125IUdR致C6胶质瘤细胞损伤的模型
一、材料:125I-UdR购自中科院北京原子能所,放化纯度>95%。脱氧腺苷(AdR)、脱氧鸟苷(GdR)、脱氧胞苷(CdR)、脱氧尿苷(UdR)均为Sigma公司产品。二、方法1、细胞培养:当癌细胞贴壁生长超过瓶壁的70%,用胰蛋白酶消化30-40s,传代培养。肿瘤细胞每3-4d传代1次。在50ml培养瓶中,细胞数达2×106个细胞后,取处于对数生长期的细胞进行细胞存活实验。2、细胞存活实验:将制备好的细胞按1×105个/ml细胞接种于25ml的培养瓶中,培养20小时,实验组加入125I-UdR74KBq/ml及不同浓度的AUCG(10μM、20μM、30μM、50μM、80μM)再共同孵育24h后,100倍的倒置显微镜下观察细胞形态,收集细胞,制成单细胞悬液,调整细胞密度,接种于25ml的培养瓶中,2-3d后换液,8-9d后细胞集落形成,每个剂量点设复瓶4瓶,同时设对照组未加AUCG,另设空白组,均为4个复瓶。计算细胞......阅读全文
125IUdR致C6胶质瘤细胞损伤的模型
一、材料:125I-UdR购自中科院北京原子能所,放化纯度>95%。脱氧腺苷(AdR)、脱氧鸟苷(GdR)、脱氧胞苷(CdR)、脱氧尿苷(UdR)均为Sigma公司产品。二、方法1、细胞培养:当癌细胞贴壁生长超过瓶壁的70%,用胰蛋白酶消化30-40s,传代培养。肿瘤细胞每3-4d传代1次。在50m
UVB致皮肤角质形成细胞的损伤模型的制作方法
材料和方法1 试剂:胎牛血清(北京军医兽医防治中心) ,DMEM培养液(GIBCO ,美国) ,碘化丙啶PI(Sigma) ,Triton2X100 (BDH) ,Hoechst33342(Sigma) ,RNase (Sigma) 。2 细胞及实验分组:人角质形成细胞株Colol6 (由北京师范大
内皮细胞损伤模型
一、细胞因子损伤模型将内皮细胞铺板后待即将单层融合时,换无血清或低血清培养基,加入细胞因子如IL-2,TNF-alpha、IFN等,共同孵育一段时间,或者加入药物与之共孵育,或者加细胞因子之前先加入药物孵育后,再加细胞因子,结束后测一些指标如MTT、LDH、NO、等等看药物对细胞因子损伤的保护作用。
腹部辐射致肠粘膜屏障损伤模型的建立
腹部受辐射(Abdominal Radiation,AR)致严重的肠粘膜屏障损伤,如放射性肠炎,在平、战时均可发生。辐射损伤作为肠道粘膜屏障损害的主要原因之一,可致增殖的隐窝细胞死亡,肠道细菌易位,粘膜溃疡、坏死、出血,肠梗阻,肠瘘,脓肿形成和腹膜炎,最终导致内源性败血症和多器官功能衰竭等致死性并发
肾小管细胞氧化性损伤模型
材料:DMEM培养基(Gibco BRL Co生产), 无糖DMEM培养基(Gibco BRL Co生产),NRKSIE 鼠。肾小管细胞株(购于华西医科大学内科实验室),乳 酸钠(国产分析纯试剂)。 方法 肾小管细胞培养 NRKSIE鼠肾小管细胞 用0.25% 胰蛋白酶消化,将小管细胞分离成单个细胞
常见体外肝细胞损伤模型
1.四氯化碳体外损伤肝细胞模型原代培养的正常大鼠肝细胞培养24h(贴壁良好)后,置培养皿于一密闭的塑料盒,内置四氯化碳0.4M容积,37度90min,造成肝细胞损伤的模型,后转入正常培养,进行下一步实验。(即熏蒸法)肝细胞培养12h后,吸弃上清,更换培养液并加入CCL4 8mM(事先用DMSO溶解,
骨骼肌细胞损伤模型的建立
1 材料 地塞米松磷酸钠注射液(江苏第三制药厂,批号000706) ;RPMI - 1640 培养基(GIBCO ,USA)(每升含10 %小牛血清、L-谷氨酰胺0. 33mg、青霉素100u、链霉素100u、pH-7. 4) ; 胰蛋白酶(Difco ,Lot :12885655) ; 四甲基氮
骨骼肌细胞损伤模型的建立
1 材料 地塞米松磷酸钠注射液(江苏第三制药厂,批号000706) ;RPMI - 1640 培养基(GIBCO ,USA)(每升含10 %小牛血清、L-谷氨酰胺0. 33mg、青霉素100u、链霉素100u、pH-7. 4) ; 胰蛋白酶(Difco ,Lot :12885655) ; 四甲基氮
Aβ损伤模型
取出生1-2d的乳鼠,用麻醉剂处死。在D-hanks液中取大脑并分离海马组织,胰蛋白酶消化,获得细胞悬液,胎盘蓝染色进行死活细胞记数,将细胞以5×105/ml的密度接种于预先经L-多聚赖氨酸处理的96孔和24孔培养板,其中24孔板中预先放置有盖玻片。细胞维持在培养液中,置入5%CO2,饱和湿度的培养
脊髓星形胶质细胞机械性损伤的体外培养模型
1.材料与方法取新生的wistar 大鼠脊髓,剪碎,0125 %胰蛋白酶消化1h ,用含血清的DMEM培养液终止胰蛋白酶的作用; 而后吹打成散在的单个细胞,进行细胞计数,按5 ×105 个Pcm2 密度进行接种。培养至第10天时加10mM Leu2methy12ester 除杀小胶质细胞。于16d
DMAMCL有望成为脑胶质瘤治疗药
目前非常缺乏具有选择性的靶向肿瘤干细胞的小分子化合物,而且已知的一些化合物也没有共同的结构特征。本研究发现愈创木倍半萜内酯(GSLS)及其衍生物,可以选择性地抑制急性骨髓性白血病(AML)的干或祖细胞。天然化合物愈创木倍半萜内酯化合物(GSLS) arglabin,是已进入临
125IUdR释放试验测定NK细胞活性
自然杀伤(NK)细胞参与了机体免疫防御的第一道防线,主要用于(1)免疫监视系统中抗肿瘤抗病毒(2)免疫调控。实验方法原理25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-UdR标记体外
125IUdR释放试验测定NK细胞活性
实验方法原理25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-UdR标记体外传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞,以外周血分离的单个核细胞或小鼠脾细胞作为效应细胞,进行体外NK细胞活性检测。被
125IUdR释放试验测定NK细胞活性
实验方法原理 25I-UdR(125I-2′脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的类似物,作为DNA合成的前体物,能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此,可用125I-UdR标记体外传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞,以外周血分离的单个
体内肝损伤模型(酒精)
一、材料 纯系SD雄性大鼠,体重180g~200 g,由浙江大学医学院实验动物中心提供。食用酒精选用北京酿酒总厂出品的56度红星二锅头。二、方法 将大鼠随机分成5组,饲养在23℃~25℃室内,自由进食、进水;根据大鼠体重,A、B、C、D组每日用56°红星二锅头白酒以10ml/1Kg分别灌胃 0、4周
视神经损伤模型实验
实验方法原理 作为中枢神经的重要组成部分,视神经及其胞体已成为中枢神经损伤修复的重要研究对象。中枢神经损伤修复研究中的许多重大发现,最初都是以视神经损伤为模型开展的。其中最为著名的,是苏国辉和Aguayo采用周围神经移植诱发视网膜神经节细胞(以下简称节细胞)再生的开拓性研究。视神经由众多神经纤维组成
视神经损伤模型实验
视神经横断模型及荧光金逆行标记 坐骨神经移植及荧光金逆行性标记 荧光金逆行性标记(上丘及外侧膝状体) 实验方法原理 作为中枢神经的重要组成
培养乳鼠心肌细胞的缺氧损伤模型和缺氧预处理(APC)模型
原代心肌细胞培养及APC模型的制作参照先前报道的方法[2]。即取出生后1-2 d乳鼠心尖部组织, 胰酶消化, 离心后用含20%小牛血清的DMEM培养基制成细胞悬液, 过滤, 按差速贴壁分离法纯化心肌细胞, 以1×105 cells/cm2接种于24孔板, 每24 h更换培养液。贴壁生长2 d, 于实
最新研究显示:菊科“土三七”可致肝细胞损伤
一项研究显示,菊科“土三七”内含有一种名叫“吡咯烷”的毒物,会导致肝脏血窦中内皮细胞损伤,继而使小静脉由于内膜炎症纤维化而闭塞,导致肝脏的血“只进不出”,引起门静脉压力增加,出现胸腹水、食管静脉曲张等症状。该研究成果近日发表在最新一期国际著名杂志《肝脏病学》上。 此研究由复旦大学附属中山医院消
脑胶质瘤研究体内外模型综述
胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,约占中枢神经系统肿瘤的40-60%。 恶性胶质瘤是中枢神经系统的顽疾之一,有着预后差、复发率高等特点,现有的治疗方法如手术、放疗和化疗效果均不满意。近年来随着分子生物学技术的发展,肿瘤的基因治疗已成为当前神经外科领域的热点课题。子曰:“工欲善其事,必先利其
脑胶质瘤研究体内外模型综述
胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,约占中枢神经系统肿瘤的40-60%。 恶性胶质瘤是中枢神经系统的顽疾之一,有着预后差、复发率高等特点,现有的治疗方法如手术、放疗和化疗效果均不满意。近年来随着分子生物学技术的发展,肿瘤的基因治疗已成为当前神经外科领域的热点课题。子曰:“工欲善其事,必先利其
臭氧损伤衰老动物模型
实验材料2-3月灵小鼠20月龄大鼠试剂、试剂盒水混合饲料垫料仪器、耗材木制臭氧发生柜鼠笼饮水壶衰老的自由基学说认为:衰老与自由基引起的生物膜脂质过氧化导致膜结构损伤和功能失活有密切关系。生理情况下,自由基不断产生,也不断被机体内防御自由基的酶系统消除,从而维持生理性低水平、有利无害、稳定平衡的自由基
肝损伤动物模型介绍
这真是一个可怕的事实:同为黄种人,生长在中国的肝病发病率却是生活在欧美的3倍!中国无疑成为了“肝病大国”,约12个人就有1人患肝病。面对如此严峻的现状,对肝相关疾病机制研究和药物开发就变得极为迫切。肝脏是人体重要的器官,执行合成代谢、解毒和免疫防御等许多功能。外界环境各类因素常导致肝损伤,长期的肝损
新模型研究血管损伤影响脊髓损伤后的结局恢复
显微注射技术 中枢神经系统不具有像周围神经系统一样的可塑性,并且外伤是一种不可逆损伤。除了最初的机械性损伤,还将伴随长期持久的级联性损伤,即继发性损伤,继发性损伤发生后会引起进一步的轴突损伤和神经元死亡。继发性损伤机制包括出血、组织缺血、血脊髓屏障破裂、炎症、谷氨酸盐毒性,以及脱髓鞘,细胞
脊髓机械性损伤模型的制作实验——大鼠脊髓NYU模型
实验方法原理脊髓挫伤是临床最常见的脊髓损伤类型(交通事故、高空坠物、运动损伤等造成),NYU模型是应用最广泛的鼠类脊髓挫伤模型,该模型可以很好地模拟临床,适用于病理和脊髓再生等多方面研究。双侧椎板(T8)去除术后,使用脊髓撞击仪(NYU大鼠脊髓撞击仪I型),以不同重量的下落重物撞击脊髓,造脊髓撞击伤
C6流式细胞仪
Accuri的C6流式细胞仪系统是一种全功能、二激光、六探测器分析流式细胞仪系统,包括:C6流式细胞仪、CFlow软件、电脑。C6的流式细胞仪系统提供最畅销的流式细胞仪,而且价格少几倍。C6流式细胞仪系统以敏感的探测器捕获和激发前散射光和旁散射光,以及4个荧光探测器的可调光学过滤器。CFlow软件使
C6流式细胞仪
Accuri的C6流式细胞仪系统是一种全功能、二激光、六探测器分析流式细胞仪系统,包括:C6流式细胞仪、CFlow软件、电脑。C6的流式细胞仪系统提供最畅销的流式细胞仪,而且价格少几倍。C6流式细胞仪系统以敏感的探测器捕获和激发前散射光和旁散射光,以及4个荧光探测器的可调光学过滤器。CFlow软件使
脊髓机械性损伤模型的制作实验
实验前的准备及暴露脊髓 大鼠脊髓NYU模型 大鼠脊髓挤压伤模型 大鼠脊髓半横断模型 大鼠脊髓全横切模型 实验方法原理
脊髓机械性损伤模型的制作实验
实验方法原理 对于各种大鼠或小鼠脊髓损伤模型而言,前提都是要去除相应节段椎板,清晰暴露需要损伤的脊髓节段,因此本节所有大、小鼠损伤模型中都是以打开飞节段椎板为前提进行的进一步损伤。实验材料 实验动物试剂、试剂盒 1%戊巴比妥钠碘伏仪器、耗材 手术刀眼科摄(2个)眼科剪乳突撑开器小型咬骨钳针持线剪缝针
脊髓机械性损伤模型的制作实验——大鼠脊髓全横切模型
实验方法原理行椎板去除术后,用11-0线从腹侧穿过,然后用刀片切断脊髓。实验材料实验动物试剂、试剂盒碘伏仪器、耗材11-0丝线实验步骤①脊髓暴露后,用立体定向仪将大鼠固定;②用显微外科摄将硬脊膜轻轻提起,用眼科剪将硬膜剪开;③再提起硬脊膜然后用三角针将11-0线从硬膜的腹侧面穿过;④用刀片横切大鼠脊