血与泪的RNA抽提抽提经验
对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提，总会碰到问题呢？组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提 RNA 不容易降解。现有的 RNA 抽提试剂，都含有快速抑制 Rnase 的成分。在培养细胞中加入裂解液，简单的混匀，即可使所有的细胞与裂解液充分混匀，细胞被彻底裂解。细胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的 Rnase，所以 RNA 得以保持完整。也就是说，培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分接触，所以其 RNA 不容易被降解；反过来讲，组织中的 RNA 之所以容易被降解，是因为组织中的细胞不容易迅速与裂解液充分接触所致。因此，假定有一种办法，在抑制 RNA 活......阅读全文
血与泪的RNA抽提抽提经验
对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提，总会碰到问题呢？组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组
RNA抽提经验
对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提，总会碰到问题呢？ 组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降
RNA抽提－成功经验法则
本期专文要来跟大家讨论的话题是核糖核酸(RNA)的萃取，看到这里各位心中可能已经起了疑问: RNA 萃取不是很简单吗?只要照着标准步骤操作，加一加试剂就完成了，有必要大费周章特地开篇幅来谈这件事吗?其实越简单的东西遇到困难时就越难解，各位看倌就请耐着性子，听我们娓娓道来。Lab 的经验和客户
核酸抽提经验及原理
1、核酸抽提原理 简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。 经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐
RNA抽提注意事项和经验指南1
背景介绍实验前方法/试剂的选择问题解答 (外源性污染导致的问题不在本解答考虑中)RNA 抽提的“三大纪律八项注意”Rnase 污染的10大来源RNase 和 DEPC 处理RNA 抽提的10大窍门提高 RNA 得率经典抽提小技巧特殊组织的抽提样品冻融的影响RNA 质量的判断RNAguard：使降解成
RNA抽提－成功经验法则大公开!
本期专文要来跟大家讨论的话题是核糖核酸(RNA)的萃取，看到这里各位心中可能已经起了疑问: RNA 萃取不是很简单吗?只要照着标准步骤操作，加一加试剂就完成了，有必要大费周章特地开篇幅来谈这件事吗?其实越简单的东西遇到困难时就越难解，各位看倌就请耐着性子，听我们娓娓道来。 Lab 的经验和
RNA抽提注意事项和经验指南1
背景介绍实验前方法/试剂的选择问题解答 (外源性污染导致的问题不在本解答考虑中)RNA 抽提的“三大纪律八项注意”Rnase 污染的10大来源RNase 和 DEPC 处理RNA 抽提的10大窍门提高 RNA 得率经典抽提小技巧特殊组织的抽提样品冻融的影响RNA 质量的判断RNAguard：使降解成
RNA抽提注意事项和经验指南2
3：裂解液的选择 – 影响操作方便程度，内源杂质残留的因素常用的裂解液几乎都能抑制 Rnase 活性，因此，选择裂解液的重点是要结合纯化方法一起考虑。只有一个例外：高内源酶含量的样品建议使用含苯酚的裂解液，以增加灭活内源酶的能力。 4：纯化方法的选择 – 影响内源杂质残留。抽提速度的因素对于干净的样
RNA抽提注意事项和经验指南4
经典抽提小技巧 1： Phenol 纯化：将等体积的 1:1 Phenol/Chloroform 加入，剧烈混允 1-2 分钟。高速离心 2 分钟。小心取上清 (80-90%)。决不能取到中间层。可以使用等体积的反应液加入 Phenol/Chloroform 中，同样再取出上清。将两次的上清
RNA抽提注意事项和经验指南3
RNA 抽提的“三大纪律八项注意” 纪律一：杜绝外源酶的污染。注意一：严格戴好口罩，手套。注意二：实验所涉及的离心管，Tip 头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。注意三：实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保 RNase-Free。纪律二：阻止内源酶的活性注意四：选择合适的匀浆方法。注意
RNA抽提指南(TRIZOL法)
RNA抽提指南(TRIZOL法)注意事项：* 全程佩戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。* 使用灭菌的，一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA，避免使用公共仪器所导致的RNA酶交叉污染。例如，使用RNA探针的实验室
核酸抽提
mRNA的分离 与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制
核酸抽提
最糟糕的心态 - 实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？最糟糕的知识 - RNase A 的作用。RNase A 是内切酶，内切
DNA抽提
DNA抽提（主要内容如下）· Working with DNA· DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms· DNA Extraction from Cell and Tissue· Mitochondria DNA Isola
RNA抽提和标记实验
实验方法原理 实验材料 从组织培养收获的细胞 在组织培养中的细胞 冻存的整个组织
RNA抽提和标记实验
实验材料从组织培养收获的细胞在组织培养中的细胞冻存的整个组织试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液（PBS）TRIzol 试剂乙醇乙酸钠EDTANaOHTris-ClTE 缓冲液固定化的 oligo-dT 引物仪器、耗材组织匀浆器热循环仪荧光扫描仪实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1a.
RNA抽提和标记实验
实验方法原理 实验材料 从组织培养收获的细胞在组织培养中的细胞冻存的整个组织试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液（PBS）TRIzol 试剂乙醇乙酸钠EDTA NaOHTris-ClTE 缓冲液固定化的 oligo-dT 引物仪器、耗材 组织匀浆器热循环仪荧光扫描仪实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材
脂肪抽提仪开展脂肪抽提的四个步骤
脂肪抽提仪是 基于索氏抽提法原理研发生产的一款脂肪测定仪器。由于索氏抽提具有方便快捷的特点，因此脂肪抽提仪采用该原理来测定食品中的脂肪含量等，会更有优势，应用 会更加广泛。脂肪抽提仪的工作过程是通过在适当的温度下试剂对样品的浸提，最终实现目标物（如脂肪）的分离。应用脂肪抽提仪开展脂肪抽提，主要可以为
质粒DNA的抽提与纯化
目的 ： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术原理 ： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完
细菌的核酸抽提
DNA Extraction· DNA Extraction from Bacteria (Julie B. Wolf,UMBC)Phenol/chloroform method· DNA Extraction From Bacteria (Triton Method
抽提萃取的特点
提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。不过，一般有机溶剂亲水性越大，与水作两相萃取的效果就越不好，因为能使较多的亲水性杂质伴随而出，对有效成分进一步精制影响很大。
抽提萃取的概念
利用化合物在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中。经过反复多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。萃取时如果各成分在两相溶剂中分配系数相差越大，则分离效率越高、如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙
抽提萃取的分类
萃取的机理既有物理的溶解作用，又有化学的配合作用，是一个复杂的物理溶解过程 。一般而言，萃取那些简单的不带电荷的共价分子时为物理溶解过程。但在大多数情况下，被萃取物与有机相中一种或多种组分发生化学变化，生成新的化学物种后被萃入有机相，这便属于化学过程。按照萃取机理的不同，可分为五种类型： （1
哺乳动物组织样品RNA的抽提
哺乳动物组织样品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提过程中降解，以及尽可能得到最高的RNA抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方法。一、实验材料：Trizol试剂（Invitrogen公司）研钵，匀浆器，镊子，铝箔都高温灭菌即可；二、具体过程：1、样品在离体后应迅速冷冻在液
微量RNA的抽提RNeasy－MinElute－Spin－Column
·为了更好地裂解，细胞数不能大于5×105，细胞过多会减低产率和纯度。 准备工作： 1.在 24 ml 96－100％乙醇 中加入 6 ml 去RNA酶的水。 2.在每 1 ml Buffer RLT 中加入10 ml β-ME (加入β-ME的Buffer RLT可在室温下放置1
基本方案2－RNA－抽提和标记
试剂、试剂盒TRIzol 试剂PBS氣仿乙醇乙酸钠引物Superscript Ⅱ RNase H反转录酶10 X low-T dNTP 混合物EDTATE 缓冲液仪器、耗材RNeasy Maxi 试剂盒组织匀浆机圆底离心管圆锥底离心管水平离心机薄壁 PCR 管热循环仪荧光扫描仪实验步骤展
抽提萃取法展望
展望编辑萃取作为分离和提纯物质的重要单元过程，今后还会得到进一步的发展，其主要发展方向是：（1）研究新的萃取体系和新的萃取工艺；（2）合成和筛选高效萃取剂；（3）研究与发展新型萃取设备，重点应放在设备的自动化、连续化上；（4）开展萃取机理及理论的研究。 [2]
DNA抽提指南(TRIZOL)
按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern a
醇化办法核酸抽提
醇化办法核酸抽提 PC 抽提/醇沉淀办法，是一个永不陈旧办法。牢稳、靠得住、经济、便捷。PC 抽提可以彻底去除氨基酸，醇沉淀可以去除盐，对于普通的整洁的样品(杂质为氨基酸)，该办法足以取得高品质的核酸。固然每每PC 抽提都会亏损一小批核酸(由于没可能将水相所有移取)，以及低液体浓度核酸的
CTAB法抽提核酸
CTAB 法 ①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 0