DNA的提取和纯化
1 DNA提取⑴ 新鲜外周静脉血3~5ml，以ACD（柠檬酸纳缓冲液）1/7体积抗凝；⑵ 3500rpm 15分钟离心，吸除上层血浆；⑶ 加5倍体积蒸馏水（灭菌），摇匀，静置5~10分钟，3500rpm15分钟离心，去上清，（若沉淀不够，可重复1~2次）；⑷ 吸取沉淀（少许液体）放入1.5ml离心管，STE 清洗2次；12000rpm 7~8分钟离心；⑸ 去上清后加0.5mlSTE，10%SDS 25~30ml，蛋白酶-K 5μl（100μg/ml）37℃消化过夜，直至沉淀物溶解为止；⑹ 等体积饱和酚，倒转摇匀10分钟。12000rpm 5分钟，离心，吸上层入另一1.5ml离心管；勿吸入蛋白层；⑺ 上清液加等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：10），倒转混匀10分钟。12000rpm 5分钟，离心，吸上层入另一1.5ml离心管；⑻ 上清液加等体积氯仿：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上清入另一管；......阅读全文
DNA的提取和纯化
1 DNA提取⑴ 新鲜外周静脉血3~5ml，以ACD（柠檬酸纳缓冲液）1/7体积抗凝；⑵ 3500rpm 15分钟离心，吸除上层血浆；⑶ 加5倍体积蒸馏水（灭菌），摇匀，静置5~10分钟，3500rpm15分钟离心，去上清，（若沉淀不够，可重复1~2次）；⑷ 吸取沉淀（少许液体）放入1.5ml离心管
质粒DNA的大量提取和纯化实验
碱法 实验材料 细菌 试剂、试剂盒 ST
质粒DNA的大量提取和纯化实验
实验材料 细菌试剂、试剂盒 STE酚 氯仿NaClPEG乙醇仪器、耗材 离心管离心机抽干机实验步骤 1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的细菌培养液250 ml，4 ℃下5000 g离心15分钟,弃上清,将离心管倒置使上清液全部流尽。2、将细菌沉淀重新悬浮于50 ml用冰预冷的STE中（此步可省略
质粒dna的提取和纯化方法有哪些
碱裂解法、柱纯化法、煮沸法
DNA提取纯化技术概述
质粒DNA的提取与纯化质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1 kb至200 kb以上不等。通常情况下，质粒可持续稳定地处于染色体外的游离状态，具有自主复制功能；但在一定条件下也会可逆地整合到宿主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已成为核酸克隆和测序最常用的载体。质
质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步： ①细菌的培养和质粒的扩增 ②细菌菌体的裂解 ③质粒DNA的纯化 本实验采取的菌体
质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方
如何对提取的DNA纯化
质粒DNA的提取、纯化和电泳检测摘要本实验通过碱变性法提取E.coli DH5α(pUC19)的质粒DNA,并且通过一系列的分离纯化技术将其质粒DNA与染色体DNA、RNA、蛋白质等杂质分开从而得到纯化的质粒DNA分子。通过琼脂糖凝胶电泳可以通过DNA条带的位置来大致判断其分子大小,也可以将实际电泳
人用重组DNA蛋白制品提取和纯化
制品的提取、纯化主要依赖于各种蛋白质分离技术。采用的分离纯化方法或技术，应能适用于规模化生产并保持稳定。应对纯化工艺中可能残存的有害物质进行严格检测，这些组分包括固定相或者流动相中的化学试剂、各类亲和色谱柱的脱落抗体或配基以及可能对目标制品关键质量属性造成影响的各种物质等。 采用细胞培养或酵母
质粒DNA的大量提取和纯化有哪些步骤
大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。区别：1.大提用于大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。2.一般试剂盒中大提比
质粒DNA的大量提取和纯化实验——碱法
在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA,为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。实验材料细菌试剂、试剂盒STE酚 氯仿NaClPEG乙醇仪器、耗材离心管离心机抽干机实验步骤1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的
DNA提取方法DNA－提取后纯化：将－DNA－与色谱柱结合
离液盐对于裂解至关重要,而且对于将 DNA(或 RNA)与色谱柱结合也是如此。此外,为了增强和影响核酸与二氧化硅的结合,还添加了酒精。大多数情况下这是乙醇,但有时可能是异丙醇。乙醇百分比和体积有很大的影响。太多,你会带入大量降解的核酸和小物种,这会影响 A260 读数并降低你的一些产量。太少,可能难
DNA提取纯化新技术浅谈——核酸电泳纯化技术
核酸的提取和纯化是法医DNA物证检验的关键技术之一，目前实验室最常用的方法包括核酸纯化柱（Spin column）磁珠法和clean-up系统，磁珠法由于操作简便、快速，能够提取到高纯度的核酸DNA,并且可以自动化，因此成为目前法医DNA实验室核酸提取纯化的主要手段。但磁珠法由于磁珠吸附DN
质粒DNA的提取与纯化——碱解法
质粒DNA提取可以：（1）快速纯化质粒；（2）用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。一、实验目的与原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体
质粒DNA的碱裂解法提取与纯化
细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已
常规组织样本核酸（DNA/RNA）提取纯化
20 分钟内快速纯化高品质，高产量，即用型 DNA（见图 20）多种规格可选择：Mini Kit 可处理 25 mg 组织，Micro Kit 可处理小于 10 mg 组织完全去除污染物和抑制剂可在 QIAcube 上进行自动化纯化表1 QIAamp DNA Mini Kit纯化各类样本的核酸产量样
酶的提取和分离纯化
(一)细胞破碎处理 许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法是指
酶的提取和分离纯化
(一)细胞破碎处理 许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法是指利用
RNA－的提取和纯化实验
虽然 FDD 利用了真核 mRNA 的多聚腺苷酸 [poly(A)+] 位点，但并不推荐使用 poly(A)+RNA，因为在反转录反应中可能污染寡核苷酸，并因此增加假阳性的概率。所以建议使用总 RNA 做 FDD 分析。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒氯仿焦
RNA－的提取和纯化实验
试剂、试剂盒 氯仿 焦碳酸二乙酯 乙醇 异丙醇 苯酚-胍盐单相溶液 磷酸盐缓冲液
酶的提取和分离纯化
(一)细胞破碎处理 许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法
RNA－的提取和纯化实验
试剂、试剂盒 氯仿焦碳酸二乙酯乙醇异丙醇苯酚-胍盐单相溶液磷酸盐缓冲液仪器、耗材 离心机和转头移液器离心管锥形管平板匀浆器实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的 H20(GenHimterR105)乙醇70% 乙醇洗液（用 DEPC 处理过的 H20 配制）
质粒DNA的制备和纯化
实验概要质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1~200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型：
法医学DNA提取纯化试剂与DNA自动提取仪的研制课题通过验收
“法医学DNA提取、纯化试剂与DNA自动提取仪的研制”课题通过验收 2010年6月30日，由公安部物证鉴定中心承担的“十一五”国家科技支撑计划“物证信息挖掘与综合应用关键技术研究”项目“法医学DNA提取、纯化试剂与DNA自动提取仪的研制”课题在北京通过公安部主持的课题验收。 该课题以
基因组DNA提取纯化的注意事项
大多数动物组织可以用裂解缓冲液和蛋白酶/蛋白酶 K 进行高效裂解。在加入裂解液之前需要将组织切成小块，有条件的话建议使用 TissueLyser 或研钵等提前进行均质化。骨骼肌，心脏，皮肤等组织含有收缩蛋白，结缔组织和胶原蛋白，所以利用蛋白酶 / 蛋白酶 K 进行充分消化是必须的。FFPE
信使RNA的提取、分离和纯化
真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼
核酸提取纯化原则和要求
1、保证核酸一级结构的完整性 2、排除其它分子的污染（如提取DNA时排除RNA的干扰） 3、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子 4、尽可能降低蛋白质、多糖和脂类等大分子物质
蛋白质提取和纯化
蛋白质提取和纯化（主要内容如下）Protein Extraction Protein PurificationProtein PrecipitationColumn PreparatioinQ & A Posted in the Method ForumProtein ExtractionWhole
质粒DNA的大量提取、纯化及棉花的遗传转化
实验试剂 1. STE [0.1 mol/L NaCI、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 1 mmol/LEDTA (pH 8.0)] 2. 溶液I [50 mmol/L蔗糖、25 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 10 mmol/L EDTA (pH8.
质粒DNA的大量提取、纯化及棉花的遗传转化
实验试剂1. STE [0.1 mol/L NaCI、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 1 mmol/LEDTA (pH 8.0)]2. 溶液I [50 mmol/L蔗糖、25 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 10 mmol/L EDTA (pH8.0)]