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辛酸提取法纯化多克隆抗体

该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。 【材料和试剂】 (1)正辛酸。 (2)60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS。 (3)透析袋。 (4)高速低温离心机。 【操作步骤】 (1)将待提取样品用60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液稀释3~4倍,调pH至4.5,对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。 (2)在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸,按每ml样品中加25μl,若样品体积小于5ml,则每ml样品内加入30μl正辛酸,搅拌30min。 (3)10 000×g离心30min,取上清液通过定性滤纸过滤,装人透析袋,用20倍体积的PBS,4℃透析过液,中间换液3~4次。 (4)然后每毫升混合液加0.27g硫酸铵,搅拌30min。 ......阅读全文

辛酸提取法纯化多克隆抗体

该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。  【材料和试剂】   (1)正辛酸。   (2)60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS。   (3)透析袋。   (4)高速低温离心机。   【操作步骤】  (1)将待提取样品用60mmol/L,pH4.0

多克隆抗体纯化实验_辛酸提取法

辛酸提取法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。实验材料动物血清样品试剂、试剂盒正辛酸醋酸缓冲液PBS仪器、耗材透析袋高速低温离心机实验步骤一、材料和试剂 1.   正辛酸 2.  60 mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS 3.  透析袋 4.  高

DEAE-Sephadex A-50提取法纯化多克隆抗体

DEAE-Sephadex A-50(简称A-50)为弱碱性阴离子交换剂,经过NaOH处理将Cl-型转为OH-型后,可吸附酸性蛋白。γ1球蛋白属中性蛋白,等电点为pH6.85~7.5,其余均属酸性蛋白。在溶液为pH8.0时,酸性蛋白均被A-50 吸附。从而可分离纯化IgG。     1. 批

DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体

该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。 1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE32或DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层

多克隆抗体纯化实验

实验材料 动物血清样品试剂、试剂盒 正辛酸醋酸缓冲液PBS仪器、耗材 透析袋高速低温离心机实验步骤 一、材料和试剂 1.   正辛酸 2.  60 mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS 3.  透析袋 4.  高速低温离心机 二、操作步骤 1.  将待提取样品用60 mmol/L,pH4.0醋

抽提萃取法展望

展望编辑萃取作为分离和提纯物质的重要单元过程,今后还会得到进一步的发展,其主要发展方向是:(1)研究新的萃取体系和新的萃取工艺;(2)合成和筛选高效萃取剂;(3)研究与发展新型萃取设备,重点应放在设备的自动化、连续化上;(4)开展萃取机理及理论的研究。 [2] 

多克隆抗体提取实验——批量提取法

由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体。主要用于(1)批量提取多个抗体(2)为进一步验证抗体的作用进行基础操作。实验方法原理由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗

多克隆抗体的纯化方法都有哪些

纯化抗体的方法较多,建议用蛋白A或蛋白G微球纯化法作为最常用的方法。这种方法效率高,能为常用的实验方法提供足够纯化的抗体,而且随着商品化的蛋白A,和蛋白G基质的出现,能将任何来源的抗体纯化。抗体的纯化也可采用传统的色谱法,在某些情况下非常有用。这些方法包括DEAE离子交换色谱法、硫酸镀沉淀法及其他方

亲和层析法(affinity chromatography)纯化多克隆抗体

【实验原理】如图所示,亲和层析的高度选择性使得从某一初始材料中纯化,富集某一含量较低的目的蛋白成为可能,因此亲和层析是蛋白质分离纯化过程中最有效的方法之一。另外,如果配基与蛋白质的亲和能力很强,也可同时进行样品的浓缩。 虽然多数情况下不需要将抗体与其他血清蛋白分开,但如果一旦需要,蛋白A亲和层析

质粒DNA的抽提与纯化

目的 : 采用碱变性法,学习小规模制备质粒DNA的技术原理 : 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完