基本方案1用DNA印迹杂交检测克隆抗原受体基因重排

实验材料DNA 样品试剂、试剂盒适当的限制性内切核酸酶正常和重排控制 DNA6 X gel 加样缓冲液3 X 和 2 X SSC预杂交液探针DNA杂交液高盐洗液低盐洗液仪器、耗材洁净的海绵跑胶缓冲液的循环泵Whatman 3MM 过滤纸UV 交联剂平台摇床培养器G50葡聚糖凝胶柱水浴离心导管有合适的紧的带盖的塑胶盒实验步骤展......阅读全文

用-Taq-DNA-聚合酶进行双脱氧测序反应实验

            试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 ddNTP dNTP 甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀释缓冲液

3.6.1-用-T4-DNA连接酶连接RNA分子

T4 DNA 连接酶可将双链复合物缺刻连接,其中包括 RNA-DNA 杂合链及 RNA-RNA 杂合链。实验材料T4DNA 连接酶T4 多聚核酸激酶RNA 供体受体寡核苷酸 cDNA 模板试剂、试剂盒10X 连接缓冲液[Y32P]ATP无 RNase 水l0 mmol LATPRNasin。无 RN

用-Taq-DNA-聚合酶进行双脱氧测序反应实验

热稳定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反应中应用外,还可用来替代测序酶或 Klenow 片段进行双脱氧链终止法测序。它在高温下(70°C) 进行等温链终止反应的能力可减少测序反应中由于模板 DNA 上引物假结合位点与引物退火错配产生的问题,它还可用于富含二级结构模板的测序。本实验源于分子克隆实验指南

人用重组DNA蛋白制品的制造的基本要求

人用重组DNA蛋白制品的制造主要包括工程细胞的制备、发酵或细胞培养,目的蛋白质的提取和纯化、制剂等过程。工程细胞的来源、管理及检定应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”和“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制”的相关要求。生产过程中使用的原材料和辅料应符合相关要求。应采用经过验证的

用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭实验

            实验方法原理 欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭,常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。 实验材料 DNA

用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭实验

实验方法原理 经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除,随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。实验材料 DNA 样品试剂、试剂盒 乙醇HClNaCl酚氯仿TETEN 缓冲液仪器、耗材 Dowex AG50W-X8实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙醇,HCl (1 mol/

新研究用DNA分子组装类生命“软机器人”

  美国和中国科研人员近期合作设计出一种以DNA(脱氧核糖核酸)为材料构成的类生命“软机器人”,可通过自身新陈代谢为驱动实现自主运动,未来有望用于开发生物芯片等。  发表在新一期美国《科学·机器人学》杂志上的研究显示,在这一系统中,DNA分子被合成组装为一种层级结构,在可提供能量的液体中按指令、自动

用原子力显微镜表征DNA纯化效果的实验

实验概要运用原子力显微镜(AFM)表征3种DNA纯化试剂盒对DNA的纯化效果。方法:PCR扩增K562/A02细胞mdr1基因DNA,分别以3种不同的DNA纯化试剂盒对PCR产物进行纯化后,按终浓度为10 ng・μl-1固定在用1 ng・μl-1 L型多聚赖氨酸预先处理过的新剥离的云母片上,用AFM

用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭实验

实验方法原理 欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭,常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。实验材料 DNA 样品试剂、试剂盒 乙醇水饱和的异戊醇或 n-丁醇酚TE仪器、耗材 透析管和夹离心机和转头实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙醇,水饱和的异戊醇或

用大片段基因组-DNA-克隆直接筛选-cDNA实验

            试剂、试剂盒 扩增缓冲液 DNA 聚合酶 DNaseI 限制性内切核酸酶 ATP 链霉亲和素-磁珠结合缓冲液 T4DNA 连接酶

用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA

实验方法原理 本方法由 Bowtell 法(1987) 改进而成,可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上,接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩上。缠在钩上的 DNA 从乙醇溶液中转出溶于所选择

为什么不推荐用孕妇血-CMVDNA-检测初次感染?

因为检测初次感染孕妇血液中的 CMV-DNA 的阳性率为 33.3%,而 IgG 阳性健康妇女的血液中的 CMV-DNA 的阳性率也为 33.3%。所以用孕妇血液中 CMV-DNA 进行感染的诊断是不可靠的。

出厂时必须批批检验-丽江用DNA检测牦牛肉

  丽江古城除了人多、酒吧多,还有一多就是牦牛肉多。从古城玉河广场沿着东大街走,二三十米就能见到一个卖牦牛肉的柜台,各种包装,各种口味,是游客们喜爱的零嘴和伴手佳品。但这些牦牛肉真的都是牦牛的肉吗?为了给牦牛肉验明正身,丽江市食品药品监督管理局近日出台了《丽江市牦牛肉制品生产流通管理办法》(以下简称

Aging:用DNA分析,你会比同龄人先“go-die”吗?

  生物年龄,决定你何时死亡  虽然我们的社会尚未步入完全老龄化年代,但是过去数十年的研究表明:我们的感知年龄(perceived age,也称表象年龄)或不同于我们的生理年龄。如果技术上可能,人类将预测自己的死亡速度,甚至是测试自己是否会比同龄人先“狗带”(go die ,去世的网络用语)。  由

用-PCR-来制备编码随机肽的双链-DNA-文库实验

            试剂、试剂盒 限制性内切酶和缓冲液 灭菌双蒸水 Tris-HCl 生物素标记的 PCR 引物 仪器、耗材

用-PCR-来制备编码随机肽的双链-DNA-文库实验

试剂、试剂盒 限制性内切酶和缓冲液灭菌双蒸水Tris-HCl生物素标记的 PCR 引物仪器、耗材 链霉抗生物素蛋白磁性珠琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂灭菌双蒸水(ddH20)10 mmol/LTris-HCl,pH8.02. 酶和酶缓冲液限制性内切酶和缓冲液

以双链-DNA-为模板的体外诱变:用-DpnⅠ选择

            实验材料 带 hsdR17 基因型的感受态大肠杆菌菌株 试剂、试剂盒 ATP 含有四种 dNTF 的混合溶液

科学家首次拍到细菌用长长秀发“抢”DNA的瞬间

  首先让我们看一下下面这张动图↓  觉得这张图里动来动去的绿色“长鼻子”是什么呢?你应该怎么也想不到,这是一个细菌正在大摇大摆“抢劫”DNA的场景吧!  这是印第安纳大学研究者利用他们开发的最新型染料,才能在显微镜下记录的珍贵图像资料。霍乱弧菌(Vibrio cholerae)伸出不到头发万分之一

他们用QD技术记录下了DNA病毒感染细胞过程

  新型冠状病毒牵动所有人的心,国内外的科学家们正在想一切办法了解这种病毒。  其实岂止冠状病毒,发现病毒的一百多年来,科学家们一直想搞清楚病毒是如何攻占细胞的。  最近,来自中国农科院哈尔滨兽医研究所的研究者们提出了一种新的观察方法,可以准确地追踪病毒感染细胞的路径,并用拍摄短片的方式记录下全过程

用-PCR-来制备编码随机肽的双链-DNA-文库实验

使用合成的寡核苷酸构建文库时,PCR 有两个重要的作用。第一,用与特定侧翼序列退火的引物来扩增文库,仅用少量的不同模板,就可以得到大量的 PCR 产物。第二,若要产生文库 DNA 的复杂互补链,PCR 合成法是有效的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒限制

澳大利亚研究人员用DNA技术来酿葡萄酒

        澳大利亚的研究人员正在研究不同葡萄的基因组型,以此来鉴定不同品种葡萄的DNA如何影响葡萄酒的口味。此外,研究者也在进行克隆选育的过程。  据澳大利亚广播公司(ABC)报道,来自西澳大利亚农业与食品部以及西澳大利亚大学的研究人员正在通过研究葡萄的遗传物质,来提高人们对不同品种葡萄的认识

日本团队用单分子动力学解析DNA杂交基本过程

    一项发表在《化学科学》(Chemical Science)上的研究成果显示,日本东京理工大学团队使用扫描隧道显微镜(STM)测量单分子电导率的变化来探索DNA“杂交”(由两条单链DNA形成双链DNA)。  该研究团队将单链脱氧核糖核酸(ssDNA)附着在由金制成的扫描隧道显微镜尖端,并通过一

用交换反应进行5突出端DNA分子的磷酸化

            实验方法原理 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应(Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是,它无需 DNA

用交换反应进行5突出端DNA分子的磷酸化

T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应(Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是,它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性(pH 6.4)的咪唑缓冲液中进行,以刺激酶促去

用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验

可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操作方法更快。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操

上海生科院:用CRISPR靶定DNA去甲基的新方法

  在哺乳动物细胞中,DNA甲基化精密地调节基因的表达,从而在许多生理和病理过程中起着举 足轻重的作用。近期,来自中科院上海生命科学研究院“百人计划“胡荣贵研究员带领的研究小组,在《Cell Discovery》发表题为“A CRISPR-based approach for targeted DN

用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化

实验材料 牛小肠碱性磷酸酶虾碱性磷酸酶蛋白酶 K限制性内切核酸酶DNA 样品试剂、试剂盒 氯仿EDTA乙醇酚氯仿SDS醋酸钠TETris-ClCIP 去磷酸化缓冲液SAP 去磷酸化缓冲液仪器、耗材 水浴或加热板实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L,pH 8.0)

用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化

实验材料牛小肠碱性磷酸酶虾碱性磷酸酶蛋白酶 K限制性内切核酸酶DNA 样品试剂、试剂盒氯仿EDTA乙醇酚氯仿SDS醋酸钠TETris-ClCIP 去磷酸化缓冲液SAP 去磷酸化缓冲液仪器、耗材水浴或加热板实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L,pH 8.0) 或 EG

用交换反应进行5突出端DNA分子的磷酸化

实验方法原理 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应(Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是,它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性(pH 6.4)的咪唑

用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验

            实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操作方法更快。 实验材料 限