DNA的提取和纯化
1 DNA提取⑴ 新鲜外周静脉血3~5ml，以ACD（柠檬酸纳缓冲液）1/7体积抗凝；⑵ 3500rpm 15分钟离心，吸除上层血浆；⑶ 加5倍体积蒸馏水（灭菌），摇匀，静置5~10分钟，3500rpm15分钟离心，去上清，（若沉淀不够，可重复1~2次）；⑷ 吸取沉淀（少许液体）放入1.5ml离心管，STE 清洗2次；12000rpm 7~8分钟离心；⑸ 去上清后加0.5mlSTE，10%SDS 25~30ml，蛋白酶-K 5μl（100μg/ml）37℃消化过夜，直至沉淀物溶解为止；⑹ 等体积饱和酚，倒转摇匀10分钟。12000rpm 5分钟，离心，吸上层入另一1.5ml离心管；勿吸入蛋白层；⑺ 上清液加等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：10），倒转混匀10分钟。12000rpm 5分钟，离心，吸上层入另一1.5ml离心管；⑻ 上清液加等体积氯仿：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上清入另一管；......阅读全文
质粒DNA的大量提取、纯化及棉花的遗传转化
实验概要本实验从转化农杆菌中大量提取质粒DNA并纯化，利用离体子房注射法将外源基因导入棉花，获得转基因棉花。主要试剂1. STE [0.1 mol/L NaCI、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 1 mmol/LEDTA (pH 8.0)]2. 溶液I [50 mmol/L蔗
质粒DNA的大量提取、纯化及棉花的遗传转化
实验试剂1. STE [0.1 mol/L NaCI、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 1 mmol/LEDTA (pH 8.0)]2. 溶液I [50 mmol/L蔗糖、25 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 10 mmol/L EDTA (pH8.0)]
质粒DNA的大量提取、纯化及棉花的遗传转化
实验试剂1. STE [0.1 mol/L NaCI、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 1 mmol/LEDTA (pH 8.0)]2. 溶液I [50 mmol/L蔗糖、25 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 10 mmol/L EDTA (pH8.0)]
质粒DNA的大量提取、纯化及棉花的遗传转化
实验试剂1. STE [0.1 mol/L NaCI、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 1 mmol/LEDTA (pH 8.0)]2. 溶液I [50 mmol/L蔗糖、25 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 10 mmol/L EDTA (pH8.0)]
土壤微生物总DNA提取及纯化
实验概要从土壤微生物中提取总DNA并纯化，高质量的DNA可用于后续文库构建。主要试剂TENP缓冲液(50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0)PBS缓冲液(137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L
GenStar基因组DNA提取纯化产品选择指南
基因组DNA相对稳定，故其提取方法也相对简单。通常细胞通过表面活性剂处理，释放出基因组DNA，经过蛋白酶和RNA酶消化后，经有机溶剂抽提和乙醇沉淀或过柱纯化即可获得一定量的基因组DNA。目前商品化的基因组DNA提取试剂盒分为溶液型和离心吸附柱型两种。溶液型产品价格经济，产率高，可获取适用于建立文库的
质粒DNA的分离、纯化和鉴定
材料、设备及试剂 一、材料 含质粒的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管(又称eppendorf管),离心管架。 二、设备 微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 台式高速离心机，恒温振荡摇床， 高压蒸汽消毒器(灭菌锅)， 涡旋振荡器， 电泳仪，琼脂糖平板
DNA和RNA提取原理
TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，R
RNA－和－DNA－提取：洗脱
DNA 提取方案的还剩余IDE步骤步就是从硅胶中释放纯 DNA 或 RNA。对于 DNA 制备,通常使用 pH 值为 8-9 的 10 mM Tris。DNA 在弱碱性 pH 值下更稳定,在缓冲液中溶解得更快。即使对于 DNA 颗粒也是如此。水的 pH 值往往较低,低至 4-5,并且高分子量 DNA
关于鱼精蛋白的提取和纯化介绍
1、鱼精蛋白的提取： 成熟精巢组织——均浆——硫酸酸解——NACL溶液提取——四层纱布过滤——加乙醇沉淀杂蛋白——离心——上清液——加TCA溶液沉淀——离心——鱼精蛋白硫酸盐 [1] 2、鱼精蛋白的纯化： 分离提取后的鱼精蛋白必须纯化。利用鱼精蛋白的电荷和分子大小，分别采用聚丙烯酰胺等电聚
病毒DNA和RNA的简易纯化技术
生物通报道：EZ1病毒迷你试剂盒（EZ1 Virus Mini Kit）是一种能够用于生命科学研究中的病毒DNA和RNA提纯的新型试剂盒。这种试剂盒提供了一种全自动的同步纯化来自血清、血浆和无细胞体液中的病毒DNA和RNA的能力，并且能对下游分析提供高灵敏度的检测。BioRobot® EZ1工作区的
质粒DNA的分离、纯化和鉴定－（三）
操作步骤 一、 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS的DH5α菌种接种在LB固体培养基（含50μg/ml Amp）中, 37℃培养12-24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基（含50μg/ml Amp）中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。 二、 质粒DNA
FFPE组织样品的DNA和RNA纯化
福尔马林固定后石蜡包埋的组织简称为FFPE样品。将组织在 4–10% 的福尔马林中迅速固定。 固定时间限制在 14–24 小时 (越长的固定时间将越容易导致DNA的片段化，对下游实验不利)。将固定组织彻底脱水 (彻底脱去福尔马林残余，因为其阻碍蛋白酶K的作用)。 纯化DNA时，使用新鲜从石蜡块上切下
真菌的DNA和RNA提取方法
一、真菌DNA的提取(方法一)1.实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1％SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:异戊
真菌的DNA和RNA提取方法
搞真菌基因功能研究的不可避免的总要涉及到DNA和RNA提取，由于真菌中有较多的多糖成分影响到所提DNA和RNA的质量和后续的分析。因此一个高质量的、实惠的提取方法是我们的优先选择，在此分享一下我一直在用的提取方法，供大家参考。真菌DNA的提取（方法一）1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2
细菌总DNA的提取和鉴定
【目的和要求】1.学会CTAB法提取细菌总DNA。2.掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。【实验原理】DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后，必须将其中蛋白质去除。CTAB（溴代十六烷基三甲胺）是一种去污剂，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中可溶并且稳定存在，若
真菌的DNA和RNA提取方法
一、真菌DNA的提取(方法一)1.实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1％SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:异戊
真菌的DNA和RNA提取方法
搞真菌基因功能研究的不可避免的总要涉及到DNA和RNA提取，由于真菌中有较多的多糖成分影响到所提DNA和RNA的质量和后续的分析。因此一个高质量的、实惠的提取方法是我们的优先选择，在此分享一下我一直在用的提取方法，供大家参考。真菌DNA的提取（方法一）1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2
RNA－和－DNA－提取的降解问题
降解问题是RNA制备中常常到的问题。因为在 RNA 提取过程中,样品储存不当或裂解效率低等情况都会导致降解。对于 DNA 提取,降解不是一个大问题,因为对于 PCR,DNA 可以被剪切并且工作正常,如果不希望有较多剪切的 DNA,可以使用弱裂解的方法。
纯化DNA实验_基因组DNA的快速纯化
试剂、试剂盒尾部缓冲液蛋白酶 K仪器、耗材离心管玻璃棒实验步骤第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中，加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K，在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液（配 25 ml）50 mmol/L
质粒DNA纯化和内毒素去除
质粒是在染色体或核区之外能够自主复制的双链闭合环状DNA分子，以超螺旋状态存在，几乎完全裸露，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。 质粒DNA广泛应用于基因工程、生物医学的研究以及生物产品的开发和应用。质粒DNA纯化
真菌DNA和RNA提取方法
真菌DNA和RNA提取方法一、真菌DNA的提取(方法一)实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1％SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(p
酶的提取和分离纯化实验方法
（一）细胞破碎处理许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法是指利用甲醛、丙
核酸提取和纯化控制程序
核酸提取和纯化控制程序 1. 目的：规定DNA和RNA核酸样本提取和纯化实验应遵守的操作。 2. 适用范围：生物样本提取DNA和RNA核酸，并包括对核酸样品的长期保存。 3. 基本定义和术语： DNA，脱氧核糖核：基因组DNA构成了生物体的完整遗传信息。几乎所有生物体的基
SPA的提取、纯化与鉴定（煮沸提取法和溶菌酶消化法）
（一） SPA的提取SPA提取的方法很多，包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下：1．煮沸提取法⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂培养基上，37℃培养20h~24h。⑵ 以 0.15mol/L pH5.9PB液将菌苔洗下，配成10%(V/V)的悬液。⑶
总RNA的提取和纯化的操作规程
完整RNA 的提取和纯化，是进行RNA 方面的研究工作，如Nothern杂交、mRNA 分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地使核蛋白复合体变性；３），对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）
质粒DNA的纯化
聚乙二醇沉淀法质粒DNA氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA(一)聚乙二醇沉淀法提取质粒DNA1)将核酸溶液所得]转入15mlCorex 管中，再加3ml 用冰预冷的5mol/L LiCl溶液，充分混匀，用合适转头于4℃下以10 000转/分离心10分钟。LiCl可沉淀高分子RNA。2)将上
DNA纯化的方法
DNA纯化首先利用琼胶电泳将不同分子量的DNA片段分开,将某一特定分子量区域的琼胶切下,利用DNA extraction kit将DNA从琼胶中溶出并浓缩.实验材料( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400, 0.25% bromophenol blue,0.25% xy
DNA纯化的方法
DNA纯化首先利用琼胶电泳将不同分子量的DNA片段分开,将某一特定分子量区域的琼胶切下,利用DNA extraction kit将DNA从琼胶中溶出并浓缩.实验材料( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400, 0.25% bromophenol blue,0.25% xy
DNA纯化实验
PCR清洁试剂盒纯化法 实验方法原理 硅胶膜可在高盐条件下结合DNA，又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油