不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞

密度梯度细胞分离法

实验方法原理制备密度梯度液，通过密度梯度液离心细胞，收集各梯度组分，用培养基稀释，培养细胞。实验材料细胞样品试剂、试剂盒D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤通过下述方法之一制备密

密度梯度细胞分离法

            实验方法原理 制备密度梯度液，通过密度梯度液离心细胞，收集各梯度组分，用培养基稀释，培养细胞。 实验材料 细胞样品

密度梯度细胞分离法

            实验方法原理 制备密度梯度液，通过密度梯度液离心细胞，收集各梯度组分，用培养基稀释，培养细胞。 实验材料 细胞样品

小鼠精原细胞的分离和纯化

【摘要】　目的　探讨小鼠精原细胞的分离纯化。　方法　用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。　结果　所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布

mRNA的分离和纯化实验（一）

实验原理从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。真核生物mRNA具

简述巨噬细胞的分离和纯化

　　1、取2～3公斤重的家兔，耳缘静脉注射10ml空气处死动物或注射2ml（含130mg）戊巴比妥麻醉动物。仰卧固定，消毒胸部，剪开胸壁。以下过程注意无菌操作。小心从环状软骨下方剪下气管，分离心脏和血管，取出肺，剪去脂肪和结缔组织。用无菌纱布小心擦净肺表面，称重。　　2、分离肺泡巨噬细胞：用夹子夹住

接种、分离纯化和培养技术（二）

二、分离纯化　　含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（Mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。１、倾注平板法　

小鼠精原细胞的分离和纯化

【摘要】　目的　探讨小鼠精原细胞的分离纯化。　方法　用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。　结果　所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布

接种、分离纯化和培养技术（一）

一、接种　　将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。１、接种工具和方法　　在实验室或工厂实践中，用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面

小鼠精原细胞的分离和纯化

【摘要】　目的　探讨小鼠精原细胞的分离纯化。　方法　用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。　结果　所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布

微生物的分离和纯化

实验概要本文介绍了倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了

信使RNA的提取、分离和纯化

真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼

微生物的分离和纯化

实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件

酶的提取和分离纯化介绍

许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎开来。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。化学破碎法是指利用甲醛、丙酮等有机溶

质粒DNA的分离、纯化和鉴定

材料、设备及试剂　　一、材料　　含质粒的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管(又称eppendorf管),离心管架。　　二、设备　　微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 台式高速离心机，恒温振荡摇床， 高压蒸汽消毒器(灭菌锅)， 涡旋振荡器， 电泳仪，琼脂糖平板

酶的提取和分离纯化方法

许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎开来。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。化学破碎法是指利用甲醛、丙酮等有机溶

小鼠精原细胞的分离和纯化

实验概要精原细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、运动、衰老、死亡等项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原细胞异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞，用于体外培养。资料表明，从成年啮齿类的睾丸分离粗线

mRNA的分离和纯化实验（二）

（三） mRNA的分离1、mRNA与Oligo(dT)-纤维素结合：用移液器重新悬浮oligo(dT)-纤维素，取适量的oligo(dT)-纤维素到RNA样品中，盖上盖子，颠倒数次将oligo(dT)-纤维素与RNA混匀。于37℃水浴保温并温和摇荡15min。oligo(dT)-纤维素与RNA所需量

知识分享：mRNA的分离和纯化

　　实验原理 　　从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。 　　真核生

用高速固定角转头不连续蔗糖梯度分离细胞器

在例（十）中已介绍了用日立CR22G/21G离心机R18A转头，日立50ml锥底组织培养管分离质膜的方法。下面介绍用一般的圆底离心管（瓶），不连续（阶梯）蔗糖梯度，在高速离心机上分离质膜、内质网、溶酶体、线粒体、过氧化酶体的方法。设备：●主机Hitachi，CR21GⅡ（或21G）高速冷冻离心机●转

淋巴细胞的分离和激化实验

实验概要本实验从全血中收集富含白细胞的血浆，然后通过Ficoll-Hypaque离心，沉淀细胞悬于含不同细胞分裂剂的培养基中，刺激细胞生长。主要试剂1. PBS（Dulbecco）：    0.10g/L 无水CaCl2    0.20g/L KCl    0.20g/L KHPO4    0.10

淋巴细胞的分离和激化实验

实验试剂1. PBS（Dulbecco）：   0.10g/L 无水CaCl2   0.20g/L KCl   0.20g/L KHPO4   0.10g/L MgCl2.6H2O   8.00g/L NaCl   2.16g/L NaH2PO4.7H2O   调pH至7.42. 生长培养基：  

淋巴细胞的分离和激化实验

实验试剂1. PBS（Dulbecco）：   0.10g/L 无水CaCl2   0.20g/L KCl   0.20g/L KHPO4   0.10g/L MgCl2.6H2O   8.00g/L NaCl   2.16g/L NaH2PO4.7H2O   调pH至7.42. 生长培养基：  

加拿大BIOCOMP全自动密度梯度制备和分离系统

蛋白质的纯化实验

不发生电泳现象，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向负极移动，蛋白质粒子带正电荷；在等电点偏碱性溶液中，在电场中向正极移动，可以将蛋白质进行分离纯化。这种现象称为蛋白质电泳(Electrophoresis).蛋白质的分离纯化的一般原则①高回收率②高纯度③高活性④方便与快捷⑤经济蛋白质的分离纯化的一般步骤①

流式细胞术分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞

一、试剂及配制1. RPMI-1640培养基：应选购不含酚红的，使用时加入5%的小牛血清。2. FITC-抗CD3单克隆抗体：FITC为异硫氰酸荧光素，CD3为T细胞表面特有的蛋白质分子（分化抗原）。二、操作方法1. 用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离单个核细胞，用RPMI-1640培养基配成1×

不连续凝胶电泳的的定义和特点

中文名称不连续凝胶电泳英文名称discontinuous gel electrophoresis定　　义在一个凝胶电泳系统中不同部位的pH、离子强度、缓冲液成分或凝胶孔隙大小不同的凝胶电泳。其目的在于提高电泳分离的范围和分辨率。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）

密度梯度分离法分离单个核细胞（MNCs）

试剂和材料：1. 合适的培养基或冷冻液；2. PBSA；3. Ficoll-Hypague；4. 巴氏吸管；5. 50ml离心管；实验方法：1. 将脐血样品用PBSA按1：1比例稀释；2. 将15ml Ficoll-Hypague吸入50ml离心管；3. 将30mlPBSA稀释的脐血样品缓慢地加到F

核细胞分离的原理及分层液法的分离步骤

　　单个核细胞PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的密度为1.076～1.090；血小板为1.030～1.035。因此，利用一种密度介于1.076～1.090之间、近于等渗的溶液(分层液)进行密度梯度离心，可使不同类别的血细胞按其相应密

微生物的分离和纯化实验

实验方法原理 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。土