动物细胞基因组DNA的制备

实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA的制备原理及操作流程。本方法一般可从5×107培养的非整倍体细胞(如HeLa细胞)中获得大约200μg DNA。DNA的长度可达到100~150kb。20ml正常血的DNA产量约为250μg。实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA(乙二胺四乙酸二钠)存在下保持很高的活性。在提取DNA的反应体系中,SDS可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离,EDTA则抑制细胞中DNase的活性......阅读全文

DNA-methyltransferase-Assay

Methylated CpG island Amplification Protocol written by Minoru Toyota2. Materials2.1. MCARestriction enzymes SmaI, XmaIT4 DNA ligaseTaq DNA polymerase

DNA酶切

一、 DNA酶切反应   1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶

DNA怎么提取

DNA提取的几种方法(1).浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐

Cosmid-DNA-Isolation

实验概要Isolation of high yields of highly pure cosmid DNA using PureLink™ HiPure Plasmid Purification Kits.实验原理The  PureLink™ HiPure Plasmid Purification

DNA酶试验

DNA酶试验是检验技师考试的内容,医学教育网搜集整理相关内容供大家参考。(1)原理:某些细菌产生DNA酶,可使长链DNA水解成寡核苷酸链。因为长链DNA可被酸沉淀,寡核苷酸链则溶于酸,所以当在菌落平板上加入酸后,会在菌落周围出现透明环。(2)培养基:0.2%DNA琼脂平板。(3)方法:将被检菌点种于

DNA重组技术

连接反应的策略    可以采用几种策略来进行外源DNA片段和质粒载体的连接。对此,可依据外源DNA片段未的性质,以及质粒载体与外源DNA上限制酸切位点的性质来作出选择。(一)外源DNA片段未的性质带有各种未的外源DNA的克隆方法见下表:────────────────────────────────

DNA点杂交

DNA点杂交l        DNA斑点印迹的制备预备1.冰浴中以70W左右的超声波处理基因组DNA 1min,用琼脂糖凝胶电泳检测片段大小,这些片段大小均应为7~10kb。2.用TE缓冲液将DNA稀释至0.5μg/μl。 斑点印迹的制备1.加热5μg DNA(在10μl TE缓冲液中)至95℃ 1

DNA抽提

DNA抽提(主要内容如下)·   Working with DNA·   DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms·   DNA Extraction from Cell and Tissue·   Mitochondria DNA Isola

DNA-isolation-extraction

CTAB TECHNIQUE / Method / Schedule / Protocol FOR DNA ISOLATION / DNA EXTRACTION FROM PLANT LEAF / LEAVES SAMPLES (see also DNA RNA double isolation

DNA测序市场

DNA测序市场:快照  DNA 测序预计将在 2021-2031 年的预测期内显示出有希望的增长,因为它在微阵列和其他分析方法等各种应用中的执行。DNA测序具有成本效益,具有很高的准确性和速度,甚至可以从低样本中得出输出。DNA测序技术已经从第一代升级到第三代。DNA 测序系统因其功能而受到关注,可

DNA指纹法

DNA Fingerprinting (David F. Betsch)the theory, procedures and applications  ·         DNA Fingerprinting (Polyarylamide Gel) (Caltech)BAC DNA sample

DNA纯化实验

实验方法原理 硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被分离开来。实验材料 PCR产物试剂、试剂盒 PCR清洁试剂盒仪器、耗材 96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板实验

DNA-mobility-in-gels

1. Migration of marker dyes in native polyacrylamide non-denaturing gels Gel % Bromophenol blue (BP) Xylene cyanole (XC)   3.5  100 460   5.0

纯化DNA实验

从哺乳动物细胞或组织分离DNA 基因组DNA的快速纯化 纯化质粒(碱裂解法)             实验材料 细胞

DNA-and-RNA-EXTRACTIONS

A protocol / method / schedule /procedure for extraction / isolation of both DNA and RNA from the same material typically plant leaf / leaves(See also

怎样鉴定dna

DNA亲子鉴定流程:1、DNA提取把样本细胞核中所含有DNA提取出来,然后进行一定的纯化,化除样本中的杂质。2、PCR扩增PCR的中文名为聚合酶链式反应,简单的说,PCR扩增这一步就是把我们所需要的片段通过酶促反应,在PCR仪上进行大量复制,放大到通过某些专用仪器可以看到的程度。3、后PCR反应这一

DNA纯化实验

PCR清洁试剂盒纯化法             实验方法原理 硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油

DNA测序技术

目前还有一种基于半导体芯片的新一代革命性测序技术——Ion Torrent。该技术使用了一种布满小孔的高密度半导体芯片, 一个小孔就是一个测序反应池。当DNA聚合酶把核苷酸聚合到延伸中的DNA链上时,会释放出一个氢离子,反应池中的PH发生改变,位于池下的离子感受器感受到H+离子信号,H+离子信号再直

DNA-Sequencing-Gels

DNA Sequencing GelsBuffers and gel solutionsLong Ranger: we started using this in early 1995. Great stuff; the best thing is that the gels are not sti

Preparing-Lambda-DNA

Preparing Lambda DNA1- Coliphage lambda DNA is a widely used vector for recombinant DNA. The middle third of its 48,000 bp contains no genes required

DNA提取仪

DNA提取仪也叫核酸纯化仪,是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。

DNA的定量

一、 实验原理核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌吟环和嘧啶环的共轭双键,在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰,其吸收强度与核酸的浓度成正比,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。1 OD260相当于dsDNA 50 ug/ml,ssDNA 33 ug/ml和ssRNA 40 ug/ml。可以

DNA连接试验

当我们已经获得目的基因片段,选择好适当的克隆(或表达,转化)质粒载体, 并确定重组方案后,下面要进行的就是DNA片段之间的体外连接,从而获得重组子。 此重组子可转入相应的宿主菌中用于对目的基因的扩增以及目的基因表达(如现代基因工程药物的生产),还可用于序列分析和转基因等重要生物技术的研究中。 DNA

Chromosomal-DNA-Isolation

Chromosomal DNA IsolationMETHOD:Grow cells in 2-5 ml broth to late log phase.Pellet 1-2 ml cells in microfuge.Resuspend cells in 400 µl TES (50 mM Tri

抗双链DNA抗体(aniDNA)的简介

  抗DNA抗体包括抗双链DNA抗体、抗单链DNA抗体和抗zDNA抗体。 检验中一般是指与双链DNA和单链DNA都反应的抗双链DNA抗体。 抗双链DNA抗体阳性是系统性红斑狼疮的标志,阳性率达90%以上,有较高的特异性,因而抗双链DNA抗体对系统性红斑狼疮的诊断和治疗监控极重要。抗双链DNA抗体在其

纯化DNA实验_基因组DNA的快速纯化

试剂、试剂盒尾部缓冲液蛋白酶 K仪器、耗材离心管玻璃棒实验步骤第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中,加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K,在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液(配 25 ml)50 mmol/L

DNA拓扑异构酶(DNA-topoisomerase)的相关介绍

  为催化DNA拓扑学异构体相互转变的酶之总称。催化DNA链断开和结合的偶联反应,为了分析体外反应机制,用环状DNA为底物。在闭环状双链DNA的拓扑学转变中,要暂时的将DNA的一个链或两个链切断,根据异构体化的方式而分为二个型。切断一个链而改变拓扑结构的称为Ⅰ型拓扑异构酶(top -oisomera

A型DNA与B型DNA的区别对比

A型DNA与B型DNA是在两种环境下同种物质不同的形式。B型DNA:92%RH,钠盐,溶液和细胞中天然状态中的DNA多以此状态存在A型DNA:75%RH,钠盐A型DNA也是由反向的两条多核苷酸链组成的双螺旋,为右手螺旋,但螺旋体较宽而短,碱基与中心轴之倾角也不同,呈19度。

植物DNA提取中怎样检测提取到DNA质量

第一种方法是测量260/280的比例,判断是否有蛋白质的污染。在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收,A260与A280之比应在1.75-1.80之间。低于此值表明制备物中残留蛋白质成分较高或含有酚,高于此值表明有RNA的残留。第二种方法是凝胶电泳分析,看有无断裂降解。影响DNA提取质量的

B型DNA和Z型DNA的要点介绍

  1.两条反向平行的互补双螺旋链,一条方向为5‘→3’,另一条方向为3‘→5’,围绕同一中心纵轴,从右向上盘旋。  2.双螺旋磷酸-脱氧核糖主链在外,位于内的碱基平面与中心轴垂直。  3.每个碱基相聚0.34nm,同条链相邻碱基夹角36度,每10个碱基形成螺旋1周,螺距3.54nm。  4.露于螺