 一、固定剂的选择及固定时间（详见表5-9） （1）Karovsky＇s 液pH7.3。 （2）PAP液（Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative） 配制见附录一。表5-9 各种抗原固定剂的选择及固定时间待检抗原固定剂的种类固定时间蛋白质酶冰冻切片不固定，或用95%乙醇，B5固定液10 min激素冰冻切片，涂片，印片，不固定或丙酮，甲10 min醇，乙醇，PEG固定，B5固定液固定......阅读全文
免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否合适，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使以后的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可
免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否合适，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使以后的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能
免疫胶体金银细胞化学染色中固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否适当，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使后续的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能
免疫胶体金银细胞化学染色中固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否适当，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使后续的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能
胶体金免疫金银组织化学技术
Kausche等(1939)烟草花叶病毒吸附到金颗粒上，在电镜下观察金离子呈高电子密度。然而胶体金技术作为标记物应用于IHC是由Fauld 和Taylor(1971)在《免疫化学杂志》上报道了应用胶体金标记抗沙门菌抗血清，检测细菌表面抗原，并在电镜下看到在细菌抗原—抗体结合部位上的胶体金颗粒。他
免疫金银染色双PAG法
实验概要本实验介绍了免疫金银染色双PAG法的操作步骤。实验原理免疫金银染色方法敏感、简便、省时、安全可靠，葡萄球菌A蛋白(SPA)金标记四步法是在此基础上发展起来的更为敏感的一种新方法。SPA和许多哺乳类动物IgG具有亲和性，且它们之间的连接不会干扰抗原—抗体的结合。简单的SPA金标记二步法后，第三
彩色免疫金银染色的原理及操作步骤
实验概要本文介绍了彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）的原理及操作步骤。实验原理彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）基本原理是在IGSS法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即IGSS后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的
彩色免疫金银染色的原理及操作步骤
实验概要本文介绍了彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）的原理及操作步骤。实验原理彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）基本原理是在IGSS法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即IGSS后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的
免疫组织/细胞化学染色1
一 基本原理免疫组织/细胞化学是利用抗原抗体具有高度特异性结合反应的原理，采用已知抗体检测组织或细胞的抗原物质，然后以适当的方式显示其结合信号以证明组织或细胞是否存在未知抗原，并进行定性、定位或定量的研究。二 基本步骤 1 三步法：以SP（链霉卵白素-过氧化物酶）试剂盒为例： 石蜡切片脱蜡至
免疫组织/细胞化学染色2
四 结果分析 编号 阳性片 待检片 阴性对照 结论 1 - -
组织细胞化学染色方法的选择
组织细胞化学的染色种类繁多，检测同一种物质可以有多种不同的染色液，形成不同色彩的终产物。有时即使是检测同一物质，因采用的方法不同，其结果有一定的偏差。另外有的方法学本身缺陷或步骤复杂，其结果也有误差。所以应尽量选择结果稳定、方法简便的方法染色。
斑点免疫金银染色检测牛结核血清抗体
实验概要本实验应用斑点免疫金银染色(Dot－IGSS)检测了牛结核血清抗体。主要试剂1．抗原牛结核PPD。2．血清待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3．硝酸纤维膜孔径0.45µm。4．氯化金(优质)5．0.2Mol/L PB液6．0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7．硝酸银显影液(现
斑点免疫金银染色检测牛结核血清抗体
实验概要本实验应用斑点免疫金银染色(Dot－IGSS)检测了牛结核血清抗体。主要试剂1．抗原牛结核PPD。2．血清待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3．硝酸纤维膜孔径0.45µm。4．氯化金(优质)5．0.2Mol/L PB液6．0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7．硝酸银显影液(现
免疫荧光细胞化学染色方法
免疫荧光细胞化学染色方法 一、标本制作 可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 （一）直接法 1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光 抗体或兔抗人 IgG 或 IgA 荧光抗体
免疫荧光细胞化学染色方法
一、标本制作 可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 （一）直接法 1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30
固相载体上的斑点免疫金银染色法
实验概要本实验介绍了硝酸纤维素膜(NC膜)上的斑点免疫金银染色操作流程。实验原理蛋白质抗原通过直接点样或转移电泳吸附在硝酸纤维素膜(NC膜)上，与特异性抗体反应后，在滴加(或浸入)胶体金标记的第二抗体，结果在抗原抗体发生金颗粒聚集，形成肉眼可见的粉红色斑点，称为斑点免疫金染色(dot-IGS)。此反
固相载体上的斑点免疫金银染色法
实验概要本实验介绍了硝酸纤维素膜(NC膜)上的斑点免疫金银染色操作流程。实验原理蛋白质抗原通过直接点样或转移电泳吸附在硝酸纤维素膜(NC膜)上，与特异性抗体反应后，在滴加(或浸入)胶体金标记的第二抗体，结果在抗原抗体发生金颗粒聚集，形成肉眼可见的粉红色斑点，称为斑点免疫金染色(dot-IGS)。此反
LSCM细胞固定和染色
细胞固定和染色除了上述使用多聚甲醛固定细胞的方法外，还有一种普遍使用的方法是:培养细胞在 - 20 °C 预冷的甲醇中孵育 5 min。但这种方法对于固定表达荧光蛋白的细胞及 FRET 实验中并不推荐。这是因为:这种处理方法是沉淀细胞内的蛋白，而不是使蛋白质发生交联。此外，为了尽可能减少抗体的用量，
常用的免疫胶体金检测技术免疫胶体金光镜染色法
细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。
细胞常用固定剂和固定方法
培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟，干燥。2．甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟，自然干燥。3．丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强，抗原保存好，很少用于组织切片，常用于培养细
免疫荧光细胞化学染色方法1
一、标本制作可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 （一）直接法 1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），
免疫荧光细胞化学染色方法2
2．方法步骤 （1）涂片或切片固定。 （2）吸取经适当稀释之免疫血清及补体之等量混合液（此时免疫血清及补体又都稀释一倍）滴于切片上，37℃作用30min，置于保持一定湿度的染色盒内。 （3）用缓冲盐水洗2次，搅拌，每次5min，吸干标本周围水液。
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
免疫细胞化学染色操作规程
一、材料和试剂1、玻片：须用免疫组化专用玻片，或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液，用PBS配。3、3%牛血清白蛋白（BSA），用PBS配。4、0.01M PH7.4 PBS5、1% BSA-PBS（含0.05% Tween20）6、AEC底物（1）底物缓冲液（20X
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
一、其它荧光抗体染色方法1、膜抗原荧光抗体染色法本法应用直接法或间接法的原理和步骤，可对活细胞在试管内进行染色，常用于T和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究，阳性荧光主要在细胞膜上。FACS即采用此法原理。2、双重染色法在同一标本上有两个抗原需要同时显示（如A抗原和B抗原），A抗原的
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
免疫电镜胶体金标记法操作大全
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原 反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫电镜胶体金
电镜免疫胶体金―银法染色技术
免疫胶体金―银染色(immunogold-sliverstaining)技术系20世纪80年代Holgate将免疫 金染色和银显影方法结合而建立的一种新型检测技术，亦可用于电镜包埋前染色。其基本原理是先进行免疫胶体金染色标记抗原，使其结合在组织细胞抗原所在位置，然后进行物理显影，当显影剂中的对
酶免疫细胞化学染色操作指南2
2、加3% H2O2，细胞片20ul/孔，培养板100ul/孔，使充分覆盖住细胞。3、室温10分钟后，甩掉 H2O2，用PBS轻轻淋洗2分钟。用滤纸吸干细胞周围水份，96孔在滤水纸上扣干，但注意保持细胞湿润。三、封闭细胞片用5-10%正常山羊血清（20ml/孔），细胞板用2-5%BSA（PBS配制）
酶免疫细胞化学染色操作指南1
一、材料和试剂1、玻片：须用免疫组化专用玻片，或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液，用PBS配。3、3%牛血清白蛋白（BSA），用PBS配。4、0.01M pH7.4 PBS5、1% BSA-PBS（含0.05% Tween20）6、AEC底物（1）底物缓冲液（20X）