酵母遗传学技术
Genome-wide Gene Expression Analysis (Richard Young Research Group,Whitehead Institute for Biomedical Research)A genoe-wide gene expression analysis using high-density oligonucleotide arrays Restriction Digests of High Molecular Weight Yeast DNA (Donis Keller Lab)Restriction digests of YACs for mapping using rare cutting enzymes or more conventional restriction endonuclease digestion. ......阅读全文
酵母遗传学技术
Genome-wide Gene Expression Analysis (Richard Young Research Group,Whitehead Institute for Biomedical Research)A genoe-wide gene expression analysis u
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案
技术和方案6 酵母 RNA 的分离试剂、试剂盒环乙酰亚胺苯酚LETS缓冲液LiCl乙醇SDS乙酸钠AE 缓冲液仪器、耗材大离心瓶玻璃珠离心管oligo (dT) 柱实验步骤大量 RNA 分离程序酵母总 RNA 的分离1.在每毫升培养物中加入 50ug 环乙酰亚胺，在 30°C 下摇晃 15 min。
酵母遗传学方法8：酵母活体染色
酵母活体染色1）核DNA和线粒体DNA1．当细胞培养到约107细胞/ml时，离心（5秒）收集细胞，再悬浮在70％乙醇中。2．固定5分钟或5分钟以上，用水洗2次。3．将细胞悬浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下贮存。4
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案1
技术和方案1 酵母的高效转化实验步骤展开
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案7
技术和方案7 质粒 DNA 的羟胺突变试剂、试剂盒羟胺溶液氯化铯纯化的质粒DNANaCl牛血清白蛋白无水乙醇TE 缓冲液实验步骤1.临用之前制备羟胺溶液，置冰上待用。2.将用 CsCl 纯化的 10 埤质粒 DNA 加到含 500ul 羟胺溶液的微量离心管中。3.在 37°C 下温育 20 h。4.
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案5
技术和方案5 TAP纯化方法试剂、试剂盒NP-40缓冲液TEV C 缓冲溶液钙调蛋白结合缓冲液（CBB)钙调蛋白洗脱缓冲液（CEB)实验步骤1.培养 3~6L 细胞至浓度为 2X107~3X107 个/ml(OD50=1.0~1.3)。2.离心收集细胞，并用冰预冷的水洗一次。3.用冰预冷的 NP-4
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案4
技术和方案4 酵母蛋白质的抽提试剂、试剂盒NaOHPAGE 样品缓冲液Tris-HCl甘油β-巯基乙醇溴酚蓝实验步骤1.从液体培养物中或用细菌接种环在平板表面刮菌，收集大约 2.5 OD的细胞量（大约 2.3 mg 湿重）。将细胞重悬于 100ul 蒸馏水中，加入 100ul O.2mol/L Na
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案2
技术和方案2 快速粗放的酵母菌落质粒转化法实验步骤展
酵母遗传学方法实验指南——技术和方案3
技术和方案3 酵母 DNA 分离实验材料质粒DNA玻璃珠试剂、试剂盒YPD消解酶 100TTris-HClSDS乙酸钾TE 缓冲液RNaseA 溶液山梨醇无水异丙醇裂解缓冲液仪器、耗材三角瓶离心管实验步骤一、酵母 DNA 微量制备（40 ml)1.在 125 ml 三角瓶中用 40 mlYPD 培养
酵母遗传学方法9：酵母免疫荧光
酵母免疫荧光1）细胞制备1．培养5ml酵母至对数生长早期（106～107细胞/ml）。2．直接加1/10体积的甲醛到培养基里固定细胞（加入的甲醛终浓度为3.7％，标准母液是37％）。3．细胞在甲醛中培养至少1小时。4．离心收集细胞，用0.1mol/L磷酸钾（pH7.5）洗一次。5．把细胞悬浮在1ml
酵母遗传学方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反应混合液：2μl 10×菌落PCR缓冲液1.2μl 25mmol/L MgCl20.4μl 10mmol/L dNTPs10pmol 引物
光遗传学技术将酵母变成高效“生化工厂”
对酵母等微生物进行基因改造，用来生产人类所需的化合物，这样的生物合成技术已经常见。美国一项新研究说，将光遗传学技术与生物合成技术相结合，可以大幅提高生产效率。 光遗传学技术是一种操控细胞的方法，即把特定基因改造得对光敏感，然后用光来打开或关闭基因功能，影响细胞活动。该技术已对神经科学等领域产生
酵母遗传学方法1：DNA分离
酵母DNA分离1）酵母DNA微量制备（40ml）1．在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量（过夜）。2．将上述培养物移入螺盖离心管，用医用离心机或Sorvall SS－34转头以5000r/min离心5分钟，弃去上清液。3．将细胞悬浮在3ml的0.9mol/L
酵母遗传学方法5：酵母β－半乳糖苷酶的测定
酵母β－半乳糖苷酶的测定1） 粗提取物测定1．在适当温度下（通常30℃），用适当培养液将5ml细胞培养物培养到浓度为1×107～2×107细胞/ml。如果自主复制质粒的杂合基因表达，可使用一种适当培养基对存在质粒的菌株进行筛选。2．在冰上冷却细胞，离心收集。注意：以下步骤保持细胞在冰上。3．弃上清
酵母遗传学方法7：随机孢子分析
随机孢子分析1）孢子形成1．挑已形成孢子的二倍体单菌落接种在YPD平板上，尽可能把细胞涂薄一些，在30℃下培养12～16小时，超过16小时将明显降低孢子的形成率。2．上午，用一个无菌壳板钉取相当一火柴头量的细胞，转到含有2.5ml产孢培养基试管中，在25℃下旋转振荡培养。3．用光学显微镜检测孢子形成
酵母遗传学方法3：RNA的分离
酵母RNA的分离1）总酵母RNA的分离1．在每毫升培养物中加入50μg环乙酰亚胺，在30℃下振荡15分钟。此步亦可省略，但是有人认为环乙酰亚胺可防止mRNA凝集在多核糖体上。2．迅速冷冻收集细胞，在大离心管中加入约一半体积的碎冰，将培养物倒入，振荡，在4℃下以5000r/min离心5分钟。3．加入1
酵母遗传学方法4：质粒DNA的羟基突变
质粒DNA的羟基突变1．临用之前制备羟胺溶液，置冰上待用。2．将用氯化铯纯化的10μg质粒DNA加到含500μl羟胺溶液的微型离心管。3．在37℃下培养20小时。4．加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）和1ml无水乙醇终止反应，置－70℃沉淀DNA10分
酵母遗传学方法11：PCR介导基因破坏法
PCR介导基因破坏法1．反应混合物：5μl 10×Taq缓冲液5μl 25mmol/L MgCl22μl 10mmol/L dNTPs10~100ng 模板DNA25pmols 引物（每种引物）
酵母遗传学方法6：羧肽酶Y的平板鉴定
羧肽酶Y的平板鉴定1．在YPD平板上培养菌落和菌苔（通常菌落长3天，菌苔长1天即可）。2．小心把涂盖液加在平板的表面使之完全覆盖细胞。3．待琼脂凝固5～10分钟后，小心用新鲜Fast Garnet GBC溶液冲刷表面。4．显色5分钟，野生型菌株将变红，而羧肽酶Y－菌株将呈现黄色或粉红色。5．倒出Fa
酵母遗传学方法2：蛋白质的抽提
酵母蛋白质的抽提此法抽提的酵母蛋白适用于SDS凝胶电泳和Western印迹分析。1．从OD600＝2的细胞培养物中抽提酵母蛋白质。培养物的一种简单制备方法是将细胞接种到5ml YPD中，过夜培养后获得指数培养物（OD600＝0.5～2.0）。2．在水浴上把OD600＝2的细胞培养物转到含有2ml的5
酵母遗传学方法10：固定化细胞的肌动蛋白染色
固定化细胞的肌动蛋白染色1．培养细胞到对数生长期（约107细胞/ml）。2．直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培养物的离心管中固定细胞（甲醛浓度为3.7％；标准母液是37％）。3．在甲醛中培养细胞30分钟或稍长时间。4．用PBS洗两次，离心5分钟收集细胞。5．用50μl的PBS悬浮细胞，加5个单位的
产前遗传学检测技术进展
《中国出生缺陷防治报告（2012）》显示，我国出生缺陷发生率在5.6%左右，每年新增出生缺陷数约90万例，出生缺陷是导致早期流产、死胎、围产儿死亡、婴幼儿死亡和先天残疾的主要原因，不但严重危害儿童生存和生活质量，也会造成巨大的寿命损失和社会经济负担。 近年来我国高龄孕产妇数量增长，染色体异常等
光遗传学技术是什么？
光遗传学融合了光学及遗传学技术，通过遗传学方法将合适的外源光敏感蛋白靶向导入特定活细胞，利用特定波长的光照刺激光敏蛋白，调控神经元的活性，进而控制细胞乃至动物行为的开关。1、光遗传学技术研究方法①寻找合适的光敏蛋白。光敏蛋白（也称为视蛋白）是细胞膜上能够感受某一波长光照刺激而产生特定效应的一类膜蛋白
知识分享：光遗传学技术
光遗传学（optogenetics）又称光刺激基因工程（optical stimulation plus genetic engineering），是一种通过光学和遗传学技术在活体动物脑内精准控制细胞行为的技术。由于其高度的时空特异性，光遗传技术广泛应用于神经科学领域的研究。 2010
光遗传学技术的原理
光遗传学（optogenetics）又称光刺激基因工程（optical stimulation plus genetic engineering），是一种通过光学和遗传学技术在活体动物脑内精准控制细胞行为的技术。由于其高度的时空特异性，光遗传技术广泛应用于神经科学研究领域。2010年，光遗传学技术荣
关于酵母单杂交的技术介绍
酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来，通过对报告基因的表型检测，分析DNA与蛋白之间的相互作用，以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测特定转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和可靠性，现已被广泛用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的特定转
酵母双杂交系统的技术步骤
1.将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；2.将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；3.再将文库质粒转化到酵母中；4.通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。
Nature：利用光遗传学对酵母进行编程致更多的异丁醇产生
在一项新的研究中，来自美国普林斯顿大学的研究人员开发出一种导致酵母产生更多的异丁醇的方法。异丁醇是一种可能用作生物燃料的候选物质。在他们发表在2018年3月29日的Nature期刊上的一篇标题为“Optogenetic regulation of engineered cellular meta
光遗传学技术知识（二）
3. 光遗传学所需的辅助技术及基本步骤 光遗传学技术包括的范围是广泛的。主要包括以下几种。图5. 光遗传学技术及其辅助技术 在光遗传操作中，细胞会表达特定的编码光敏蛋白的基因，然后使用光来改变细胞的行为。光遗传学控制细胞功能的基本步骤如下：图6. 光遗传学控制细胞功能的基本步骤 其中，通过病毒感染
光遗传学技术知识（一）
光遗传学（optogenetics）又称光刺激基因工程（optical stimulation plus genetic engineering），是一种通过光学和遗传学技术在活体动物脑内精准控制细胞行为的技术。由于其高度的时空特异性，光遗传技术广泛应用于神经科学领域的研究。2010年，光遗