酵母遗传学方法7：随机孢子分析
随机孢子分析1）孢子形成1．挑已形成孢子的二倍体单菌落接种在YPD平板上，尽可能把细胞涂薄一些，在30℃下培养12～16小时，超过16小时将明显降低孢子的形成率。2．上午，用一个无菌壳板钉取相当一火柴头量的细胞，转到含有2.5ml产孢培养基试管中，在25℃下旋转振荡培养。3．用光学显微镜检测孢子形成情况。要使5％以上的细胞形成孢子需花2～10天。 2）随机孢子4．取1ml形成孢子的培养物转到15ml的锥形聚苯乙烯离心管，用医用离心机离心5分钟沉淀细胞。5．彻底除去上清液，把细胞悬浮在0.2ml无菌水和5μl β-葡糖苷酸酶（约500个单位）。6．在30℃条件下旋转振荡培养1小时。7．加0.1ml（约0.15克）灭菌的0.5mm玻珠，在30℃条件下旋转振荡培养1小时。8．加1ml无菌水。9．振荡1～2分钟，用光学显微镜检查子囊是否完全破裂。10． 加4ml无菌水。11． &nbs......阅读全文
酵母遗传学方法7：随机孢子分析
随机孢子分析1）孢子形成1．挑已形成孢子的二倍体单菌落接种在YPD平板上，尽可能把细胞涂薄一些，在30℃下培养12～16小时，超过16小时将明显降低孢子的形成率。2．上午，用一个无菌壳板钉取相当一火柴头量的细胞，转到含有2.5ml产孢培养基试管中，在25℃下旋转振荡培养。3．用光学显微镜检测孢子形成
随机孢子分析
实验步骤展开
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案7
技术和方案7 质粒 DNA 的羟胺突变试剂、试剂盒羟胺溶液氯化铯纯化的质粒DNANaCl牛血清白蛋白无水乙醇TE 缓冲液实验步骤1.临用之前制备羟胺溶液，置冰上待用。2.将用 CsCl 纯化的 10 埤质粒 DNA 加到含 500ul 羟胺溶液的微量离心管中。3.在 37°C 下温育 20 h。4.
有丝分裂重组和随机孢子分析实验
实验材料酵母菌株仪器、耗材YPD 平板无菌接种环实验步骤展开
酵母菌随即孢子分析实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 2-疏基乙醇乙醇酵母裂解液仪器、耗材 超声发生器探头离心机实验步骤 1. 制备可供剖分四分体用的细胞。如果孢子在平板上形成，可用牙签挑起孢子放入装有5 ml 水的50 ml 烧瓶中；如果孢子在液体培养基中形成，可将1 ml 培养液加入5 ml 水中。然后加入0
酵母菌随即孢子分析实验
将减数分裂产物从子囊中释放出来，通过超声破裂，直接铺在琼脂平板上，孢子菌落可以通过影印平板法来筛选目的基因型。实验材料酵母菌试剂、试剂盒2-疏基乙醇乙醇酵母裂解液仪器、耗材超声发生器探头离心机实验步骤1. 制备可供剖分四分体用的细胞。如果孢子在平板上形成，可用牙签挑起孢子放入装有5 ml 水的50
酵母遗传学方法8：酵母活体染色
酵母活体染色1）核DNA和线粒体DNA1．当细胞培养到约107细胞/ml时，离心（5秒）收集细胞，再悬浮在70％乙醇中。2．固定5分钟或5分钟以上，用水洗2次。3．将细胞悬浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下贮存。4
酵母遗传学方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反应混合液：2μl 10×菌落PCR缓冲液1.2μl 25mmol/L MgCl20.4μl 10mmol/L dNTPs10pmol 引物
酵母遗传学方法9：酵母免疫荧光
酵母免疫荧光1）细胞制备1．培养5ml酵母至对数生长早期（106～107细胞/ml）。2．直接加1/10体积的甲醛到培养基里固定细胞（加入的甲醛终浓度为3.7％，标准母液是37％）。3．细胞在甲醛中培养至少1小时。4．离心收集细胞，用0.1mol/L磷酸钾（pH7.5）洗一次。5．把细胞悬浮在1ml
酵母遗传学方法1：DNA分离
酵母DNA分离1）酵母DNA微量制备（40ml）1．在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量（过夜）。2．将上述培养物移入螺盖离心管，用医用离心机或Sorvall SS－34转头以5000r/min离心5分钟，弃去上清液。3．将细胞悬浮在3ml的0.9mol/L
分子遗传学词汇随机诱变
中文名称：随机诱变英文名称：random mutagenesis定 义：非定点地诱发基因产生突变。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
分子遗传学词汇随机引物
中文名称：随机引物外文名称：random primer定义：随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体这一非特异的引物来拷贝全长mRNA。
酵母遗传学方法3：RNA的分离
酵母RNA的分离1）总酵母RNA的分离1．在每毫升培养物中加入50μg环乙酰亚胺，在30℃下振荡15分钟。此步亦可省略，但是有人认为环乙酰亚胺可防止mRNA凝集在多核糖体上。2．迅速冷冻收集细胞，在大离心管中加入约一半体积的碎冰，将培养物倒入，振荡，在4℃下以5000r/min离心5分钟。3．加入1
酵母遗传学技术
Genome-wide Gene Expression Analysis (Richard Young Research Group,Whitehead Institute for Biomedical Research)A genoe-wide gene expression analysis u
酵母遗传学方法5：酵母β－半乳糖苷酶的测定
酵母β－半乳糖苷酶的测定1） 粗提取物测定1．在适当温度下（通常30℃），用适当培养液将5ml细胞培养物培养到浓度为1×107～2×107细胞/ml。如果自主复制质粒的杂合基因表达，可使用一种适当培养基对存在质粒的菌株进行筛选。2．在冰上冷却细胞，离心收集。注意：以下步骤保持细胞在冰上。3．弃上清
分子遗传学词汇局部随机诱变
中文名称：局部随机诱变英文名称：localized random mutagenesis定 ：一种在体外将克隆的基因专一性地突变后用于置换受体生物中该基因的野生型拷贝的实验技术。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案
技术和方案6 酵母 RNA 的分离试剂、试剂盒环乙酰亚胺苯酚LETS缓冲液LiCl乙醇SDS乙酸钠AE 缓冲液仪器、耗材大离心瓶玻璃珠离心管oligo (dT) 柱实验步骤大量 RNA 分离程序酵母总 RNA 的分离1.在每毫升培养物中加入 50ug 环乙酰亚胺，在 30°C 下摇晃 15 min。
酵母遗传学方法4：质粒DNA的羟基突变
质粒DNA的羟基突变1．临用之前制备羟胺溶液，置冰上待用。2．将用氯化铯纯化的10μg质粒DNA加到含500μl羟胺溶液的微型离心管。3．在37℃下培养20小时。4．加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）和1ml无水乙醇终止反应，置－70℃沉淀DNA10分
酵母遗传学方法11：PCR介导基因破坏法
PCR介导基因破坏法1．反应混合物：5μl 10×Taq缓冲液5μl 25mmol/L MgCl22μl 10mmol/L dNTPs10~100ng 模板DNA25pmols 引物（每种引物）
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案3
技术和方案3 酵母 DNA 分离实验材料质粒DNA玻璃珠试剂、试剂盒YPD消解酶 100TTris-HClSDS乙酸钾TE 缓冲液RNaseA 溶液山梨醇无水异丙醇裂解缓冲液仪器、耗材三角瓶离心管实验步骤一、酵母 DNA 微量制备（40 ml)1.在 125 ml 三角瓶中用 40 mlYPD 培养
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案1
技术和方案1 酵母的高效转化实验步骤展开
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案2
技术和方案2 快速粗放的酵母菌落质粒转化法实验步骤展
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案4
技术和方案4 酵母蛋白质的抽提试剂、试剂盒NaOHPAGE 样品缓冲液Tris-HCl甘油β-巯基乙醇溴酚蓝实验步骤1.从液体培养物中或用细菌接种环在平板表面刮菌，收集大约 2.5 OD的细胞量（大约 2.3 mg 湿重）。将细胞重悬于 100ul 蒸馏水中，加入 100ul O.2mol/L Na
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案5
技术和方案5 TAP纯化方法试剂、试剂盒NP-40缓冲液TEV C 缓冲溶液钙调蛋白结合缓冲液（CBB)钙调蛋白洗脱缓冲液（CEB)实验步骤1.培养 3~6L 细胞至浓度为 2X107~3X107 个/ml(OD50=1.0~1.3)。2.离心收集细胞，并用冰预冷的水洗一次。3.用冰预冷的 NP-4
酵母菌子囊孢子的观察
实验概要学习并掌握酵母菌子囊孢子（ascospore）的观察方法。实验原理酵母菌的子囊孢子生成与否及其形状，是酵母分类上的重要依据。一部分酵母菌只有当它在最适条件下，才能观察到形成的子囊孢子，不同种属的酵母菌，形成子囊孢子的条件不同。葡萄糖-醋酸盐培养基特别有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。本实验用生长
酵母菌子囊孢子的观察实验_子囊孢子的观察
实验方法原理酵母菌的子囊孢子生成与否及其形状，是酵母分类上的重要依据。一部分酵母菌只有当它在最适条件下，才能观察到形成的子囊孢子，不同种属的酵母菌，形成子囊孢子的条件不同。葡萄糖-醋酸盐培养基特别有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。本实验用生长在此培养基上的酿酒酵母为材料，进行子囊孢子的观察。实验材料酿酒
酵母遗传学方法2：蛋白质的抽提
酵母蛋白质的抽提此法抽提的酵母蛋白适用于SDS凝胶电泳和Western印迹分析。1．从OD600＝2的细胞培养物中抽提酵母蛋白质。培养物的一种简单制备方法是将细胞接种到5ml YPD中，过夜培养后获得指数培养物（OD600＝0.5～2.0）。2．在水浴上把OD600＝2的细胞培养物转到含有2ml的5
酵母遗传学方法6：羧肽酶Y的平板鉴定
羧肽酶Y的平板鉴定1．在YPD平板上培养菌落和菌苔（通常菌落长3天，菌苔长1天即可）。2．小心把涂盖液加在平板的表面使之完全覆盖细胞。3．待琼脂凝固5～10分钟后，小心用新鲜Fast Garnet GBC溶液冲刷表面。4．显色5分钟，野生型菌株将变红，而羧肽酶Y－菌株将呈现黄色或粉红色。5．倒出Fa
酵母菌子囊孢子的观察实验
实验方法原理 酵母菌的子囊孢子生成与否及其形状，是酵母分类上的重要依据。一部分酵母菌只有当它在最适条件下，才能观察到形成的子囊孢子，不同种属的酵母菌，形成子囊孢子的条件不同。葡萄糖-醋酸盐培养基特别有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。本实验用生长在此培养基上的酿酒酵母为材料，进行子囊孢子的观察。实验材料
酵母遗传学方法10：固定化细胞的肌动蛋白染色
固定化细胞的肌动蛋白染色1．培养细胞到对数生长期（约107细胞/ml）。2．直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培养物的离心管中固定细胞（甲醛浓度为3.7％；标准母液是37％）。3．在甲醛中培养细胞30分钟或稍长时间。4．用PBS洗两次，离心5分钟收集细胞。5．用50μl的PBS悬浮细胞，加5个单位的