OsAGAP的Northern杂交
实验概要本实验参照Sambrook等(1989)的方法进行转膜，杂交。实验步骤1. RNA样品的电泳转膜将适量的琼脂糖溶于水，微波炉加热使之完全溶解，并冷却至60℃；将甲醛溶液、琼脂糖水溶液、5X甲醛凝胶电泳缓冲液按1:3.5:1.1比例混合，灌制凝胶。将不同材料的上样量调成一致，均为35ug，与样品buffer混合制样，65℃温育15min，冰浴冷却后，加入loading buffer上样。DEPC水浸泡过的电泳槽中，加入1X甲醛凝胶电泳缓冲液((5X甲醛凝胶电泳缓冲液：MOPS 10.3g；乙酸钠2.72g；EDTA(0.5M pH8.0)5ml；ddH2O加至500mI；pH 7.0)，3-4v/cm电泳。待溴酚蓝迁移至凝胶的2/3处，停止电泳。将凝胶转移至一个培养皿内，切去凝胶左上角以作标记；将凝胶用灭菌的DEPC水淋洗3-4次，然后浸泡于数倍体积的20 X SSC温和摇动45min；利用毛细作用转膜(转移缓冲液......阅读全文
OsAGAP的Northern杂交
实验概要本实验参照Sambrook等(1989)的方法进行转膜，杂交。实验步骤1. RNA样品的电泳转膜将适量的琼脂糖溶于水，微波炉加热使之完全溶解，并冷却至60℃；将甲醛溶液、琼脂糖水溶液、5X甲醛凝胶电泳缓冲液按1:3.5:1.1比例混合，灌制凝胶。将不同材料的上样量调成一致，均为35ug，与样
OsAGAP－mRNA原位杂交
实验概要本实验以OsAGAP mRNA为试材介绍了原位杂交技术，包括：原位杂交正义、反义探针制备，原位杂交探针半定量，植物材料的固定与石蜡包埋，切片与粘片，杂交和显色等过程。实验步骤1. OsAGAP原位杂交正义、反义探针制备对OsAGAP cDNA全长在GenBank中做BLAST分析，选取特
OsAGAP在拟南芥中的功能分析
实验概要本实验对水稻小G蛋白ArfGTPase激活蛋白OsA GAP在拟南芥中的功能进行了分析，首先构建了OsAGAP在拟南芥中的正义表达载体，利用农杆菌介导的真空抽滤法转化拟南芥，筛选拟南芥阳性苗，然后用组织PCR和 Southern杂交做了检测。实验材料1. 所用拟南芥((Arabidopsis
OsAGAP蛋白的Arf－GTPase激活活性测定
实验概要本实验诱导表达了Arf-GST和OsAGAP-GST融合蛋白，纯化后测定了OsAGAP蛋白的Arf GTPase激活活性。主要试剂1. GST融合蛋白纯化试剂盒(Pharmacia公司)2. Enzcheck TM Phosphate检测试剂盒(Molecular ProbesCo.)实验步
基因枪轰击洋葱表皮观察GFP瞬时表达
实验概要本实验在构建了OsAGAP瞬时表达载体的基础上，采用基因枪轰击洋葱表皮观察了GFP的瞬时表达。主要试剂高渗培养液(MS无机盐、40g/L甘露醇)，高渗固体培养基(MS无机盐、40g/L甘露醇、0.7% agar)，无水乙醇，无菌去离子水，12.5 M CaCl2，0.1 M亚精胺，等渗培养基
基因枪轰击洋葱表皮观察GFP瞬时表达
实验试剂高渗培养液(MS无机盐、40g/L甘露醇)，高渗固体培养基(MS无机盐、40g/L甘露醇、0.7% agar)，无水乙醇，无菌去离子水，12.5 M CaCl2 ，0.1 M亚精胺，等渗培养基(MS培养基)实验设备高速离心机，1.5 ml Ep管，涡旋器，超净台，基因枪，气瓶，激光共聚焦显微