DEAESephadexA50提取法纯化多克隆抗体

DEAE-Sephadex A-50(简称A-50)为弱碱性阴离子交换剂,经过NaOH处理将Cl-型转为OH-型后,可吸附酸性蛋白。γ1球蛋白属中性蛋白,等电点为pH6.85~7.5,其余均属酸性蛋白。在溶液为pH8.0时,酸性蛋白均被A-50 吸附。从而可分离纯化IgG。 1. 批量吸附法 此法可在1天内完成提取过程,纯化前后样品体积变化不大,所得IgG无变性现象,抗体效价亦无明显降低。制品可达PAGE及免疫电泳纯。适用于提纯人、羊、兔等血清中的IgG。 【材料和试剂】 (1)DEAE-Sephadex A-50。 (2)PB缓冲液:0.01mol/L,pH6.5 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液。 【操作步骤】 ......阅读全文

DEAESephadex-A50提取法纯化多克隆抗体

DEAE-Sephadex A-50(简称A-50)为弱碱性阴离子交换剂,经过NaOH处理将Cl-型转为OH-型后,可吸附酸性蛋白。γ1球蛋白属中性蛋白,等电点为pH6.85~7.5,其余均属酸性蛋白。在溶液为pH8.0时,酸性蛋白均被A-50 吸附。从而可分离纯化IgG。     1. 批

抗体纯化:deaesephadex-a50-柱层析法

一、原理 deae-sephadex a-50(二乙氨基—乙基-葡萄糖凝胶a-50)为弱碱性阳离子交换剂。用NaOH将Cl-型转变为OH-型后,可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为pH6.85~7.5),其余均属酸性蛋白。pH7.2~7.4的环境中,酸性蛋白均被deae-

抗体纯化:deaesephadex-a50-柱层析法

            一、原理deae-sephadex a-50(二乙氨基—乙基-葡萄糖凝胶a-50)为弱碱性阳离子交换剂。用NaOH将Cl-型转变为OH-型后,可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为pH6.85~7.5),其余均属酸性蛋白。pH7.2~7

DEAESephadex-A50柱层析纯化免疫球蛋白

(一) 原理DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后,可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85~7.5),其余均属酸性蛋白。在PH7.2~7.4的环境中,酸性蛋白均被DEAE-Sephad

辛酸提取法纯化多克隆抗体

该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。  【材料和试剂】   (1)正辛酸。   (2)60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS。   (3)透析袋。   (4)高速低温离心机。   【操作步骤】  (1)将待提取样品用60mmol/L,pH4.0

多克隆抗体纯化实验_辛酸提取法

辛酸提取法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。实验材料动物血清样品试剂、试剂盒正辛酸醋酸缓冲液PBS仪器、耗材透析袋高速低温离心机实验步骤一、材料和试剂 1.   正辛酸 2.  60 mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS 3.  透析袋 4.  高

DEAE纤维素提取法纯化多克隆抗体

该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。 1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE32或DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层

多克隆抗体纯化实验

实验材料 动物血清样品试剂、试剂盒 正辛酸醋酸缓冲液PBS仪器、耗材 透析袋高速低温离心机实验步骤 一、材料和试剂 1.   正辛酸 2.  60 mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS 3.  透析袋 4.  高速低温离心机 二、操作步骤 1.  将待提取样品用60 mmol/L,pH4.0醋

抽提萃取法展望

展望编辑萃取作为分离和提纯物质的重要单元过程,今后还会得到进一步的发展,其主要发展方向是:(1)研究新的萃取体系和新的萃取工艺;(2)合成和筛选高效萃取剂;(3)研究与发展新型萃取设备,重点应放在设备的自动化、连续化上;(4)开展萃取机理及理论的研究。 [2] 

多克隆抗体提取实验——批量提取法

由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体。主要用于(1)批量提取多个抗体(2)为进一步验证抗体的作用进行基础操作。实验方法原理由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗

免疫球蛋白纯化技术—DEAESephadexA50柱层析纯化免疫球蛋白

实验方法原理DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后,可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85~7.5),其余均属酸性蛋白。在PH7.2~7.4的环境中,酸性蛋白均被DEAE-Sephad

多克隆抗体的纯化方法都有哪些

纯化抗体的方法较多,建议用蛋白A或蛋白G微球纯化法作为最常用的方法。这种方法效率高,能为常用的实验方法提供足够纯化的抗体,而且随着商品化的蛋白A,和蛋白G基质的出现,能将任何来源的抗体纯化。抗体的纯化也可采用传统的色谱法,在某些情况下非常有用。这些方法包括DEAE离子交换色谱法、硫酸镀沉淀法及其他方

亲和层析法(affinity-chromatography)纯化多克隆抗体

【实验原理】如图所示,亲和层析的高度选择性使得从某一初始材料中纯化,富集某一含量较低的目的蛋白成为可能,因此亲和层析是蛋白质分离纯化过程中最有效的方法之一。另外,如果配基与蛋白质的亲和能力很强,也可同时进行样品的浓缩。 虽然多数情况下不需要将抗体与其他血清蛋白分开,但如果一旦需要,蛋白A亲和层析

质粒DNA的抽提与纯化

目的 : 采用碱变性法,学习小规模制备质粒DNA的技术原理 : 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完

盐湖提锂的方法溶剂萃取法介绍

老卤脱硼后,加入FeCl3溶液形成LiFeCl4,用磷酸三丁酯(TBP)-煤油萃取体系将LiFeCl4萃取至有机相,形成LiFeCl4+2TBP萃取络合物,酸洗、盐酸萃取。经蒸发浓缩、焙烧、浸出、除杂,可得到无水氯化锂,最后加入碳酸钠生成碳酸锂。该方法的优点是适用于从镁锂比相对较高的盐湖卤水中提取锂

多克隆抗体的制备、纯化及免疫电泳2

⒊ 注射抗原 ⑴ 准备两只成年兔,将100µg抗原/兔溶入1ml磷酸缓冲溶液中待用。在1ml福氏不完全佐剂中加入分枝杆菌制成完全佐剂,并加入1ml抗原溶液,剧烈震荡使之充分乳化,用3ml注射器抽取该乳化液,接上25G针头,排除注射器中的气泡。从笼中取出兔子放在平坦处,在4个不同的部位进行皮下注射

多克隆抗体的制备、纯化及免疫电泳1

一、多克隆抗体的制备【实验原理】当将抗原注射入实验动物体内时,一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合,受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体,这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。将抗原导入敏感动物体内

酸法提取胶原蛋白的方法介绍

酸法提取是利用一定浓度的酸溶液在一定的条件下提取胶原蛋白,主要采用低离子浓度酸性条件破坏分子间盐键和希夫碱,而引起纤维膨胀、溶解,采用酸法提取的胶原蛋白通常成为酸溶性胶原蛋白。酸溶解法可将没有交联的胶原分子溶解出来,也可溶解含有醛胺类交联键的胶原纤维,然后释放到溶剂中。酸法是提取胶原蛋白比较常用和有

关于胶原蛋白的酸法提取相关介绍

  酸法提取是利用一定浓度的酸溶液在一定的条件下提取胶原蛋白,主要采用低离子浓度酸性条件破坏分子间盐键和希夫碱,而引起纤维膨胀、溶解,采用酸法提取的胶原蛋白通常成为酸溶性胶原蛋白。酸溶解法可将没有交联的胶原分子溶解出来,也可溶解含有醛胺类交联键的胶原纤维,然后释放到溶剂中。酸法是提取胶原蛋白比较常用

关于索氏提取法抽提试剂的选择介绍

  索氏提取法利用相似相溶规律,农产品中脂肪极性一般较小,可采用石油醚或乙醚作为抽提试剂。常见实验室用石油醚有低沸程(30~60℃)和高低沸程(60~90℃)两种,一般选用低沸程石油醚为抽提溶剂有利于缩短提取时间。若选择乙醚为抽提试剂,则必须十分注意乙醚的安全使用。抽提室内应严禁有明火存在或用明火加

细胞内cccDNA的抽提与纯化

最常用的抽提细胞内cccDNA的方法是蛋白质-去污剂沉淀法,其原理是基于rcDNA和cccDNA与蛋白质结合能力的差异。rcDNA能与蛋白质共价结合,与绝大多数细胞染色体DNA一起形成沉淀,而cccDNA不能与蛋白质结合故游离于上清中,用酚氯仿抽提上清即可得到cccDNA。根据笔者的经验,该方法的主

盐湖提锂工艺的方法介绍吸附法和溶剂萃取法

1.吸附法采用无机离子吸附法。目前真正实现产业化的仅为铝系吸附剂(氢氧化铝)。即在氢氧化铝中加入锂阴离子产生的混合物,这类化合物属于缺欠型无序结构,将成分中的锂离子通过适当的酸溶液进行去除,而后对有规则空隙结构的无机物质进行得出,这种物质对于锂离子有着很强的吸附作用。铝盐吸附剂在制造的时候,锂离子主

plasmid-DNA的抽提•纯化试剂盒MagExtractor®Plasmid

  产品索引   5870   中文名称:   plasmid DNA的抽提•纯化试剂盒   英文名称:   MagExtractor®-Plasmid-   产品编号:   NPK -300   产品类别:   分子生物学   生产厂家:   TOYOBO   产品价格:

多克隆抗体

Making Antibody·         Production of Polyclonal Antibody in Rabbit (Walter Steffen)Provides detailed protocol for immunizatioin, bleeding procedure,

什么是多克隆抗体,多克隆抗体的优势?

天然的抗原分子中常含有多种不同的抗原表位,以该抗原刺激机体的免疫系统可同时激活多种B细胞克隆,产生的抗体中会含有多种针对不同抗原表位的抗体,因此称之为多克隆抗体。多克隆抗体主要从动物免疫血清、恢复期患者血清或免疫接种人群的血清中获得。多克隆抗体的优势是:作用全面,具有中和抗原、免疫调理、补体依赖的细

索氏提取法食品脂肪质量时如何判断抽提是否完全

索氏抽提取器是由回流冷凝管、提脂管、提脂烧瓶三部分所组成,抽提脂肪之前应将各部分洗涤干净并干燥,提脂烧瓶需烘干并称至恒量④抽提将滤纸筒放入索氏抽提器中,连接已干燥至恒重的脂肪接收瓶,由冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至接收瓶体积的2/3,在水浴上加热,使乙醚或石油醚不断的回流,一般抽提6~8h,至抽提

索氏提取法食品脂肪质量时如何判断抽提是否完全

索氏抽提取器是由回流冷凝管、提脂管、提脂烧瓶三部分所组成,抽提脂肪之前应将各部分洗涤干净并干燥,提脂烧瓶需烘干并称至恒量④抽提将滤纸筒放入索氏抽提器中,连接已干燥至恒重的脂肪接收瓶,由冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至接收瓶体积的2/3,在水浴上加热,使乙醚或石油醚不断的回流,一般抽提6~8h,至抽提

索氏提取法食品脂肪质量时如何判断抽提是否完全

索氏抽提取器是由回流冷凝管、提脂管、提脂烧瓶三部分所组成,抽提脂肪之前应将各部分洗涤干净并干燥,提脂烧瓶需烘干并称至恒量④抽提将滤纸筒放入索氏抽提器中,连接已干燥至恒重的脂肪接收瓶,由冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至接收瓶体积的2/3,在水浴上加热,使乙醚或石油醚不断的回流,一般抽提6~8h,至抽提

SPA的提取、纯化与鉴定(煮沸提取法和溶菌酶消化法)

(一) SPA的提取SPA提取的方法很多,包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下:1.煮沸提取法⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂培养基上,37℃培养20h~24h。⑵ 以 0.15mol/L pH5.9PB液将菌苔洗下,配成10%(V/V)的悬液。⑶

人参有效成分超临界萃取法提取与纯化的研究

本文以5年生人工种植人参作为原料,以超临界CO2流体萃取作为关键技术提取人参有效成分:即人参脂溶性成分、人参皂苷、人参多糖,人参淀粉,研究人参有效成分超临界CO2萃取的最佳工艺参数,并对相应萃取物进行纯化与鉴定,以便期望实现高效萃取人参有效成分的现代化工艺。本文主要研究结果如下: (1)采用超临界C