流式细胞计量术(DNA含量)实验_固定全细胞的PI染色

实验材料细胞试剂、试剂盒PBS冷乙醇PI 溶液仪器、耗材锥形管实验步骤1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮,1000 g 离心 5 分钟,弃上清。2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次,计数细胞总数,记在管山。3. 用约 500 μl 的 PBS 重悬细胞。4. 加 5 ml 冷乙醇,4℃ 固定过夜。5. 取 5X106 细胞放入 15 ml 锥形管中,1000 g 离心,弃乙醇。6. 悬搅沉淀,用 5 ml PBS+1% BSA 或小牛血清洗 2 次。7. 用含 1% BSA 或 1% 小牛血清的 800 μl PBS 重悬细胞沉淀。8. 加 100 μl 10X PI 溶液。9. 加入 100 μl 煮沸过的 RNA 酶 A,37℃ 孵育 30 分钟。10. 用流式细胞计量术分析固定的样品。展......阅读全文

流式细胞计量术(DNA含量)实验_固定全细胞的PI染色

实验材料细胞试剂、试剂盒PBS冷乙醇PI 溶液仪器、耗材锥形管实验步骤1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮,1000 g 离心 5 分钟,弃上清。2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次,计数细胞总数,记在管山。3. 用约 500 μl 的 PBS 重悬

流式细胞计量术(DNA含量)实验_非固定细胞的无洗染色

实验材料细胞试剂、试剂盒蛋白酶NST-DAPI 缓冲液MFM柠檬酸缓冲液DNA 染色 裂解溶液仪器、耗材尼龙筛实验步骤一、组织培养细胞的染色1. 通过对悬浮培养中的细胞倾析或对单层培养的细胞蛋白酶消化来收获细胞。计数细胞,800 g 慢速离心 3 分钟沉淀细胞。2. 细胞染色。3. 在 NST-DA

流式细胞计量术(DNA含量)实验

固定全细胞的PI染色 非固定细胞的无洗染色             实验材料 细胞 试剂

流式细胞计量术(DNA含量)实验

固定全细胞的PI染色 非固定细胞的无洗染色             实验材料 细胞 试剂

流式细胞计量术(DNA含量)实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 PBS冷乙醇PI 溶液仪器、耗材 锥形管实验步骤 1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮,1000 g 离心 5 分钟,弃上清。2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次,计数细胞总数,记在管山。3. 用约 500 μl 的 PB

DNA裂解分析实验_乙醇固定后PI染色

实验材料细胞试剂、试剂盒EDTA-PBS洗涤缓冲液乙醇RNA 酶PI 溶液仪器、耗材流式细胞计量术实验步骤1. 在 5 mmol/L EDTA-PBS 中洗 1X106 细胞,重悬于 300 μl 洗涤缓冲液中。加 700 μl 100% 的冰冷乙醇,滴加,并轻微搅拌。旋转搅拌混匀。2. 14000

TUNEL分析实验——TUNEL-染色的流式细胞计量术分析

实验材料悬浮细胞试剂、试剂盒PBS甲醛柠檬酸钠溶液仪器、耗材流式细胞计量仪实验步骤1. 凋亡诱导之后,200 g 离心 5 分钟收集 1X106 悬浮细胞,用冷的 PBS 洗 2 次,重复离心。2. 用 2 ml 2% 的甲醛 PBS 溶液固定细胞沉淀,室温下在水平摇床上孵育 30 分钟。3. 20

流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理

实验原理:流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。细胞

流式细胞计PI染色死细胞

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ、材料1、PI(e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA)2、缓冲体系:1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scient

流式细胞计PI染色死细胞

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ、材料1、PI(e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA)2、缓冲体系:1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scient

固定细胞的PI单染色法

方法一1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。2.3ml PBS洗一次。3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。5.400目的筛网过滤1次,500~1000r/min离心5min,弃去P

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备实验

实验步骤1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置12×75mm专用塑料试管中。2. 加入50μl特异的单克隆抗体(一抗),室温下孵育30min。3. 置Q-PREP仪上溶解红细胞,稳定和固定白细胞。4. 离心(800~1000rpm,5min)弃上清液,用PBS洗涤细胞2次。5. 加入5

微量全血直接荧光染色法流式细胞术样品制备实验

实验步骤 目前制备全血细胞样品的方法很多,且很成熟,常用的方法是用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,然后进行特异性荧光染色,其染色方法与前面介绍的方法相同。下面主要介绍与流式细胞仪配套的Q-PREP(免疫学样品处理器)进行快速制备微量全血样品的方法。1

微量全血直接荧光染色法流式细胞术样品制备实验

实验步骤目前制备全血细胞样品的方法很多,且很成熟,常用的方法是用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,然后进行特异性荧光染色,其染色方法与前面介绍的方法相同。下面主要介绍与流式细胞仪配套的Q-PREP(免疫学样品处理器)进行快速制备微量全血样品的方法。1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置12×

微量全血直接荧光染色法流式细胞术样品制备实验

目前制备全血细胞样品的方法很多,且很成熟,常用的方法是用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,然后进行特异性荧光染色,其染色方法与前面介绍的方法相同。下面主要介绍与流式细胞仪配套的Q-PREP(免疫学样品处理器)进行快速制备微量全血样品的方法。1. 取肝素或ED

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备实验

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备实验             实验步骤 1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置1

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备实验

实验步骤 1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置12×75mm专用塑料试管中。2. 加入50μl特异的单克隆抗体(一抗),室温下孵育30min。3. 置Q-PREP仪上溶解红细胞,稳定和固定白细胞。4. 离心(800~1000r

流式细胞仪PI染色死细胞方法

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ、材料1、       PI(e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA)2、       缓冲体系:1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240

流式细胞仪PI染色死细胞方法

PI 能够插入双链 DNA 中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ 、材料1、 PI ( e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA )2、 缓冲体系: 1 × PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,I

细胞周期分析技术的实验步骤是什么?

以下是以流式细胞术结合 DNA 染料(如碘化丙啶 PI)进行细胞周期分析为例的一般实验步骤:细胞收集:对于悬浮细胞,直接离心收集细胞。对于贴壁细胞,先用胰酶消化使其成为单细胞悬液,然后离心收集。细胞固定:将收集的细胞用预冷的 70%乙醇缓慢逐滴加入,边加边轻轻混匀,使细胞固定,通常在 -20°C 固

流式细胞仪检测细胞凋亡实验——PI单染色法

实验方法原理主要根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变,包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等进行检测。实验材料细胞试剂、试剂盒PBSPI蒸馏水乙醇仪器、耗材棕色瓶400目筛网流式细胞仪实验步骤一、收集细胞收集细胞{数目约(1~ 5)x106个/mL}

流式细胞仪检测细胞凋亡实验PI单染色法

一、基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变最具特征性,主要包括以下几个方面:1、细胞核的改变由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变

简介流式细胞术的染色方法

  细胞表面染色:大多数免疫表型分析均采用此方法。但由于许多抗原也同时存在细胞内,所以在细胞表面抗原检测时应特别注意保持细胞膜的完整以保证检测的特异性。表面标记又分溶血前标记和溶血后标记。若红细胞对标记有影响或血浆成分对标记有影响的,适合溶血后标记,但要注意溶血剂膜抗原的影响,所以,溶血剂一般不含固

流式细胞计量术(基于荧光的蛋白质分析)实验

活细胞表面抗原的荧光染色(直接免疫荧光) 活细胞表面抗原的荧光染色(间接免疫荧光)             实验材料 细胞

流式细胞计量术(基于荧光的蛋白质分析)实验

活细胞表面抗原的荧光染色(直接免疫荧光)实验材料细胞初始抗体试剂、试剂盒PBS 溶液叠氮化钠实验步骤1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液,轻摇,收获细胞。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1

流式细胞计量术(基于荧光的蛋白质分析)实验

活细胞表面抗原的荧光染色(直接免疫荧光) 活细胞表面抗原的荧光染色(间接免疫荧光)             实验材料 细胞

微量全血间接荧光染色法流式细胞术样本制备

实验步骤 1. 取肝素或EDTA抗凝全血(100μl/份),置12×75mm专用塑料试管中。2. 加入50μl特异的单克隆抗体(一抗),室温下孵育30min。3. 置Q-PREP仪上溶解红细胞,稳定和固定白细胞。4. 离心(800~1000rpm,5min)弃上清液,用PBS洗涤细胞2次。5. 加入

细胞周期分析技术的标准操作流程是怎样的?

使用流式细胞术进行细胞周期分析的标准操作流程示例:前期准备:试剂和材料:细胞样本70%乙醇(预冷)磷酸盐缓冲液(PBS)RNA 酶 A碘化丙啶(PI)染液流式细胞仪专用的上样管仪器设备:流式细胞仪离心机移液器操作步骤:细胞收集:对于悬浮细胞,直接转移至离心管中离心(300g,5 分钟)。对于贴壁细胞

流式细胞计量术(基于荧光的蛋白质分析)实验2

活细胞表面抗原的荧光染色(间接免疫荧光)实验材料细胞试剂、试剂盒PBS 溶液叠氮化钠实验步骤1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液,收获细胞。此程序比通常的胰蛋白酶消化时间长。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。操作始终在冰上进行。2. 用 4

凋亡中线粒体功能评价实验_△ψm的流式细胞计量术分析

实验材料细胞试剂、试剂盒CMXRos 荧光染料PBS实验步骤1. 按“△ψm 的显微分析” 用 CMXRos 荧光染料培养约 5X105 细胞。2. 用 pH 7.2 的 PBS 将细胞洗 2 次,在水平摇床上用 4% 甲醛-PBS 溶液室温温育细胞沉淀 15 分钟,用以固定。固定细胞在进行流式细胞