RNA的提取和纯化实验
试剂、试剂盒 氯仿焦碳酸二乙酯乙醇异丙醇苯酚-胍盐单相溶液磷酸盐缓冲液仪器、耗材 离心机和转头移液器离心管锥形管平板匀浆器实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的 H20(GenHimterR105)乙醇70% 乙醇洗液(用 DEPC 处理过的 H20 配制)异丙醇苯酚-胍盐单相溶液(推荐 RNApure,GenHunterP501-P503)磷酸盐缓冲液(PBS)2. 离心机和转头小离心机3. 专用设备50 ml 锥形管1.5 ml 小离心管1000ul(原文为 ml。—译者改)移液器100~150 mm 平板P10 移液器Pdytron 匀浆器(用于从组织中提取 RNA)二、方法第一步:RNA 提取方法 1: 从组织培养物中提取 RNA1. 如果细胞贴在瓶壁或平板上,则倒掉培养基,将平板置于冰上。2. 如果细胞是悬浮的,旋转离下细胞,并除去培养基。3. 用 10~20 ml 的冷磷酸盐......阅读全文
RNA-的提取和纯化实验
虽然 FDD 利用了真核 mRNA 的多聚腺苷酸 [poly(A)+] 位点,但并不推荐使用 poly(A)+RNA,因为在反转录反应中可能污染寡核苷酸,并因此增加假阳性的概率。所以建议使用总 RNA 做 FDD 分析。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒氯仿焦
RNA-的提取和纯化实验
试剂、试剂盒 氯仿 焦碳酸二乙酯 乙醇 异丙醇 苯酚-胍盐单相溶液 磷酸盐缓冲液
RNA-的提取和纯化实验
试剂、试剂盒 氯仿焦碳酸二乙酯乙醇异丙醇苯酚-胍盐单相溶液磷酸盐缓冲液仪器、耗材 离心机和转头移液器离心管锥形管平板匀浆器实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的 H20(GenHimterR105)乙醇70% 乙醇洗液(用 DEPC 处理过的 H20 配制)
RNA提取与纯化
实验概要掌握RNA提取的基本技术,了解RNA提取过程中的各种注意事项。实验原理RNA提取是分子生物学实验中难度较大的实验技术。 RNA提取和DNA提取有类似的地方,因为它们都是核酸,都具有较好的水溶性。提取RNA首先破碎细胞,然后用提取液将RNA溶出,反复抽提去除蛋白质,加入乙醇沉淀RNA,将RNA
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
动物组织RNA提取及纯化
实验概要提取样品组织中的RNA并消除DNA污染实验原理Trizol裂解细胞使RNA释放beta巯基乙醇一直RNase活性酚-氯仿抽提分离RNARNase-Free DNase消除DNA污染主要试剂Trizol无水乙醇氯仿(三氯甲烷)异丙醇RQ1 RNase-Free DNase(Promega,M6
纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA
实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织,直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织(0.05~0.3 g)在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿,混合均匀,冰浴 15 分钟
信使RNA的提取、分离和纯化
真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构(m7G)和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly(A)尾,通常用Poly(A+)表示。这种结构为真核mRNA的提取,提供了极为方便的选择性标志,寡聚(dT)纤维素或寡聚(U)琼
信使RNA的mRNA提取分离纯化
真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构(m7G)和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly(A)尾,通常用Poly(A+)表示。这种结构为真核mRNA的提取 ,提供了极为方便的选择性标志,寡聚(dT)纤维素或寡聚(U)
RNA提取纯化的注意事项
由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。关于 RNA and RNases,你应该了解些什么?RNases 是非常稳定和活跃的一种酶,一般不需要辅助因子的功能,因而在实验室内 RNA 很容易被降解如果不预先消除可能的 RNase 污染,请不要使用任何塑
病毒RNA提取实验
病毒RNA提取可以:(1)用于RNA病毒复制机制研究;(2)用于反向遗传学研究;(3)用于分子病毒学其他研究。实验方法原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料TMV病毒液试剂、试剂盒TE-饱和酚:氯
总RNA提取实验
实验方法原理 GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用,将促使核蛋白复合体的解离,使RNA 与蛋白质分离,并将RNA 释放到溶液中。而进一步从复合体中纯化RNA ,则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行,采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚将使RNA 进入水相
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr
真菌RNA提取实验
真菌RNA的提取可以:(1)用于真菌RNA干扰机制研究;(2)用于cDNA文库构建等研究;(3)用于真菌分子生物学相应研究。实验方法原理液氮研磨可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成
动物RNA提取实验
SV总RNA试剂盒提取法 Trizol试剂提取法 实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA
植物RNA提取实验
实验方法原理 独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,
真菌RNA提取实验
液氮研磨法 实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚
植物RNA提取实验
直接研磨法 液氮研磨法 实验方法原理 通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离
病毒RNA提取实验
实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料 TMV病毒液试剂、试剂盒 TE-饱和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE缓冲液双菌水仪器、耗材 冷冻台式离心机低温真空干燥仪电泳仪电泳槽实验步骤 一、实验
动物RNA提取实验
实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养细胞和白细胞中提取纯化完整总RNA,方法简单、快速。该系统以膜为基础,根据组织类型的不同,每次最多可纯化60 mg 组织。系统包含DNase 处理步骤,直接在小离
总RNA提取实验
实验方法原理 一些公司推出的总RNA 提取试剂盒,可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RNA 酶抑制剂,异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇,加上整个操作都在冰浴下进行,这样就能显著降低RNA 的
病毒RNA提取实验
TE-饱和酚/氯仿提取法 实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获
Trizol法提取总RNA的纯化要求
1.纯化后不应存在对酶(如逆转录酶)有抑制作用的物质。2.排除有机溶剂和金属离子的污染。3.蛋白质、多糖和脂类分子等的污染降到最低程度。4.排除DNA分子的污染。
常规组织样本核酸(DNA/RNA)提取纯化
20 分钟内快速纯化高品质,高产量,即用型 DNA(见图 20)多种规格可选择:Mini Kit 可处理 25 mg 组织,Micro Kit 可处理小于 10 mg 组织完全去除污染物和抑制剂可在 QIAcube 上进行自动化纯化表1 QIAamp DNA Mini Kit纯化各类样本的核酸产量样
植物总RNA的快速提取与纯化
一、原理RNA包括rRNA、tRNA和mRNA等,大部分通常是以核蛋白复合物的形式存在的。通过SDS、苯酚处理使蛋白质变性并沉淀。利用LiCl溶解双链DNA的特性去除DNA,经乙醇沉淀得到总RNA。纯度高、完整性好的RNA,即可用于Northern杂交、纯化mRNA、cDNA合成和体外翻译等进一步的
利用-Marligen-总-RNA-快速纯化系统纯化总-RNA-实验
由 Marligen Biosciences 提供的 Rapid Total RNA System 可从各种样品中提取 RNA,且产量和质量非常稳定。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒乙醇β-巯基乙醇仪器、耗材转子-定子均化器或类似设备Marligen Rap
利用-Marligen-总-RNA-快速纯化系统纯化总-RNA-实验
试剂、试剂盒 乙醇 β-巯基乙醇 仪器、耗材 转子-定子均化器或类似设备 Marligen Ra
纯化RNA实验——从培养的细胞中纯化总RNA
实验材料细胞试剂、试剂盒RNA 提取缓冲液变性液水饱和酚仪器、耗材培养皿Falcon 2063 管实验步骤1. 取 1 个细胞已长满的 100 ml 培养皿,吸出培养液,加 2 ml RNA 提取缓冲液,用橡胶刮棒刮下细胞。RNA 提取缓冲液:变性液,20 mlβ-巯基乙醇,0.144 ml2 mo
利用-Marligen-总-RNA-快速纯化系统纯化总-RNA-实验
试剂、试剂盒 乙醇β-巯基乙醇仪器、耗材 转子-定子均化器或类似设备 Marligen Rapid Total RNA System实验步骤 一、材料1.缓冲液、溶液和试剂乙醇,70%和100%β-巯基乙醇2.特殊设备转子-定子均化器或类似设备3.其他Marligen Rapid Total RNA
使用-Trizol-纯化-RNA-实验
RNA 分离的酚基试剂的生产以 Chomczynski 方案为基础。这些方案在从富含 RNA 酶的组织如胰腺中获取 RNA 时最有用。这里介绍的是随 Invitrogen 的 Trizol 试剂出售的方案的摘要,经 Invitrogen 允许做了修改。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者: