技术和方案14PCR介导基因破坏法
实验步骤展......阅读全文
基因置换实验——构建融合蛋白
实验材料菌株BY4741质粒PDB118试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液仪器、耗材YPD 平板YPD 液体培养基血球计数板SC-his平板实验步骤YPD 平板 第 1 天将菌株 7-3 在 YPD 平板上划单克隆，30°C 下培养两天。第 3 天挑取单克隆，在 5 mlYPD 液体培养基中培养，30°C 过
基因扩增仪（PCR仪）技术原理
基因扩增仪（PCR仪）技术原理：标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通
PCR基因扩增仪技术参数
样品规格0.2ml×96孔、12×8联排管、96微孔板、0.5ml×77孔控温模式基座BLOCK模式、管内TUBE模拟计算模式反应体积10-100ul温控范围0--99.9℃BLOCK升降温速率(Max．)≥4℃/sec样品升降温速率(Max．)≥3．5℃/sec温度显示精度±0.1℃温度准确度±0
PCR技术应用基因克隆的应用
运用 PCR 技术、基因克隆和亚克隆比传统的方法具有更大的优点。由于 PCR 可以对单拷贝的基因放大上百万倍,产生微克(μg)级的特异 DNA 片段,从而可省略从基因组 DNA 中克隆某一特定基因片段所需要的 DNA的酶切、连接到载体 DNA 上、转化、建立 DNA 文库及基因的筛选、鉴定、亚克隆等
基因扩增仪（PCR仪）技术原理
基因扩增仪（PCR仪）技术原理：标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，
PCR技术要素模板(靶基因)核酸
模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是: 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀; 蛋白酶K能水解消化蛋白质,特别
PCR技术应用三：突变基因检测
基因突变(gene mutation)是遗传病和肿瘤发生的根本原因，检测与遗传病及恶 性肿瘤发生有关的突变基因(mutant gene)是分子生物学，医学遗传学及肿瘤学研究 的热点，它对阐明遗传病和肿瘤发生的分子生物学基础及其诊断和早期诊断具有重要 ＼意义，分子生物学技术的发展，尤其是PCR技术
PCR技术应用三：突变基因检测
基因突变(gene mutation)是遗传病和肿瘤发生的根本原因，检测与遗传病及恶 性肿瘤发生有关的突变基因(mutant gene)是分子生物学，医学遗传学及肿瘤学研究 的热点，它对阐明遗传病和肿瘤发生的分子生物学基础及其诊断和早期诊断具有重要 ＼意义，分子生物学技术的发展，尤其是PCR技
环介导等温扩增反应(LAMP)－基因诊断技术及简介
PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。2000年日本学者Notomi在Nucleic Aci
逆转录病毒介导的基因技术的缺陷
①载体的滴度较低；②是辅助病毒与载体病毒重组重新获得包装信号使病人面临感染辅助病毒的危险性；③此载体只能整合至分裂相细胞；④此载体容纳的外源基因量较少，不利于较大的基因的插入。
反向PCR（Inverse－PCR）技术的定义和特点
1.概述：反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段，而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，再用一对反向的引物进行PCR，其扩增产物
现场PCR检测方案
春暖花开，万物复苏，无论是自然界还是科学界，都在发生着日新月异的变化，近年来医疗诊断及食品安全监测领域的技术创新更是层出不穷，而这一切都离不开分子生物学检测手段的支持。目前大家对于即时现场检测的需求也十分多样化，比如，技术不太熟练的基层人员需要在短时间内能够得到准确的检测结果，或是在野外条件下需要携
方案27.12－脂质体介导的瞬时转染
方案27.12 脂质体介导的瞬时转染 实验材料 靶细胞 DNA
脂质体介导DNA转染法
脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞
HLA基因分型方法：PCR－RFLP法
PCR－RFLP法1）提取细胞总DNA方法同前。 2）PCR扩增引物的设计1．引物长度一般为15～30bp，G＋C含量应在45％～55％之间。2．应避免连续出现4个以上的单一碱基。3．不能含有自身互补序列。4．两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体。5．与非特异扩增序列的同
HLA基因分型方法：PCR－SSP法
PCR－SSP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增操作方法基本同PCR-RFLP，但引物是根据各等位基因的核苷酸序列设计的特异性引物，主要是针对第二外显子区域的多态性，用SSP扩增出来的产物具等位基因特异性。 3）凝胶电泳取PCR扩增的产物与上样缓冲液混合，加入2％琼脂糖凝胶加样孔中，其内
HLA基因分型方法：PCR－SSCP法
PCR－SSCP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP，也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳1．取PCR的扩增产物，加凝胶加样液3μl，95℃加热变性2min，冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍，加样3μl。2．取样品用微量
PCR基因扩增原理、材料和方法
一、原理多聚酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）类似于DNA 的天然复制过程：经过变性、退火、延伸多次循环（图1 ) , DNA 扩增倍数可达2 n 倍。即Y = ( 1 + X ) n式中，Y 为DNA 扩增倍数；X 为扩增效率；n 为循环次数二、材料（1）
TNFRSF14基因编码的功能和结构描述
这个基因编码肿瘤坏死因子受体超家族的一个成员。编码蛋白在激活炎症和抑制t细胞免疫反应的信号转导途径中发挥作用。它与单纯疱疹病毒（hsv）包膜糖蛋白d（gd）结合，介导其进入细胞。选择性剪接导致多个转录变体。This gene encodes a member of the TNF (tumor ne
RPS14基因编码的功能和结构描述
核糖体是催化蛋白质合成的细胞器，由一个小的40s亚基和一个大的60s亚基组成。这些亚基由4种RNA和大约80种结构上不同的蛋白质组成。这个基因编码一个核糖体蛋白，它是40S亚单位的一个组成部分该蛋白属于核糖体蛋白s11p家族。它位于细胞质中。文献中已经描述了利用替代转录起始位点的转录变体。作为编码核
PRDM14基因编码的功能和结构描述
该基因编码prdi-bf1和riz同源结构域（prdm）家族的一个成员。编码蛋白可能具有组蛋白甲基转移酶活性，并通过抑制分化标记基因的表达在细胞多能性中发挥重要作用这种基因的表达可能在乳腺癌中起作用。This gene encodes a member of the PRDI-BF1 and RIZ
GALNT14基因的结构特点和生理作用
该基因编码一种高尔基蛋白，是多肽n-乙酰半乳糖氨基转移酶（ppgalnac-ts）蛋白家族的成员。这些酶催化n-乙酰-d-半乳糖胺（galnac）转移到目标肽丝氨酸和苏氨酸上的羟基。编码的蛋白质已经被证明可以将galnac转移到像粘蛋白这样的大蛋白上。这种基因的改变可能在癌症的进展和对化疗的反应中起
PRDM14基因的结构特点和主要作用
该基因编码prdi-bf1和riz同源结构域（prdm）家族的一个成员。编码蛋白可能具有组蛋白甲基转移酶活性，并通过抑制分化标记基因的表达在细胞多能性中发挥重要作用这种基因的表达可能在乳腺癌中起作用。
MMP14基因的结构特点和主要作用
基质金属蛋白酶（MMP）家族的蛋白质参与正常生理过程中细胞外基质的分解，如胚胎发育、生殖和组织重塑，以及疾病过程，如关节炎和转移大多数基质金属蛋白酶是以非活性的前蛋白形式分泌的，当被细胞外蛋白酶切割时被激活。然而，由该基因编码的蛋白质是膜型mmp（mt-mmp）亚家族的成员；该亚家族的每个成员都包含
MYH14基因的结构特点和主要作用
这个基因编码肌球蛋白超家族的一个成员该蛋白代表传统的非肌肉肌球蛋白；不应与非传统肌球蛋白-14（MYO14）混淆肌球蛋白是肌动蛋白依赖的运动蛋白，具有多种功能，包括调节胞质分裂、细胞运动和细胞极性。该基因突变导致一种常染色体显性遗传性听力损伤。已发现该基因编码不同亚型的多个转录变体。
RPS14基因的结构特点和主要作用
核糖体是催化蛋白质合成的细胞器，由一个小的40s亚基和一个大的60s亚基组成。这些亚基由4种RNA和大约80种结构上不同的蛋白质组成。这个基因编码一个核糖体蛋白，它是40S亚单位的一个组成部分该蛋白属于核糖体蛋白s11p家族。它位于细胞质中。文献中已经描述了利用替代转录起始位点的转录变体。作为编码核
SOX14基因编码的功能和结构描述
这个无内含子的基因编码一个SOX（SRY相关HMG-box）转录因子家族的成员，该家族参与胚胎发育的调控和细胞命运的决定编码的蛋白质在与其他蛋白质形成蛋白质复合物后可作为转录调节因子。该基因突变可能与眼睑裂、上睑下垂、内眦赘皮综合征（bpes）和mobius综合征有关。This intronless
技术和方案20－对数生长
实验步骤展
技术和方案21－EMS诱变
实验步骤1.培养酵母细胞过夜，使細胞密度达到 2X108 个/ml。2.从同一培养物中转移两份 lml 的样品至离心管中，5000 g，离心 10s 收集细胞。3.丢弃上清，用无菌蒸馏水悬浮细胞，再离心收集细胞。4.重悬细胞在 1 ml 的无菌 0.1mol/L 磷酸钠中。5.用血球记数板测定细胞密
利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量
利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量 METHODS 25, 402–408 (2001)Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2－△△CT Method