冰冻切片免疫荧光
实验概要冰冻切片免疫荧光实验原理抗原抗体结合主要试剂固定液、梯度蔗糖、磷酸盐缓冲液、封闭液、一抗、荧光标记的二抗、DAPI、荧光抗淬灭封片剂主要设备冰冻切片机、荧光显微镜或激光共聚焦显微镜实验材料组织切片实验步骤切片1.提取新鲜组织置于4%多聚甲醛中固定；2.梯度蔗糖脱水：10%-20%-30%；3.冰冻包埋剂包埋并切片，切片厚度4~10μm;4.-20℃保存切片并尽快染色以防止蛋白降解； 染色1.冰冻切片取出复温至室温，或用烤片机烤干切片表面水分；2.丙酮或多聚甲醛固定5-10min;3.PBST洗5 minx3次; 4.（可选）抗原修复可选；5.（可选）0.1% Triton-100X透膜；4.加山羊血清封闭液或3%BSA封闭30min;5.弃去封闭液，滴加相应抗体（1%BSA稀释），保湿盒中4℃过夜；6.PBST洗 5 minx3次; 7.滴加二抗，避光，37℃，1-2 h；8.PBS洗 5 minx3......阅读全文
组织切片的免疫荧光标记实验
实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。实验材料组织样品试剂、试剂盒PB
组织切片的免疫荧光双标记实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 第一抗体IgG实验步骤 1. 当进行双标记实验时，最重要的准则是：第一抗体应为不同类型，从而使第二抗体能分别识别之。第一抗体最好是来源于不同免疫动物。但如使用单克隆抗体，这一要求就有可能达不到，当使用单抗时，不同型的抗体如IgG和IgM，可被第二抗体确切区分
石蜡切片(paraffin－sections)免疫组化染色步骤
1、载玻片的处理：抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。这里选用ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：（1）APES：现用现配。将洗净的玻片
组织切片的免疫荧光双标记实验
间接免疫荧光显微镜检术可使两种或更多种抗原可以在同一切片，同一时间内被显示出来，可用于（1）细胞标记；（2）免疫荧光筛选干细胞。实验方法原理通过使用激发波长及发射波长均不相间的荧光染料而进行的。通常限用两种荧光染料，最常见的是罗丹明（绿光激发，发射红光）和荧光素（蓝光激发、发绿光）联合使用。实验材料
石蜡切片免疫组化染色实验操作流程
1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时） 。① 二甲苯 、II，各 10 分钟。② 梯度酒精：100%，2 分钟 95%，2 分钟 80%，2 分钟 70% 2 分钟。③ 蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2 O2 ，室温 10 分
石蜡切片的酶免疫组化注意事项
一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？ 一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法： 1.一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然
石蜡切片免疫荧光TUNEL和NEUN双标染色
石蜡切片免疫荧光TUNEL和NEUN双标染色曾经作过脑组织的TUNEL，也指导过别人做心肌的TUNEL，谈谈我的意见：蛋白酶K37度30min，好像有点偏长，我是10min。你是NBT/BICP显色的话，这说明你用的是AP系统，而不是HRP这样的话就不是用3%H2O2来去除内源性酶的了，（H2O2是
石蜡切片的酶免疫组化注意事项
一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法：1.一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然后水洗，烘干既可用于贴
石蜡切片与冷冻切片的区别
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组 织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片， 而那些稳
石蜡切片和冰冻切片的比较
（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细
免疫组织化学法实验——组织切片的免疫荧光标记
实验材料组织样本冰冻切片置于载玻片上试剂、试剂盒PBS第一抗体5〜10μg mL第二抗体特异性针对第一抗体的抗体突光染料结合物封片介质（如Gelvatol)仪器、耗材塑料玻片盒或加湿盒实验步骤1) 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒。从冰冻切片机或冰箱取出载有切片的载玻片，交叉放入玻片盒（每边约6片
徒手切片
玻片标本的一种。生物实验中用来观察形态结构的一种用徒手制作的切片，不需要什么特殊工具和机械设备，而将欲观察的材料，用锋利的切片或剃刀切成极薄的薄片，薄片应完全透明，切好后，移置一滴水中，放载玻片上，即可进行显微观察。此法适宜观察新鲜的生物材料，方法简便，容易掌握。
冰冻切片
实验概要冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。实验步骤1. 冷冻切片的制作方法 1) 将恒冷箱冷冻切片机的速冻头和箱内温度调整到适宜的切温度，一般情况下为-18～-25℃。 2) 在标本冷冻托上涂布一层冷冻包埋剂——OCT
连续切片
中文名称连续切片英文名称serial section定 义从同一组织包埋块上连续切成的切片系列。通过对连续切片的分析可构建细胞或组织的三维图像。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
电镜所需的切片之超薄切片介绍
超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低， 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄（一般厚度为40～50 nm） ，即为超薄切片 。
石蜡切片和半薄切片的制作
实验概要本方法介绍了石蜡切片和半薄切片的制作流程。主要试剂4%戊二醛固定液(pH7.0磷酸缓冲液)，乙醇，二甲苯，纯石蜡，蜂蜡，树脂胶主要设备真空泵，AO手摇式切片机，Olypmus BH-2型显微镜，LKB超薄切片机实验步骤1. 石蜡切片的制作 1) 取材固定新鲜配置4%戊二醛固定液(pH7.
冷冻切片操作
1.冷冻切片机要始终处于运行状态，即使在不做冷冻切片时也要开着致冷，不能时开时关，以免影响机器寿命。2.手术取下的新鲜组织不要固定，因固定过的组织不利于切片，而且还会影响染色。3. 用OCT做包埋剂，起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上，OCT不要太多，以免流到固定头外，组织表
超薄切片技术
在透射电镜的样品制备方法中，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
组织切片机切片边缘着色的原因分析
原因分析：a组织边缘与玻片粘贴不牢，边缘组织松脱漂浮在液体中，导致洗涤不彻底；b切片上滴加的试剂未充分覆盖组织，边缘的试剂容易首先变干，浓度较中心组织高而致染色深。解决措施：组织的前期处理应规范，试剂要充分覆盖组织，尽量避免选用坏死较多的组织。
组织切片机切片背景过深的原因分析
原因分析：a.漂洗不够；b.切片或涂片过厚；c.蛋白质封闭不够或所用血清溶血d.使用全血清抗体稀释不够；e.底物成色反应过久；解决措施：对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。
石蜡切片与冷冻切片的区别是什么
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的
徕卡冰冻式切片机切片制样方法
电镜样品制备技术直接影响样品的结构和反差。制备高质量的超薄切片，是发挥透 射电子显微镜优良性能的前提。透射电子显微镜的分辨率理论上可达到o．3nm左右， 但是六于样品制备技术的限制，分辨率很难达到理论值。对于生物样品来说，一般只能 达到2nm的水平。 高质量的超薄切片基本特征：①样品应该能耐受电子束
石蜡切片与冷冻切片的区别是什么
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组 织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片， 而那些稳
振动切片方法及与石蜡、冰冻切片的比较
振动切片用振动切片机，可以把新鲜组织（不固定不冰冻）切成厚片20～10μm，以漂浮法在反应板进行免疫组织化学染色，然后在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位，修整组织进行后固定，最后按电镜样品制备、脱水、包埋、超薄切片、染色观察等。组织不冰冻，无冰晶形成和组织抗原破坏，在免疫组化染色前避免了组织脱水、透
组织切片的免疫过氧化物酶标记实验
实验材料组织样品试剂、试剂盒PBS过氧化氢PAP二氨基联苯胺仪器、耗材离心机加湿盒培养箱实验步骤1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。 2. 待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片
组织切片的免疫过氧化物酶标记实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 PBS过氧化氢PAP二氨基联苯胺仪器、耗材 离心机加湿盒培养箱实验步骤 1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。 2. 待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿
组织切片机所有切片呈阴性的原因分析
原因分析：a.缓冲液内含叠氮化钠，抑制酶的活性；b.染色未完全按照操作步骤进行；c.漏加一种抗体或抗体失活；d.复染或脱水剂使用不当；e.底物中加入的过氧化氢少或失活。解决措施：设立“阳性对照”。如果阳性对照有了表达，说明染色的全过程和所有试剂都没有问题。如果此时测试片仍为阴性，便是真实的阴性，说明
组织切片机所有切片呈阳性的原因分析
原因分析：a缓冲液配置中未加氯化钠和PH值不准确，洗涤不彻底；B使用已变色的呈色第五溶液，或呈色反应时间过长；C过氧化氢浓度过高，呈色反应过快且粘附剂太厚；D切片在染色过程中抗体过浓，或干片了；E抗体孵育时间过长。解决措施：缩短抗体孵育时间和呈色反应时长，染色过程中防止出现干片情况。
石蜡切片如何检测线粒体功能需要多少石蜡切片
线粒体有关的脑组织染色问题(线粒体,脑组织,石蜡切片,认知功能,心理)] 本人心理专业，研究认知功能方面，无奈需要生理的指标，因此对动物认知相关的脑区进行取材，主要想测线粒体功能和形态方面的指标。可是本人对这方面一窍不通，急需大家伙帮忙。我现在把组织分为两组进行处理，一部分-80冷藏了，好像是做分子
抚生试剂免疫组织化学组织细胞的组织切片
一、载玻片的处理 免疫组化染色时间长，特别是双PAP、免疫金银染色等方法，所需时间更长，并要反复洗涤，切片在试剂中长时间浸泡，经多次洗涤，极易造成脱片而影响实验的结果。需采用以下方法处理：载玻片先置于洗洁液(或洗衣粉溶液)中煮沸30min，清水洗干净后放人清洁液中浸泡12—24h，漂洗，用蒸馏