RNA提取的流毒非浅的经典误区

RNA提取的流毒非浅的经典误区(RNA提取的实践指南) 最近碰到了好几个RNA提取的初学者来实验室学习如何提取RNA,对于如此简单的操作,却有如此多的人提取不出来,细问一下,原来他们的知识来源都是书本上或者网上的“RNA提取注意事项一类”的所谓经验,其实,他们提取不出来的真正原因,恰恰是他们严格遵守了所谓的经验,精力全放在不需要注意的地方,结果搞得自己很紧张, 真正需要注意的操作反而没有注意了。下面我就结合生物通上常见的RNA 操作注意事项与实验技巧的文章 (http://www.ebiotrade.com/newsf/2004-3/B2004312163158.htm)指出提取RNA的流毒非浅的常见误区: 1.“ 如果可能,实验室应辟出专门RNA操作区,离心机、移液枪、试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁,并定期进行消毒。” 完全错误,任何普通的试验台,不需要任何消毒,暴露在空气中就可......阅读全文

RNA提取的流毒非浅的经典误区

RNA提取的流毒非浅的经典误区(RNA提取的实践指南) 最近碰到了好几个RNA提取的初学者来实验室学习如何提取RNA,对于如此简单的操作,却有如此多的人提取不出来,细问一下,原来他们的知识来源都是书本上或者网上的“RNA提取注意事项一类”的所谓经验,其实,他们提取不出来的真正原因,恰恰是他们严格遵守

RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)

一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后

RNA的提取

一、准备试剂:氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)。二、操作步骤:1. 匀浆处理:a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞

RNA的提取

【实验原理】Trizol 试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA 的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA 的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后,RNA 可以通过异丙醇沉淀获得。【实验仪器】1. 匀浆机2. 低温离心机3. 涡旋器【试剂及配制】1

核酸提取——RNA提取与DNA的提取

核酸分为两大类:一类为核糖核酸(RNA),另一类为脱氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量极大,从数万到亿万。核酸是两性化合物,在一定的等电点溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有机溶剂。细胞内的核酸常和蛋白质结合成核蛋白。核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度的电解质溶液中 的溶解度有显著区别,在一定浓

核酸提取——RNA提取与DNA的提取

核酸分为两大类:一类为核糖核酸(RNA),另一类为脱氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量极大,从数万到亿万。核酸是两性化合物,在一定的等电点溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有机溶剂。细胞内的核酸常和蛋白质结合成核蛋白。核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度的电解质溶液中 的溶解度有显著区别,在一定浓

真空采血管抽血顺序及“经典误区”

真空采血管的抽血顺序一直存在很大的争议,到底是红帽管先抽还是蓝帽管先抽?笔者整理出相关资料供大家参考,如有不同之处,欢迎大家在文末留言讨论。真空采血管抽血顺序,到底哪个先哪个后?笔者查阅人卫版护理教科书《基础护理学》、人卫版《临床检验基础》、北京协和医院参考CLSI(H3-A6)制定静脉血推荐采集顺

总RNA的提取

 完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)有效地将RN

总RNA的提取

完整RNA 的提取和纯化,是进行RNA 方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA 分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)

RNA提取

RNA提取(主要内容如下)Tips for Handing RNA Total RNA IsolationmRNA IsolationrRNA IsolationOthersQ & A posted in the Method Forum  Basic Procedures for Handing

总RNA的提取(Trizol法提取)

在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用。1.      提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml

生物磁珠提取核酸的常见误区

 “生物磁珠提取核酸的常见误区“信息内容由济南皓淼医疗设备有限公司自行提供,我公司可为您提供生物技术、科研、医疗等实验室常用设备和相应解决方案,如果有需要,我公司或留言咨询洽谈。生物磁珠提取核酸的常见误区误区一:磁珠使用的越多,提取效果越好有很多老师喜欢在提取效果不佳的时候,增加磁珠的用量,认为磁珠

总RNA提取(Trizol提取)

在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase 的作用。1. 提取组织RNA 时,每50~100mg 组织用1ml

样品总RNA的提取

实验概要本实验介绍了样品总RNA的提取方法。完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即:样品细胞或组织的有效破碎;有效地使核蛋白复合体变性;对内源RNA酶的

细胞总RNA的提取

提取细胞RNA的步骤:1)  六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol,冰上放置5min,枪头吹打。2)  将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中,加入氯仿0.2ml/管,用力振摇15s。15-30℃下孵育2-3min,离心(4℃,12,000g,15min)。3)  离心后液体分为三层(上层-无色

小麦总RNA的提取

实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片,迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中,剧烈震荡。

细胞RNA的提取方法

(一)细胞总RNA的提取1、6孔板细胞汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5 min。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中,加新开的氯仿0.2 ml,轻摇15 s。3、室温静置

小麦总RNA的提取

实验概要从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备。实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄

肝脏细胞RNA的提取

一.原理RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关重要的,

经典索氏提取法原理

     测定脂肪是将样品放在抽提筒内,以水浴蒸馏冷凝的Ether进行回流浸提,一般要十几小时。  热浸提提取法原理:  热浸提一油重法由于样品处于高温溶剂中,分子运动加快。使脂肪浸出速度加快,因而大大地缩短浸提时间,从而加快测定速度,一般完成样品的整个提取过程不到2小时。铝杯代替玻璃瓶,电热板代替

RNA提取原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成

RNA提取原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成

RNA提取时RNA降解原因

1 ) 新鲜细胞: 裂解液的量不足,使得裂解不充分。 2 ) 新鲜组织: 某些含有内源性核酸酶的样品,很难避免RNA酶的降解,建议采用的方法为在液氮条件下将组织研碎,并且,匀浆时采用更多的裂解液。 3 ) 冷冻样品: 样品取材后应该迅速置于液氮中冷冻存放,然后转移到-70℃冰箱存

植物总RNA的提取实验

研磨法             实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂

植物总RNA的提取实验

实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂沉淀总RNA, 洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA 的分离和纯化方法。实验材料 植物RNA试剂、试剂盒 尿素Tris-HClN

RNA-的提取和纯化实验

虽然 FDD 利用了真核 mRNA 的多聚腺苷酸 [poly(A)+] 位点,但并不推荐使用 poly(A)+RNA,因为在反转录反应中可能污染寡核苷酸,并因此增加假阳性的概率。所以建议使用总 RNA 做 FDD 分析。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒氯仿焦

小麦总RNA的提取方法

实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片,迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中,剧烈震荡。

RNA-的提取和纯化实验

            试剂、试剂盒 氯仿 焦碳酸二乙酯 乙醇 异丙醇 苯酚-胍盐单相溶液 磷酸盐缓冲液

植物组织总RNA的提取

实验概要由于RNA分子的结构特点,容易受RNA酶的攻击反应而降解,加上RNA酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA酶,人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染,因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换(使用一

植物总RNA的提取规程

一、实验目的掌握植物总RNA提取的原理和方法二、实验原理RNA的提取:破坏细胞膜—除去蛋白—除去DNA—除去盐离子。RNase是一类生物活性极其稳定的酶类,能耐高温、耐酸、耐碱,高压灭菌处理也不能使其完全失活。在提取RNA实验中,要尽量抑制RNase的活性。•DEPC(焦磷酸二乙酯)是很强的RNas