用交换反应进行5突出端DNA分子的磷酸化
实验方法原理 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是，它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性（pH 6.4）的咪唑缓冲液中进行，以刺激酶促去磷酸化 (Berkner and Folk 1977)。交换反应的最佳 Km 值（ADP 为 300 μmol/L，ATP 为 10 μmol/L），均比在试验管中容易达到的值高，因此标记效率很少超过 30%。然而，交换反应效率通过在反应混合物中加入亚精胺和聚乙二醇大为改善（Lillehauget al. 1976; Harrison and Zimmol/Lmerman 1986a)。实验材料 T4 噬菌体多核苷酸激酶DNA试剂、试剂盒 ADP乙酸铵ATPEDTA乙醇咪唑缓冲液聚乙二醇仪器、耗材......阅读全文
用交换反应进行5突出端DNA分子的磷酸化
实验方法原理 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是，它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性（pH 6.4）的咪唑
用交换反应进行5突出端DNA分子的磷酸化
实验方法原理 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是，它无需 DNA
用交换反应进行5突出端DNA分子的磷酸化
T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是，它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性（pH 6.4）的咪唑缓冲液中进行，以刺激酶促去
含5’突出羟基端的DNA分子磷酸化
本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌体多核苷酸激酶的催化下，以放射性标记的形式重新将磷酸加到核酸上，这是一种广泛应用于 32P 标记探针的技术。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌
含5’突出羟基端的DNA分子磷酸化
实验方法原理 本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌体多核苷酸激酶的催化下，以放射性标记的形式重新将磷酸加到核酸上，这是一种广泛应用于 32P 标记探针的技术。实验材料 T4 噬菌体多核苷酸激酶DNA试剂、试剂盒 乙酸铵EDTA乙醇T4 噬菌体多核苷酸激酶缓冲液仪器、耗材
含5’突出羟基端的DNA分子磷酸化
实验方法原理 本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌体多核苷酸激酶的催化下，以放射性标记的形式重新将磷酸加到核酸上，这是一种广泛应用于 32P 标记探针的技术。
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
实验方法原理 在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。实验材料 T4 噬菌体多核苷酸激酶试剂、试剂盒 乙酸铵EDTA乙醇咪唑缓冲液聚乙二醇仪器、耗材 液体闪烁计数仪Sephadex G-50 离心柱Seph
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5'
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
实验方法原理 在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。 实验材料
用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化
实验材料 牛小肠碱性磷酸酶虾碱性磷酸酶蛋白酶 K限制性内切核酸酶DNA 样品试剂、试剂盒 氯仿EDTA乙醇酚氯仿SDS醋酸钠TETris-ClCIP 去磷酸化缓冲液SAP 去磷酸化缓冲液仪器、耗材 水浴或加热板实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0)
用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化
实验材料 牛小肠碱性磷酸酶 虾碱性磷酸酶 蛋白酶 K 限制性内切核酸酶 DNA 样品 试剂、试剂
用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化
实验材料牛小肠碱性磷酸酶虾碱性磷酸酶蛋白酶 K限制性内切核酸酶DNA 样品试剂、试剂盒氯仿EDTA乙醇酚氯仿SDS醋酸钠TETris-ClCIP 去磷酸化缓冲液SAP 去磷酸化缓冲液仪器、耗材水浴或加热板实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0) 或 EG
方案5－用－μLCESIMS/MS－对磷酸化多肽进行分析
实验材料IMAC 柱子上洗脱下来的多肽试剂、试剂盒乙酸七氯丁酸乙腈仪器、耗材HPLC 系统质谱仪micro-ESI 接口micro-LC 柱实验步骤1.根据制造商的建议，制备、清洗、平衡 uLC 柱。柱子的流速决定于柱子本身，一般 50um (内径）的柱子为 200nl/min 左右，100um (
标记双链DNA的3突出端
实验材料限制性内切核酸酶小牛胸腺末端转移酶模板 DNA试剂、试剂盒乙酸铵乙醇酚氯仿末端转移酶缓冲液仪器、耗材Sephadex G-50 离心柱实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵（10 mol/L )乙醇酚：氯仿（1:1，V/V)2. 酶和缓冲液适当的限制性内切核酸酶小牛胸腺末端转移酶5X 末端
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水ddNTPdNTP甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶Taq 酶稀释缓冲液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 标记的寡核苷酸引物仪器、耗材 微量离心管（0.5 ml) 或
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
热稳定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反应中应用外，还可用来替代测序酶或 Klenow 片段进行双脱氧链终止法测序。它在高温下（70°C) 进行等温链终止反应的能力可减少测序反应中由于模板 DNA 上引物假结合位点与引物退火错配产生的问题，它还可用于富含二级结构模板的测序。本实验源于分子克隆实验指南
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 ddNTP dNTP 甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀释缓冲液
用体细胞交换法进行基因定位
体细胞交换法基因定位三点测验和着丝粒距离法中所测定的都是发生在减数分裂中的染色体交换。1936年美国遗传学家C.斯特恩在果蝇中发现体细胞在有丝分裂过程中也可以发生染色体交换（见连锁和交换）。50年代中G.蓬泰科尔沃等在研究构窠曲霉时发展起来一种利用体细胞交换的系统的基因定位方法。在进行有丝分裂的杂合
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 二硫苏糖醇 dNTP 和 ddNTP 标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液 甲酰胺上样缓冲液 测序酶稀释缓冲
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
本方案参照了 Tabor 和 Richardson(1987a,1989b,1990) 的方法，采用单链 DNA 模板进行 DNA 测序（有关单链 M13 噬菌体和质粒 DNA 制备，请参见第 3 章的方案 4、8 和第 12 章的方案 1)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水二硫苏糖醇dNTP 和 ddNTP标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液甲酰胺上样缓冲液测序酶稀释缓冲液测序酶反应缓冲液含MgCl2测序酶酵母无机焦磷酸酶寡核苷酸引物模板 DNA放射性化合物仪器、耗材 离心机和转头微量离心管或微量滴定板实验步骤 材料缓充液和溶液去离子蒸
双脱氧ATP末端标记双链DNA的3突出端
实验材料 限制性内切核酸酶 小牛胸腺末端转移酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 乙酸铵
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化 实验材料 T4 DNA 连接酶 感受态细胞
纯水技术——树脂进行离子交换反应的性能和再生问题
一、交换能力 氢型阳离子交换树脂在水中可解离出氢离子（H +），当遇到金属离子或其它阳离子，就发生互相交换作用，但交换后的树脂，就不再是氢型树脂了。例如，当水中的阳离子如钙离子、镁离子的浓度相当大时，磺酸型的阳离子交换树脂中的氢离子，可和钙、镁离子进行交换，而形成「钙型」或「镁型」的阳离子交换树脂，
纯水技术——树脂进行离子交换反应的性能和再生问题
一、交换能力 氢型阳离子交换树脂在水中可解离出氢离子（H +），当遇到金属离子或其它阳离子，就发生互相交换作用，但交换后的树脂，就不再是氢型树脂了。例如，当水中的阳离子如钙离子、镁离子的浓度相当大时，磺酸型的阳离子交换树脂中的氢离子，可和钙、镁离子进行交换，而形成「钙型」或「镁型」的阳离子交换树脂，
纯水技术——树脂进行离子交换反应的性能和再生问题
一、交换能力 氢型阳离子交换树脂在水中可解离出氢离子（H +），当遇到金属离子或其它阳离子，就发生互相交换作用，但交换后的树脂，就不再是氢型树脂了。例如，当水中的阳离子如钙离子、镁离子的浓度相当大时，磺酸型的阳离子交换树脂中的氢离子，可和钙、镁离子进行交换，而形成「钙型」或「镁型」的阳离子交换树脂，
重组质粒(dna－recombinant－plasmid)的连接
质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA 片段( ＜10kb) 且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆，从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段，然后体外使两者相连接，再用所得到重组质粒转化细菌，即可完成。但在实际工作中，
用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭实验
实验方法原理 经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。 实验材料 DNA 样品
用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭实验
经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。实验材料DNA 样品试剂、试剂盒
用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭实验
实验方法原理 经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。实验材料 DNA 样品试剂、试剂盒 乙醇HClNaCl酚氯仿TETEN 缓冲液仪器、耗材 Dowex AG50W-X8实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙醇，HCl (1 mol/