非标记抗体免疫酶组织化学实验——酶桥法
由于在酶标记抗体过程中，酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性，从而降低了抗体的效价。另外，血清中的非特异性抗体也可以被酶标记，这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合，放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点，Sternberger（1969）在酶标抗体法的基础上，创建了非标记抗体免疫酶技术。该方法先用酶（HRP 或 AKP）去免疫动物（羊、兔和鼠等），使其产生高效价、特异性的抗酶抗体，再将该抗酶抗体与酶结合，形成五环的复合物，例如 PAP（HRP）、APAAP（AKP）、OAGO（GO）复合物。该复合物由于没有一个抗体受到共价键的标记，保留了免疫活性，相对分子质量较小，对细胞的穿透性好。该技术主要有酶桥法和过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）复合物法，以及一些变型的方法。特别是 PAP 法大大提高了检测的敏感性，且染色背景轻，稳定性好，得到了广泛应用。实验方法原理首先用酶免疫动物制备成效价高、特异性强的抗酶抗体。在特......阅读全文
非标记抗体免疫酶组织化学实验——酶桥法
由于在酶标记抗体过程中，酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性，从而降低了抗体的效价。另外，血清中的非特异性抗体也可以被酶标记，这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合，放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点，Sternberger（1969）在酶标抗体法的基础上，创建了非标记抗体免疫
非标记抗体免疫酶组织化学实验——ABPAP－法
实验方法原理ABPAP 法是 PAP 法和 ABC 法的联合应用，使更多的酶分子结合到抗原-抗体复合物上，目的就是增加方法的敏感性。其原理见图 4-11。作者应用了 30 余种特异性一抗、鼠源性和兔源性 PAP 复合物以及 ABC 检测系统，结果 ABPAP 法比单一的 PAP 法要敏感 7～8 倍
非标记抗体免疫酶组织化学实验——PAP－法
实验方法原理与酶桥法相似，不同的是酶桥法分四步，而 PAP 法分三步。PAP 法将酶桥法的步骤（3）、步骤（4）合二并为一，用 PAP 复合物替代，故称 PAP 法（图 4-9）。PAP 复合物中的抗 HRP 抗体和第一抗体必须为同一种属动物的 IgG，这样桥抗体才能作为「桥」将 PAP 复合物连接
非标记抗体免疫酶组织化学实验
实验方法原理 首先用酶免疫动物制备成效价高、特异性强的抗酶抗体。在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作「桥梁」，将它们连接起来，再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的定位。其基本流程为：抗原+特异性抗体 → 第二抗体（桥抗）→ 抗 HRP 抗体 → HRP → DAB+H2O2（显色）。因为桥抗
非标记抗体免疫酶组织化学实验——双－PAP－法
实验方法原理在 PAP 法的基础上重复第二抗体和 PAP 复合物，重复的连接抗体和 PAP 复合物可能有以下两种连接方式（图 4-10）。第一种（A）重复连接抗体可与一个 PAP 中的抗 HRP 抗体上未饱和的 Fc 段结合，再与后加的 PAP 复合物相结合；第二种（B）重复连接抗体与特异性一抗分子
酶免疫技术抗体的酶标记方法
用于酶免疫技术的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。目前酶免疫技术检测中常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。由于辣根过氧化
非标记抗体酶法PAP法
PAP复合物是离体制备的HRP抗HRP复合物，它的制备方法较多，现简介其中之一。（1）制备抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射灭活的卡介苗（共lOmg），2周后重复1次，刺激机体免疫系统功能，1周后于背部脊柱两旁皮内多点注射1．Oral乳剂[福氏完全佐剂，含HRP3。3m
酶标记抗体
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量的酶(
免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体
免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗
免疫碱性磷酸酶组织化学实验——间接免疫碱性磷酸酶法
免疫碱性磷酸酶组织化学技术是以碱性磷酸酶（AKP 或 AP）取代 HRP 来显示结果的免疫酶组织化学技术。最早出现的是间接免疫碱性磷酸酶法（IAP），1983 年 Mason 及 Moir 等建立了碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）复合物法。随后，人们建立了更为敏感的生物素-亲和素-碱性磷酸酶复合
免疫碱性磷酸酶组织化学实验——APAAP－法
实验方法原理APAAP 法的原理与 PAP 法类似，都属于未标记抗体桥联法，所不同的是用 AKP 取代了 HRP。该方法较 IAP 法敏感性髙，特别是用于标记固定过的组织。APAAP 法的主要优点是非特异性背景染色较浅，因为其不受内源性过氧化物酶的干扰，APAAP 复合物所用的 AKP 是从小牛肠组
非标记抗体免疫电镜实验——经典法
不标记抗体法通过系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。用于（1）抗体观察（2）免疫学研究。实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有
酶标记抗体HRP标记抗体戊二醛二步法
实验概要本实验介绍了酶标记抗体-HRP标记抗体中的戊二醛二步法的操作流程。实验原理戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。主要试剂1. 0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M Na
酶标记抗体技术方法
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量
酶标记抗体的概述
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。高质量的酶(如
酶标记抗体技术方法
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量
关于酶标记抗体实验的结果判定介绍
(1)定性及效价滴定：用特异性抗原(或抗体)同酶标记抗体(或抗免疫球蛋白抗体)作双向琼脂扩散试验或免疫电泳试验。然后用酶的底物使沉淀弧显色，可初步鉴定其活性。最后以直接ELISA法(或在正式实验系统里)对酶结合物进行滴定( 见本节 (三)工作浓度的选择)。 (2)定量和克分子比值测定：可用分光
关于酶标记抗体简易过碘酸钠法介绍
本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所获酶标记抗体的产率高，将近70%的HRP和Ig结合，99%的Ig与酶结合，酶与Ig的活性无重大损失，是最常用的方法。 原理 经典的过碘酸钠法中需采用二硝基氟苯封闭HRP上残留的α-和ε氨基基以避免酶分子之间的交
免疫电镜相关技术实验——酶标记免疫电镜技术
实验方法原理该技术是以酶为抗原—抗体反应的标记物，在不改变抗原抗体的免疫反应特异性，亦不降低酶活性条件下，与相应底物作用后形成不溶性的反应物。在电镜下形成为电子散射力强的终末产物。用于免疫电镜标记的酶有辣根过氧化物酶 (HRP)碱性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
免疫酶组织化学技术
免疫酶组织化学技术 1．酶标直接法和间接法 Nakane(1966)将辣根过氧化物酶(HRP) 标记在抗体免疫球蛋白分子上，创建了酶标记免疫组化的直接法、间接法和桥法。 2．PAP法 Stemberger(1969)在酶桥法的基础上，建立了非标记抗体法，先将HRP免
非标记抗体免疫电镜实验——快速法(琼脂扩散法)
实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
酶标抗体标记效果测定
酶标抗体标记效果测定：测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。
酶标记抗体技术方法（一）
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质
酶标记抗体技术方法（三）
3. 结果判定： 除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。 IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62 4. 试剂及器材: (1) 0.1M NaIO４：称取241mg高碘酸钠(广州化学试剂厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。 (2
酶标记抗体技术方法（二）
三、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 1. 原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
免疫碱性磷酸酶组织化学实验
实验方法原理 此方法的基本原理与 HRP-抗体间接法类似，所不同的是用 AKP 代替 HRP 标记第二抗体，将其制备成酶标记抗体。实验材料 石蜡切片动物血清试剂、试剂盒 蛋白酶特异性一抗核固红二甲苯乙醇树胶PBSAKP 标记的二抗TBS（含左旋咪唑、MgCl2）仪器、耗材 滴管玻片湿盒实验步骤 1.
酶标记抗体免疫组化染色知识点
（一）直接法：将酶直接标记在特异性抗体上，与组织细胞内相应的抗原进行特异性反应，形成抗原-抗体-酶复合物，最后用酶底物显色。直接法的优点在于操作简便及特异性强，缺点是敏感性低，制备的抗体种类有限。 （二）间接法：将酶标记在第二抗体上，先将第一抗体（特异性抗体）与相应的组织抗原结合，形成抗原抗体
关于抗原–抗体反应的类型—免疫酶技术是以酶为标记物的介绍
免疫酶技术是以酶为标记物，即用酶标记抗体(或抗原)检测相对应的抗原(或抗体)的一种定位、定性和定量的技术。用化学方法使酶与抗原或抗体结合，形成酶标记物。当酶标记物与相应的抗原或抗体反应而形成酶标记物–抗原(或抗体)的免疫复合物后，与相应的酶底物作用时可生成有色的产物；酶降解底物的程度与所呈现的色
酶标记抗体或抗原的制备
标记方法应符合：技术方法简单、产率高，且重复性好；标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性；酶标志物稳定，应避免酶、抗体（抗原）以及酶标志物各自形成聚合物等。1.戊二醛交联法：同源双功能交联剂（1）一步法：连接AP。 ①优点：操作简便、有效，重复性好。②缺点：交联时分子间比例不严格，大小不一，影响效果。（
简述酶标记抗体的方法步骤
1、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 原理 戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白