小鼠精原细胞的分离和纯化
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布于位于27%～35%间的Percoll梯度中，其超微结构与7～8d小鼠睾丸切片内精原细胞的超微结构一致，经纯化后其纯度达68.76%。 结论 用组合酶消化、Percoll不连续密度梯度法分离的7～8d小鼠的精原细胞能满足体外培养的需要。 【关键词】 精原细胞；分离；小鼠 【中图分类号】 S865.1+30.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 0529-1356(2000)03-235SEPARATION AND PURIFICATION OF SPERMATOGONIA IN MOUSEZHANG Xue-ming, LAI L......阅读全文
小鼠精原细胞的分离和纯化
实验概要精原细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、运动、衰老、死亡等项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原细胞异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞，用于体外培养。资料表明，从成年啮齿类的睾丸分离粗线
小鼠精原细胞的分离和纯化
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布
小鼠精原细胞的分离和纯化
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布
小鼠精原细胞的分离和纯化
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布
长白猪精原细胞的分离和纯化
实验方法原理酶消化法制备2月龄未成熟长白猪睾丸组织的单细胞悬液，以 2 %～4 %牛血清白蛋白 (BSA)连续梯度作为分离介质，采用重力沉降法并结合细胞贴壁培养的方法分离精原细胞。实验材料长白种系公猪试剂、试剂盒胶原酶胰蛋白酶脱氧核糖核酸酶牛血清白蛋白胎牛血清RPMI 1640培养基HE染液PBS仪
长白猪精原细胞的分离和纯化
实验方法原理酶消化法制备2月龄未成熟长白猪睾丸组织的单细胞悬液，以 2 %～4 %牛血清白蛋白 (BSA)连续梯度作为分离介质，采用重力沉降法并结合细胞贴壁培养的方法分离精原细胞。实验材料长白种系公猪
长白猪精原细胞的分离和纯化
实验方法原理 酶消化法制备2月龄未成熟长白猪睾丸组织的单细胞悬液，以 2 %～4 %牛血清白蛋白 (BSA)连续梯度作为分离介质，采用重力沉降法并结合细胞贴壁培养的方法分离精原细胞。 实验
长白猪精原细胞的分离和纯化
一、材料和方法1、实验动物长白种系公猪，2月龄，由北京养猪中心苇沟现代化猪场提供。取活体睾丸，立即放入1640营养液中，待分离细胞。2、主要试剂及材料胶原酶（CLS，Sigma），胰蛋白酶（Sigma），脱氧核糖核酸酶（DNase,Promega），牛血清白蛋白（BSA，中国医学科学院天津血液研究所
小鼠胰岛分离与纯化
实验概要小鼠胰岛分离与纯化实验步骤一、准备工作：1、小鼠：小鼠应该毛色光滑，并根据实验需要选择合适的性别及年龄。2、准备试剂：Hanks液 、P型酶（Roche） 、FBS 、1640培养基（含7mM glucose 10%FBS）3、准备器具：眼科剪1把 ，眼科镊（直）2把，动脉止血夹（75px）
用Percoll不连续密度梯度法分离小鼠精原细胞的方法介绍
目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布于位于27
用Percoll不连续密度梯度法分离小鼠精原细胞的方法详解
精原细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、运动、衰老、死亡等项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原细胞异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞，用于体外培养。资料表明，从成年啮齿类的睾丸分离粗线期及其后
巨噬细胞的分离和纯化
巨噬细胞的分离1）从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞1．取6周左右的小鼠（或600克左右的豚鼠，或3公斤左右的家兔），剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml（豚鼠20ml，家兔200ml）无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4％淀粉肉汤。3～4天以后收集腹腔细胞。2．如要收集腹腔静置巨噬细胞，不注射刺激物，
酶的提取和分离纯化
(一)细胞破碎处理 许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法是指利用
酶的提取和分离纯化
(一)细胞破碎处理 许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法是指
酶的提取和分离纯化
(一)细胞破碎处理 许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法
简述巨噬细胞的分离和纯化
1、取2～3公斤重的家兔，耳缘静脉注射10ml空气处死动物或注射2ml（含130mg）戊巴比妥麻醉动物。仰卧固定，消毒胸部，剪开胸壁。以下过程注意无菌操作。小心从环状软骨下方剪下气管，分离心脏和血管，取出肺，剪去脂肪和结缔组织。用无菌纱布小心擦净肺表面，称重。 2、分离肺泡巨噬细胞：用夹子夹住
mRNA的分离和纯化实验（二）
（三） mRNA的分离1、mRNA与Oligo(dT)-纤维素结合：用移液器重新悬浮oligo(dT)-纤维素，取适量的oligo(dT)-纤维素到RNA样品中，盖上盖子，颠倒数次将oligo(dT)-纤维素与RNA混匀。于37℃水浴保温并温和摇荡15min。oligo(dT)-纤维素与RNA所需量
质粒DNA的分离、纯化和鉴定
材料、设备及试剂 一、材料 含质粒的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管(又称eppendorf管),离心管架。 二、设备 微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 台式高速离心机，恒温振荡摇床， 高压蒸汽消毒器(灭菌锅)， 涡旋振荡器， 电泳仪，琼脂糖平板
微生物的分离和纯化
实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件
酶的提取和分离纯化介绍
许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎开来。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。化学破碎法是指利用甲醛、丙酮等有机溶
信使RNA的提取、分离和纯化
真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼
微生物的分离和纯化
实验概要本文介绍了倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了
知识分享：mRNA的分离和纯化
实验原理 从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。 真核生
mRNA的分离和纯化实验（一）
实验原理从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。真核生物mRNA具
酶的提取和分离纯化方法
许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎开来。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。化学破碎法是指利用甲醛、丙酮等有机溶
小鼠固有层CD11c－+细胞的分离与纯化
实验概要固有层(LP)CD11c抗原递呈细胞，直接获取管腔内容物，并能直接控制CD4T细胞分化成Th1细胞，TH2或Th17细胞。小鼠LP CD11c 细胞由三个子类的细胞组成，区分于不同的细胞表面标志物，如CD11b，CD70，CX3CR1，CD103。据报道，每个子类都有其独特的使命。使
接种、分离纯化和培养技术
一、接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种.1、接种工具和方法在实验室或工厂实践中,用得最多的接种工具是接种环、接种针.由于接种要求或方法的不同,接种针的针尖部常做成不同的形状,有刀形、耙形等之分.有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种.在固体培养基表面要将菌液
接种、分离纯化和培养技术
一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。１、接种工具和方法 在实验室或工厂实践中，用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面
接种、分离纯化和培养技术
一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种.1、接种工具和方法 在实验室或工厂实践中,用得最多的接种工具是接种环、接种针.由于接种要求或方法的不同,接种针的针尖部常做成不同的形状,有刀形、耙形等之分.有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种.在固体培
小鼠角质细胞的分离和培养
实验试剂HBSS： NaCl 8g/LKCl 400mg/LKH2PO4 60mg/L无水Na2PO4 47.86mg/L无水葡萄糖 1000mg/LNaHCO3 350mg/L实验材料妊娠期BALB/c小鼠实验步骤将1~2天龄新生裸鼠窒息后，置于培养皿中，用1%碘聚乙烯吡咯烷酮液洗净裸鼠，流水彻底